veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2019-1-28-22-25veterinary-397Research ArticleБОЛЕЗНИ КРСBOVINE DISEASESПРИМЕНЕНИЕ ОТ-ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ЯЩУРА В МОЛОКЕ КРСUSE OF REAL-TIME qRT-PCR FOR FMD VIRUS DETECTION IN CATTLE MILKТиминаА. М.TiminaA. M.

Старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук

Владимир

Leading Researcher, Candidate of Science (Veterinary Medicine) 

Vladimir

timina@arriah.ruФоминаС. Н.FominaS. N.

Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук

Владимир

Head of the Laboratory, Candidate of Science (Veterinary Medicine)

Vladimir

fomina@arriah.ruМайороваТ. К.MayorovaТ. К.

Ведущий ветеринарный врач

Владимир

Leading Veterinarian

Vladimir

mayorova@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation201901042019012228Copyright © Тимина А.М., Фомина С.Н., Майорова Т.К., 20192019Тимина А.М., Фомина С.Н., Майорова Т.К.Timina A.M., Fomina S.N., Mayorova Т.К.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/397

Вирус ящура способен выделяться с молоком инфицированных животных и таким образом заражать восприимчивых особей. Оценивали возможность применения полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени для обнаружения вируса ящура в молоке крупного рогатого скота. Для приготовления образцов молока, инфицированных вирусом ящура, использовали штаммы А № 2177/Амурский/2013, О № 2123/Южная Осетия/2011, Азия-1 № 1987/Амурский/2005, С № 564, SAT-1 № 2033/Ботсвана, SAT-2/Саудовская Аравия, SAT-3/Bech 1/65. Для проверки специфичности ОТ-ПЦР-РВ использовали штаммы из коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ»: вируса везикулярной болезни свиней – О-72, вируса везикулярной экзантемы свиней – А-48, вируса везикулярного стоматита – Индиана. Полученные данные показали, что ОТ-ПЦР в реальном времени может успешно применяться для обнаружения вируса ящура в молоке инфицированных коров так же, как в эпителиальных тканях и культурах клеток. Аналитическая чувствительность ОТ-ПЦР-РВ в образцах молока составляет 1–10 ТЦД50/мл, специфичность метода – 100%. При определении основных валидационных характеристик метода доказано, что ОТ-ПЦР-РВ обладает высокой прецизионностью, специфичностью и чувствительностью и способна обнаруживать вирус ящура во всем его генетическом разноообразии. Таким образом, полученные данные показали, что ОТ-ПЦР-РВ является ценным методом для контроля молока и молочной продукции.

FMDV can be shed with milk of infected animals and infect susceptible animals. The possibility of using real-time qRT-PCR for FMD virus detection in cattle milk was assessed. To prepare samples of FMDV infected milk the following strains were used: А No. 2177/ Amursky/2013, О No. 2123/South Ossetia/2011, Asia-1 No. 1987/Amursky/2005, С No. 564, SAT-1 No. 2033/Botswana, SAT-2/Saudi Arabia, SAT-3/Bech 1/65. For specifcity test swine vesicular disease O-72 strain, Vesicular Exanthema of Swine A-48 strain and vesicular stomatitis virus Indiana strain from FGBI “ARRIAH” collection were used. The obtained data showed that real time qRT-PCR can be successfully used for the virus detection in milk of infected cows as well as in epithelium and cell cultures. Analytical sensitivity of real-time qRT-PCR in milk samples is 1–10 TCD50/ml, the method specifcity is 100%. When identifying basic validation characteristics of the method it was proven that real-time qRT-PCR demonstrates precision and sensitivity and can detect FMDV in its genetic diversity. So, the detected data showed that the real-time qRT-PCR is a precious method of milk and dairy product control.

