БОЛЕЗНИ СВИНЕЙ
Представлены результаты клонирования генов X69R, A179L, E248R, I215L и DP96R изолята Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней и анализ их нуклеотидных последовательностей. Полученные клоны пополнили ранее созданную клонотеку, содержащую клоны с 8 генами изолята Krasnodar 06/12. Клоны, содержащие гены X69R, A179L, E248R, I215L и DP96R изолята Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней, будут использованы для получения рекомбинантных белков и изучения их влияния на репродукцию вируса in vitro, их роли в инфекционности вируса, степени выраженности клинических признаков и вирулентности. В работе использовали прокариотический вектор pJET1.2/blunt. Таким образом, имеющаяся в референтной лаборатории по африканской чуме свиней ФГБУ «ВНИИЗЖ» клонотека дополнена плазмидными конструкциями pJET1.2-X69R, pJET1.2-A179L, pJET1.2-E248R, pJET1.2I215L и pJET1.2-DP96R, несущими 5 генов изолята Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней. Доля клонированных генов вируса составила 3,01% генома изолята Krasnodar 07/17, следовательно, общий объем клонотеки достиг 7,82%.
Представлены результаты ретроспективного анализа эпизоотической ситуации по африканской чуме свиней в Российской Федерации, включающего анализ хронологии развития эпизоотии, в котором выделены значимые события при распространении болезни по территории страны. Показан общий тренд и темп эпизоотии африканской чумы свиней 2007–2017 гг. на территории Евразии по числу пораженных стран (1,273 ± 1,272 страны/год) и субъектов Российской Федерации (4,5 ± 2,3 субъекта/год). Также в работе акцентируется внимание на некоторых особенностях эпизоотического процесса в зависимости от сезона года. Рассмотрены вероятные социальные и биологические факторы, способствующие распространению эпизоотии. Обсуждена необходимость дальнейших поисков вероятного биологического вектора и изу чения социальной составляющей, возможно способствующих поддержанию очагов болезни в дикой природе и среди домашних свиней на территории России и стран Восточной Европы.
Представлены результаты клонирования генов X69R, A179L, E248R, I215L и DP96R изолята Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней и анализ их нуклеотидных последовательностей. Полученные клоны пополнили ранее созданную клонотеку, содержащую клоны с 8 генами изолята Krasnodar 06/12. Клоны, содержащие гены X69R, A179L, E248R, I215L и DP96R изолята Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней, будут использованы для получения рекомбинантных белков и изучения их влияния на репродукцию вируса in vitro, их роли в инфекционности вируса, степени выраженности клинических признаков и вирулентности. В работе использовали прокариотический вектор pJET1.2/blunt. Таким образом, имеющаяся в референтной лаборатории по африканской чуме свиней ФГБУ «ВНИИЗЖ» клонотека дополнена плазмидными конструкциями pJET1.2-X69R, pJET1.2-A179L, pJET1.2- E248R, pJET1.2-I215L и pJET1.2-DP96R, несущими 5 генов изолята Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней. Доля клонированных генов вируса составила 3,01% генома изолята Krasnodar 07/17, следовательно, общий объем клонотеки достиг 7,82%.
ЯЩУР
Разработан способ определения концентрации 146S компонента вируса ящура в сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Предложена отрицательная регрессионная модель вида С146S = (30,269 – Ct)/4,155, позволяющая определять значение концентрации 146S частиц вируса ящура на основании установленной величины порогового цикла амплификации (Ct). Экспериментально доказано, что количество 146S компонента, определенного методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием разработанной регрессионной модели и заложенного в прививную дозу противоящурной вакцины, позволяет защитить вакцинированных животных от генерализованной формы ящура типов А, О, Азия-1. Метод ОТ-ПЦР-РВ является высокочувствительным, позволяет быстро и с высокой степенью достоверности оценивать концентрацию 146S антигена в противоящурной вакцине. Способ определения количества 146S частиц методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием регрессионной модели является надежным и характеризуется высокой корреляцией (95,5–99,0%) с результатами реакции связывания комплемента.
Представлена прогностическая оценка возможных рисков заноса ящура из пограничных или сопредельных неблагополучных государств на территорию восьми федеральных округов Российской Федерации. Количественные показатели рисков были определены экспертами, специалистами в области эпизоотологии ящура. Для реализации метода экспертного опроса были определены наиболее значимые пути заноса инфекции на территорию России. По каждому из федеральных округов экспертами была определена балльная оценка риска заноса ящура рассмотренными путями. В результате статистического анализа наибольшая вероятность была определена для Дальневосточного федерального округа. Далее по значимости идут Северо-Кавказский и Сибирский федеральные округа. Исходя из полученных данных, определены основные направления заноса ящура на территорию страны. Для предотвращения возникновения и распространения ящура в зонах риска его заноса, на территории страны проводится профилактическая вакцинация восприимчивого поголовья животных. В результате ее реализации в перечисленных субъектах Российской Федерации с целью недопущения вспышек ящура необходимо создать защитный иммунитет у крупного рогатого скота не менее чем у 81% привитых животных, а среди свиней – не менее чем у 95% привитого поголовья.
