ХРАНЕНИЕ ПОЧЕК ПОРОСЯТ ПРИ СУБНОРМАЛЬНЫХ ТЕМПЕРАТУРАХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСЛОЯ ПЕРВИЧНО ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК


https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-4-27-44-48

Полный текст:


Аннотация

Длительное хранение внутренних органов и тканей необходимо для рационализации технологического процесса получения первичных клеток, пригодных для вирусологических исследований. Представлены результаты изучения сохранности органов при субнормальных температурах в лабораторных условиях с целью дальнейшего получения полноценного монослоя первичных клеток. Предложен способ хранения до 6 сут изолированной в стерильных условиях почки 3–5-месячного поросенка. В качестве стабилизирующей субстанции использовали среду 199 без сыворотки с добавлением 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 100 ед./мл гентамицина. Для оптимизации химического гомеостаза среды хранения орган помещали в емкость с широким горлом, в которой соотношение среды и воздушной фазы было 1:1, накрывали чашкой Петри. Хранили при температуре от –1 до +4 °С до 6 сут, не допуская кристаллизации среды и органа. Сделано заключение, что любое замораживание с кристаллизацией (при –2 до –4 °С) без криопротекторов отрицательно сказывается на выживаемости клеток и тканей органов. По окончании срока хранения почки проводили трипсинизацию с получением полноценного монослоя первичной культуры. При проведении вирусологических работ все варианты полученного клеточного материала были пригодны для определения авирулентности полуфабрикатов, проведения реакции нейтрализации и выделения вируса ящура. Предложенный метод хранения почек поросят позволяет более рационально использовать донорские органы для получения первичных культур, используемых в вирусологии. Этот способ хранения органов может быть рекомендован для консервирования и транспортировки органов, полученных в полевых условиях от домашних и диких животных.


Об авторах

Б. Л. Манин
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук

Владимир



Н. В. Коропова
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук

Владимир



В. А. Стариков
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук

Владимир



И. В. Вологина
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук

Владимир



Список литературы

1. Кирпатовский В. И., Кудрявцев Ю. В. Криоконсервация почки крысы и кролика // Успехи современной криобиологии: материалы 11-й международной конф. – Харьков, 1992. – С. 82–83.

2. Манин Б. Л., Коропова Н. В. Влияние артефактов биологического статуса поросят на культивирование первичной культуры, полученной из почки // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. – Владимир, 2012. – Т. 10. – С. 238–245.

3. Манин Б. Л., Коропова Н. В, Стариков В. А. Способ хранения почки поросенка для получения первично трипсинизированных клеток и использование его в вирусологических исследованиях: пат. 2646135 Российская Федерация, МПК A01N1/02 (2006.01). – № 2016140461; заявл. 14.10.16; опубл. 01.03.18.

4. Ночевный В. Т. Комплексная стандартизация получения первичных культур клеток // Цитология. – 1999. – Т. 41, № 3–4. – С. 298–299.

5. Трошина В. П. Функциональное состояние изолированных тканей при температуре, близкой к нулю // Вестник Ленинградского ун-та. – 1957. – № 3. – С. 111–121.

6. Фрешни Р. Я. Культура животных клеток. Практическое руководство. – М.: Бином. Лаборатория знаний, 2011. – 691 с.

7. Юрченко Т. Н., Жуликова Е. П., Говоруха Т. П. Структурно-функциональные показатели клеток печени на этапах подготовки к криоконсервации // Проблемы криобиологии. – 1991. – № 1. – С. 8–16.

8. Янгсон Р.-М. Хирургия. Что и зачем делает хирург? – Минск: Попурри, 1997. – 592 с.

9. Jeske A. H., Fonteles M. C., Karow A. M. Functional preservation of the mammalian kidney. ІІІ. Ultrastructural effects of perfusion with dimethylsulfoxide (DMSO) // Cryobiology. – 1974. – Vol. 11 (2). – P. 170–181; DOI: 10.1016/0011-2240(74)90307-1.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Манин Б.Л., Коропова Н.В., Стариков В.А., Вологина И.В. ХРАНЕНИЕ ПОЧЕК ПОРОСЯТ ПРИ СУБНОРМАЛЬНЫХ ТЕМПЕРАТУРАХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСЛОЯ ПЕРВИЧНО ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК. Ветеринария сегодня. 2018;(4):44-48. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-4-27-44-48

For citation: Manin B.L., Koropova N.V., Starikov V.A., Vologina I.V. STORAGE OF PIGLET KIDNEYS AT SUBNORMAL TEMPERATURES FOR PRIMARY TRYPSINIZED CELL MONOLAYER PREPARATION. Veterinary Science Today. 2018;(4):44-48. (In Russ.) https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-4-27-44-48

Просмотров: 104

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)