ПРИМЕНЕНИЕ ОТ-ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ЯЩУРА В МОЛОКЕ КРС
Аннотация
Вирус ящура способен выделяться с молоком инфицированных животных и таким образом заражать восприимчивых особей. Оценивали возможность применения полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени для обнаружения вируса ящура в молоке крупного рогатого скота. Для приготовления образцов молока, инфицированных вирусом ящура, использовали штаммы А № 2177/Амурский/2013, О № 2123/Южная Осетия/2011, Азия-1 № 1987/Амурский/2005, С № 564, SAT-1 № 2033/Ботсвана, SAT-2/Саудовская Аравия, SAT-3/Bech 1/65. Для проверки специфичности ОТ-ПЦР-РВ использовали штаммы из коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ»: вируса везикулярной болезни свиней – О-72, вируса везикулярной экзантемы свиней – А-48, вируса везикулярного стоматита – Индиана. Полученные данные показали, что ОТ-ПЦР в реальном времени может успешно применяться для обнаружения вируса ящура в молоке инфицированных коров так же, как в эпителиальных тканях и культурах клеток. Аналитическая чувствительность ОТ-ПЦР-РВ в образцах молока составляет 1–10 ТЦД50/мл, специфичность метода – 100%. При определении основных валидационных характеристик метода доказано, что ОТ-ПЦР-РВ обладает высокой прецизионностью, специфичностью и чувствительностью и способна обнаруживать вирус ящура во всем его генетическом разноообразии. Таким образом, полученные данные показали, что ОТ-ПЦР-РВ является ценным методом для контроля молока и молочной продукции.
Об авторах
А. М. Тимина
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук
Владимир
С. Н. Фомина
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук
Владимир
Т. К. Майорова
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия
Россия
Ведущий ветеринарный врач
Владимир
Список литературы
1. Поляков И. В., Соколова Н. С. Практическое пособие по медицинской статистике. – Л.: Медицина, 1975. – C. 26–30.
2. Практикум по GMP. Валидация аналитических методик: теория / П. Носырев, М. Носырева, Т. Рассказова, Н. Корнеева. – URL: http://http://www.nedug.ru/news/farmatsevtika/2004/2/12/Praktikum-po-GMP--Validatsiya-analiticheskikh-metodik--teoriy (дата обращения: 02.12.18).
3. Тимина А. М., Щербаков А. В. Определение основных характеристик ОТ-ПЦР в реальном времени, предназначенной для обнаружения вируса ящура всех серотипов // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. – 2016. – Т. 14. – С. 7–19.
4. Application of RT-PCR and nucleotide sequencing in footand-mouth disease diagnosis / A. Sherbakov, N. Lomakina, V. Drygin, A. Gusev // Vet. Quart. – 1998. – V. 20 (Suppl. 2). – P. 32–34; DOI: 10.1080/01652176.1998.9694962.
5. Drew T. W., Yapp F., Paton D. J. The detection of bovine viral diarrhoea virus in bulk milk samples by the use of a singletube RT-PCR / Vet. Microbiol. – 1999. – Vol. 64 (2–3). – P. 145–154; DOI: 10.1016/S0378-1135(98)00266-1.
6. Enhanced laboratory diagnosis of foot-and-mouth disease by real-time polymerase chain reaction / A. E. Shaw, S. M. Reid, D. P. King [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. – 2004. – Vol. 23 (3). – P. 1003– 1009. – URL: http://wahis2-devt.oie.int/doc/ged/D1339.PDF.
7. Tomasula P. M., Konstance R. P. The survival of foot-andmouth disease virus in raw and pasteurized milk and milk products // J. Dairy Sci. – 2004. – Vol. 87 (4). – P. 1115–1121; DOI: 10.3168/jds.S0022-0302(04)73258-0.
8. Use of an internal standard in a TaqMan® nested reverse transcription-polymerase chain reaction for the detection of bovine viral diarrhoea virus / G. S. Heath, D. P. King, J. L. E. Turner [et al.] // Vet. Microbiol. – 2003. – Vol. 96 (4). – P. 357–366; DOI: 10.1016/j.vetmic.2003.09.006.
9. Utility of automated real-time RT-PCR for the detection of foot-and-mouth disease virus excreted in milk / S. M. Reid, S. Parida, D. P. King [et al.] // Vet. Res. – 2006. – Vol. 37 (1). – P. 121–132; DOI: 10.1051/vetres:2005040.
Для цитирования:
Тимина А.М., Фомина С.Н., Майорова Т.К. ПРИМЕНЕНИЕ ОТ-ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ЯЩУРА В МОЛОКЕ КРС. Ветеринария сегодня. 2019;(1):22-28. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-1-28-22-25
For citation:
Timina A.M., Fomina S.N., Mayorova Т.К. USE OF REAL-TIME qRT-PCR FOR FMD VIRUS DETECTION IN CATTLE MILK. Veterinary Science Today. 2019;(1):22-28. (In Russ.) https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-1-28-22-25
Просмотров: 207
Послать статью по эл. почте 