Method for determination of foot-and-mouth disease (FMD) virus 146S component concentration with real-time reverse transcription – polymerase chain reaction (rtRT-PCR) in vaccine raw materials is developed. Negative regression model of С146S = (30.269 – Ct)/4.155 type allowing determination of FMDV 146S particle concentrations based on the amplification threshold cycle values (Ct) is proposed. It has been experimentally proven that the quantity of the 146S component determined by the real-time RT-PCR method using developed regression model and contained in the inoculation dose of FMD vaccine confers protection to the vaccinated animals against generalized FMD of A, O, Asia-1 types. rtRT-PCR method is highly sensitive and allows rapid and highly reliable estimation of the 146S antigen concentration in FMD vaccine. The method for 146S particle quantity determination by real-time RT-PCR using the regression model is reliable and demonstrates high correlation (95.5–99.0%) with the complement fixation test results.
БОЛЕЗНИ МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА
Проведены исследования по изучению антигенной и протективной активности экспериментальной ассоциированной вакцины, содержащей в полевой вакцинной дозе антигены из аттенуированных штаммов «ВНИИЗЖ» вируса оспы овец и «ВНИИЗЖ 2003» вируса оспы коз в соотношении 4,24 и 4,24 lg ТЦД50/см3, 4,18 и 4,37 lg ТЦД50/см3 и 4,37 и 4,18 lg ТЦД50/см3 соответственно, а также моновалентных вакцин с инфекционной активностью указанных штаммов с титром 4,5 lg ТЦД50/см3. Введение ассоциированной вирусвакцины не оказывало отрицательного влияния на физиологическое состояние животных и сопровождалось образованием вируснейтрализующих антител в защитных титрах, не отличающихся от титров антител в крови овец и коз при моновалентной иммунизации. Установлено образование в сыворотках крови всех овец и коз, привитых ассоциированными вакцинами, высокого уровня вируснейтрализующих антител в пределах (3,50 ± 0,50)–(4,05 ± 0,22) и (3,58 ± 0,08)–(4,00 ± 0,29) log2 соответственно. Антигенная активность ассоциированных вакцин для коз и овец практически идентична. Не выявлено отрицательного влияния на антигенную активность различных соотношений аттенуированных штаммов вируса оспы овец и оспы коз в прививной дозе. Все овцы, привитые моновалентной против оспы овец и ассоциированными вирусвакцинами, противостояли заболеванию при контрольном заражении вирулентным вирусом оспы овец штамма «Афганский». У трех овец, привитых моновалентной вакциной против оспы коз, выявлено наличие обширной местной реакции, у одной – заболевание оспой в генерализованной форме.
ОБЩИЕ ВОПРОСЫ
Для приготовления гидролизата белков крови исходным сырьем является цельная кровь рогатого скота, сгустки крови и другие отходы сывороточного производства. Изучено влияние сезона заготовки сырья на аминокислотный состав гидролизата белков крови. Работа проводилась на протяжении трех лет. Показано, что содержание аминокислот менялось по сезонам. Пик, как правило, приходился на летние месяцы, в это время количество аминокислот увеличивалось в 1,2–2,3 раза, а в осенне-зимний период понижалось в 1,2–1,4 раза (различия существенны, р < 0,05). Максимум роста глутаминовой и аспарагиновой кислот приходился на ноябрь. Зафиксировано, что их содержание было выше в 1,4 раза по сравнению с предыдущими месяцами (р < 0,01). Увеличение количества аланина, аспарагиновой кислоты, валина, лизина, метионина, пролина, тирозина, треонина и фенилаланина было отмечено в марте в 1,3–1,8 раза (различия существенны, р < 0,05). Количество гистидина, глицина, лейцина, серина и триптофана в начале весны оставалось на прежнем уровне, а количество аргинина, аспарагина, изолейцина в марте уменьшалось в 1,2–1,6 раза (различия существенны, р < 0,01). Установлено, что сезонная динамика аминокислотного состава гидролизата белков крови напрямую была связана с сезонной динамикой физиолого-биохимических показателей крови крупного рогатого скота. Было отмечено, что при существенном изменении абсолютных показателей аминокислот их относительное количество в основном оставалось постоянным.