вирус ящурамолокоОТ-ПЦР в реальном временивалидацияFMD virusmilkreal-time qRT-PCRvalidationReferencesПоляков И. В., Соколова Н. С. Практическое пособие по медицинской статистике. – Л.: Медицина, 1975. – C. 26–30.Polyakov I. V., Sokolova N. S. Practical guide for medical statistics [Prakticheskoe posobie po medicinskoj statistike]. L.: Medicine, 1975 (in Russian).Практикум по GMP. Валидация аналитических методик: теория / П. Носырев, М. Носырева, Т. Рассказова, Н. Корнеева. – URL: http://http://www.nedug.ru/news/farmatsevtika/2004/2/12/Praktikum-po-GMP--Validatsiya-analiticheskikh-metodik--teoriy (дата обращения: 02.12.18).Practical course on GMP. Validation of analytical methods: theory [Praktikum po GMP. Validaciya analiticheskih metodik: teoriya]. P. Nosyrev, M. Nosyreva, T. Rasskazova, N. Korneyeva. URL: http://www. nedug.ru/news/фармацевтика/2004/2/12/Практикум-по-GMP--Валидация-аналитических-методик--теория (access date: 02.12.18) (in Russian).Тимина А. М., Щербаков А. В. Определение основных характеристик ОТ-ПЦР в реальном времени, предназначенной для обнаружения вируса ящура всех серотипов // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. – 2016. – Т. 14. – С. 7–19.Timina A. M., Scherbakov A. V. Determination of major characteristics of the Real Time qRT PCR for detection of all FMDV serotypes [Opredelenie osnovnyh harakteristik OT-PCR v real’nom vremeni, prednaznachennoj dlya obnaruzheniya virusa yashchura vsekh serotipov]. Proceedings of the Federal Centre for Animal Health. 2016; 14: 7–19 (in Russian).Application of RT-PCR and nucleotide sequencing in footand-mouth disease diagnosis / A. Sherbakov, N. Lomakina, V. Drygin, A. Gusev // Vet. Quart. – 1998. – V. 20 (Suppl. 2). – P. 32–34; DOI: 10.1080/01652176.1998.9694962.Application of RT-PCR and nucleotide sequencing in foot-andmouth disease diagnosis. A. Sherbakov, N. Lomakina, V. Drygin, A. Gusev. Vet. Quart. 1998; 20 (Suppl. 2): 32–34; DOI: 10.1080/01652176.19 98.9694962.Drew T. W., Yapp F., Paton D. J. The detection of bovine viral diarrhoea virus in bulk milk samples by the use of a singletube RT-PCR / Vet. Microbiol. – 1999. – Vol. 64 (2–3). – P. 145–154; DOI: 10.1016/S0378-1135(98)00266-1.Drew T. W., Yapp F., Paton D. J. The detection of bovine viral diarrhoea virus in bulk milk samples by the use of a single-tube RT-PCR. Vet. Microbiol. 1999; 64 (2–3): 145–154; DOI: 10.1016/S0378-1135(98)00266-1.Enhanced laboratory diagnosis of foot-and-mouth disease by real-time polymerase chain reaction / A. E. Shaw, S. M. Reid, D. P. King [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. – 2004. – Vol. 23 (3). – P. 1003– 1009. – URL: http://wahis2-devt.oie.int/doc/ged/D1339.PDF.Enhanced laboratory diagnosis of foot-and-mouth disease by real-time polymerase chain reaction. A. E. Shaw, S. M. Reid, D. P. King [et al.]. Rev. Sci. Tech. OIE. 2004; 23 (3): 1003–1009. URL: http://wahis2-devt.oie.int/doc/ged/D1339.PDF.Tomasula P. M., Konstance R. P. The survival of foot-andmouth disease virus in raw and pasteurized milk and milk products // J. Dairy Sci. – 2004. – Vol. 87 (4). – P. 1115–1121; DOI: 10.3168/jds.S0022-0302(04)73258-0.Tomasula P. M., Konstance R. P. The survival of foot-and-mouth disease virus in raw and pasteurized milk and milk products. J. Dairy Sci. 2004; 87 (4): 1115–1121; DOI: 10.3168/jds.S0022-0302(04)73258-0.Use of an internal standard in a TaqMan® nested reverse transcription-polymerase chain reaction for the detection of bovine viral diarrhoea virus / G. S. Heath, D. P. King, J. L. E. Turner [et al.] // Vet. Microbiol. – 2003. – Vol. 96 (4). – P. 357–366; DOI: 10.1016/j.vetmic.2003.09.006.Use of an internal standard in a TaqMan® nested reverse transcription-polymerase chain reaction for the detection of bovine viral diarrhoea virus. G. S. Heath, D. P. King, J. L. E. Turner [et al.]. Vet. Microbiol. 2003; 96 (4): 357–366; DOI: 10.1016/j.vetmic.2003.09.006.Utility of automated real-time RT-PCR for the detection of foot-and-mouth disease virus excreted in milk / S. M. Reid, S. Parida, D. P. King [et al.] // Vet. Res. – 2006. – Vol. 37 (1). – P. 121–132; DOI: 10.1051/vetres:2005040.Utility of automated real-time RT-PCR for the detection of foot-and-mouth disease virus excreted in milk. S. M. Reid, S. Parida, D. P. King [et al.]. Vet. Res. 2006; 37 (1): 121–132; DOI: 10.1051/vetres:2005040.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.