СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ 146S КОМПОНЕНТА ВИРУСА ЯЩУРА В СЫРЬЕ ДЛЯ ВАКЦИНЫ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ

Разработан способ определения концентрации 146S компонента вируса ящура в сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Предложена отрицательная регрессионная модель вида С_146S = (30,269 – C_t)/4,155, позволяющая определять значение концентрации 146S частиц вируса ящура на основании установленной величины порогового цикла амплификации (C_t). Экспериментально доказано, что количество 146S компонента, определенного методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием разработанной регрессионной модели и заложенного в прививную дозу противоящурной вакцины, позволяет защитить вакцинированных животных от генерализованной формы ящура типов А, О, Азия-1. Метод ОТ-ПЦР-РВ является высокочувствительным, позволяет быстро и с высокой степенью достоверности оценивать концентрацию 146S антигена в противоящурной вакцине. Способ определения количества 146S частиц методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием регрессионной модели является надежным и характеризуется высокой корреляцией (95,5–99,0%) с результатами реакции связывания комплемента.

1. Бондаренко А. Ф. Качественный и количественный иммунохимический анализ вирусных белков. – Суздаль, 1994. – 92 с.

2. Методические указания по постановке реакции нейтрализации для определения иммунного статуса животных при ящуре: утв. МСХ СССР 26.12.1983.

3. Пономарев А. П., Узюмов В. Л., Груздев К. Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. – Владимир: Фолиант, 2006. – 250 с.

4. Применение ОТ-ПЦР-РВ для определения концентрации 146S компонента вируса ящура типов О/Саудовская Аравия и Asia-1/Shamir в полуфабрикате вакцины / Д. А. Лозовой, А. А. Шишкова, Д. В. Михалишин [и др.] // Ветеринария. – 2017. – № 6. – С. 57–61.

5. Статистические методы анализа в клинической практике / П. О. Румянцев, В. А. Саенко, У. В. Румянцева, С. Ю. Чекин. – Обнинск: ГУ РМНЦ РАМН. – 46 с. – URL: http://www.kantiana.ru/medicinal/help/StatMethodsInClinics.pdf.

6. Annual OIE/FAO FMD Reference Laboratory Network Report. – Pirbright, 2007. – URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm.

7. Enhanced laboratory diagnosis of foot and mouth disease by real-time polymerase chain reaction / A. E. Shaw, S. M. Reid, D. P. King [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. – 2004. – Vol. 23, No. 3. – P. 1003–1009.

8. Сartwright B., Chapman W. G., Brown F. Serological and immunological relationships between the 146S and 12S particles of foot-and-mouth disease virus // J. Gen. Virol. – 1980. – Vol. 50, No. 2. – P. 369–375.

9. Implementation of a one-step real-time RT-PCR protocol for diagnosis of foot-and-mouth disease / A. E. Shaw, S. M. Reid, K. Ebert [et al.] // J. Virol. Methods. – 2007. – Vol. 143, No. 1. – P. 81– 85. – URL: https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2007.02.009.

10. Lubroth J., Rodriguez L., Dekker A. Vesicular diseases // Diseases of Swine / ed. B. E. Straw, J. J. Zimmerman, S. D’Allaire, D. J. Taylor. – 9th ed. – Ames, Iowa, 2006. – P. 517–536.

11. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals / OIE. – 7th еd. – Paris, France, 2012. – Vol. 1, Chap. 2.1.5. – P. 166–169.

12. The pathogenesis and diagnosis of foot-and-mouth disease / S. Alexandersen, Z. Zhang, A. I. Donaldson, A. J. M. Garland // J. Comp. Pathol. – 2003. – Vol. 129, No. 1 – P. 1–36.

13. Wernike K., Beer M., Hoffmann B. Rapid detection of footand-mouth disease virus, influenza A virus and classical swine fever virus by high-speed real-time RT-PCR // J. Virol. Methods. – 2013. – Vol. 193, No. 1. – Р. 50–54. – DOI: 10.1016/j.jviromet.2013.05.005.