ВАЛИДАЦИЯ ОБРАТНО-ТРАНСКРИПТАЗНОЙ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ОПОСРЕДОВАННОЙ ОЦЕНКИ ТИТРА ВИРУСА ЯЩУРА
https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-1-28-43-50
Аннотация
В статье описан процесс валидации методики для опосредованной оценки титра культурального вируса ящура (Твя) в сырье для вакцины методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени на основании установленной величины порогового цикла амплификации (Ct) с применением линейной регрессионной модели Т вя = –0,2956C t+ 11,4650. Проведен анализ полученных результатов исследования 390 проб культурального вируса ящура и определены основные валидационные характеристики предложенной методики: специфичность, правильность, прецизионность, предел обнаружения и количественного определения, диапазон применения и линейность. Результаты валидации методики для опосредованной оценки титра вируса ящура в ОТ-ПЦР-РВ удовлетворяли критериям приемлемости.
Ключевые слова
Об авторах
Д. А. Лозовой
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Директор, кандидат ветеринарных наук
Владимир
М. И. Доронин
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Научный сотрудник, кандидат биологических наук
Владимир
В. А. Стариков
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук
Владимир
Д. В. Михалишин
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук
Владимир
А. А. Шишкова
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Главный технолог, кандидат ветеринарных наук
Владимир
А. М. Тимина
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук
Владимир
А. В. Борисов
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук
Владимир
Список литературы
1. Взаимосвязь инфекционности и концентрации 146S частиц в суспензии лапинизированного вируса ящура / М. В. Котова, В. Л. Узюмов, О. Г. Андреева, М. Г. Удалых // Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии: тез. докладов науч. конф. ВНИЯИ. – Владимир, 1983. – С. 46–48.
2. ГОСТ Р ИСО 5725-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 1–6. – Введ. 01.11.02. – М.: Стандартинформ, 2006.
3. Государственная фармакопея РФ. Ч. 1. – 12-е изд. – М.: Научный центр экспертизы средств медицинского назначения, 2008. – С. 254–266.
4. Жильцова М. В. Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1: автореф. дис. … канд. наук. – Владимир, 2008. – 23 с.
5. Лакин Г. Ф. Биометрия: учебное пособие для биол. спец. вузов. – 4-е изд., перераб. и доп. – М.: Высшая школа, 1990. – 352 с.
6. Пономарев А. П., Узюмов В. Л., Груздев К. Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. – Владимир: Фолиант, 2006. – 250 с.
7. Практикум по GMP. Валидация аналитических методик: теория / П. Носырев, М. Носырева, Т. Рассказова, Н. Корнеева. – URL: http://www.nedug.ru/news/farmatsevtika/2004/2/12/Praktikum-po-GMP--Validatsiya-analiticheskikh-metodik--teoriya (дата обращения: 12.11.18).
8. Способ определения титра инфекционной активности вируса ящура в неинактивированном сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени: пат. 2674076 Российская Федерация, МПК7 А61К 39/135 / Д. В. Михалишин, М. И. Доронин, В. А. Стариков [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». – № 2017145889/10; заявл. 25.12.17; опубл. 04.12.18.
9. Щербаков А. В., Тимина А. М., Перевозчикова Н. А. Разработка ПЦР в реальном времени для обнаружения и количественного определения вируса ящура // Рос. вет. журн. С.-х. животные. Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». – 2008. – Сент. – С. 26–27.
10. Implementation of a one-step real-time RT-PCR protocol for diagnosis of foot-and-mouth disease / A. E. Shaw, S. M. Reid, K. Ebert [et al.] // J. Virol. Methods. – 2007. – Vol. 143 (1). – P. 81–85; DOI: 10.1016/j.jviromet.2007.02.009.
11. Principles and methods of validation of diagnostic assays for infectious diseases / OIE. Terrestrial Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (Mammals, Birds and Bees). – Chapter 1.1.1. – URL: http://www.oie.int/fleadmin/Home/eng/Health_standards/aahm/current/chapitre_validation_diagnostics_assays.pdf (дата обращения: 02.11.18).
12. Quality Standard and Guidelines for Veterinary Laboratories: Infectious Diseases / OIE. – 2nd ed. – Paris: OIE, 2008. – 70 p.
Рецензия
Для цитирования:
Лозовой Д.А., Доронин М.И., Стариков В.А., Михалишин Д.В., Шишкова А.А., Тимина А.М., Борисов А.В. ВАЛИДАЦИЯ ОБРАТНО-ТРАНСКРИПТАЗНОЙ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ОПОСРЕДОВАННОЙ ОЦЕНКИ ТИТРА ВИРУСА ЯЩУРА. Ветеринария сегодня. 2019;(1):43-50. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-1-28-43-50
For citation:
Lozovoy D.A., Doronin M.I., Starikov V.A., Mikhalishin D.V., Shishkova A.A., Timina A.M., Borisov A.B. VALIDATION OF REAL-TIME REVERSE TRANSCRIPTION POLYMERASE CHAIN REACTION FOR INDIRECT ASSESSMENT OF FMD VIRUS TITRE. Veterinary Science Today. 2019;(1):43-50. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-1-28-43-50
Просмотров: 973
Послать статью по эл. почте 