Амурская область относится к биогеохимической провинции с низким содержанием йода в почве, воде и воздухе, что приводит к поражению щитовидной железы у сельскохозяйственных животных, ослаблению иммунной системы и, следовательно, к повышенной чувствительности к заболеваниям. Разработан новый профилактический йодсодержащий препарат «Вангцейод» на основе природных цеолитов Вангинского месторождения для профилактики йодной недостаточности молодняка крупного рогатого скота. Отличительная особенность цеолита Вангинского месторождения в сравнении с цеолитовыми туфами других месторождений Амурской области и Дальнего Востока в том, что он представлен наиболее эффективными минералами ряда клиноптилолит–гейландит, характеризующимися низким содержанием вредных для организма соединений. При изучении безвредности препарата на белых мышах установлено, что препарат «Вангцейод» не обладает острой токсичностью. Включение его в течение двух месяцев в рацион белых мышей в дозах 1,0 и 2,0 г/кг массы признаков хронической интоксикации также не выявило, о чем свидетельствует 100%-я сохранность мышей в опытных группах по сравнению с контролем (57%). Скармливание мышам препарата в дозе 1,0 г/кг массы способствовало нормализации белкового и углеводного обменов.
Известно, что хищные грибы-гифомицеты играют важную роль в системе профилактических мероприятий при гельминтозах. Отмечено, что сведения о свойствах и влиянии на организм животных соединений, содержащихся в хищных грибах, немногочисленны. Представлены результаты исследования по определению влияния нового микробиологического препарата «Ветом 21.77» на основе Duddingtonia flagrans на биохимический профиль сыворотки крови лабораторных мышей. Препарат назначали животным в дозах 2, 5, 50 и 300 мкл/кг массы. Контроль изучаемых показателей производили до исследования, через 2 и 7 сут после ежедневного применения препарата. Во всех опытных группах показатели сохранялись в пределах физиологической нормы, как и в контрольной, где препарат не применяли. Результаты исследования свидетельствуют о безвредности микробиологического препарата. У мышей, получающих максимальную дозу препарата, регистрировали достоверное увеличение содержания общего белка и альбумина в сравнении с аналоговыми из контроля.
Предложена новая методика определения содержания гликогена в тканях органов пчел, которая значительно отличается от существующих. Применяемый в настоящее время колориметрический метод по Хорейши является длительным и трудоемким, а кроме того, затратным, так как стоимость основного реактива – орцина – довольно высока. Сравнение экономической эффективности двух методов показало, что предлагаемая методика позволяет сократить затраты за счет использования более доступного и недорогого резорцина вместо орцина и сокращения общего времени проведения исследования с 4 до 3 ч 5 мин. Анализ содержания гликогена по усовершенствованной методике проведен на пчелах четырех пород: итало-карпатской, карпатской, приокской, серой горной кавказской. Установлено, что самые высокие показатели гликогена были у пчел приокской породы. Известно, что чем выше содержание гликогена в органах и тканях, тем лучше энергетический обмен у насекомых. Следовательно, пчелы приокской породы обладают более высокой устойчивостью к воздействию неблагоприятных погодных условий и, как следствие, имеют возможность воспроизводства потомства с более высоким иммунитетом. Таким образом, приведенный метод определения уровня гликогена в тканях органов пчел повышает точность диагностирования, играет в целом очень важную роль для определения уровня энергетического обмена насекомых и будет полезен для использования в области пчеловодства.
Представлены данные возрастной динамики гематологических и функциональных показателей крови уток пекинской породы на фоне применения селенорганического препарата ДАФС-25к (в дозе 1,3 мг/кг корма). Для изучения морфофункциональных показателей, начиная с суточного возраста и до 120 сут, у птиц каждые 15 сут отбирали кровь из подкрыльцовой вены утром, до кормления. Для оценки гематологических показателей производили подсчет эритроцитов и лейкоцитов, определяли содержание гемоглобина, показатель гематокрита, рассчитывали цветной показатель крови. В ходе эксперимента отмечено плавное увеличение данных показателей в опытной и контрольной группах. Показано, что у птиц опытной группы все показатели выше, чем у контрольной. Установлено достоверно значимое превышение содержания гемоглобина под влиянием селена в опытной группе в сравнении с контролем на 9,86%. Соответственно, у птиц этой группы был выше и цветной показатель крови (р ≤ 0,05). Биохимический анализ крови включал в себя определение ряда показателей: общий белок, альбумин, мочевая кислота, глюкоза, кальций, фосфор, трансаминазы АЛТ и АСТ. Результаты исследования показали, что во все возрастные периоды содержание общего белка и альбумина у утят опытной группы превышает таковые показатели в контрольной группе. Селенсодержащий препарат оказал положительное влияние на углеводный обмен, обеспечивая высокий уровень обменных процессов у птиц, способствовал оптимизации кальций-фосфорного отношения, что благоприятно сказалось на минеральном обмене и формировании опорно-двигательного аппарата. Полученные показатели АСТ и АЛТ в обеих группах не выходят за рамки референсных значений, что косвенно подтверждает отсутствие токсического воздействия селена на организм уток в применяемых дозировках. Установлено, что ДАФС-25к не только не оказал отрицательного влияния на гематологические и биохимические показатели крови уток пекинской породы, но и способствовал коррекции минерального обмена, снижению воздействия стресс-факторов в критические периоды развития и нормализации функции выделительной системы.
ISSN 2658-6959 (Online)