ТЕСТ-СИСТЕМА НА ОСНОВЕ НЕПРЯМОГО «СЭНДВИЧ»-ВАРИАНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА ЗАРАЗНОГО УЗЕЛКОВОГО (НОДУЛЯРНОГО) ДЕРМАТИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА


https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-3-26-52-57

Полный текст:


Аннотация

Заразный узелковый дерматит крупного рогатого скота является экономически значимым заболеванием, поскольку приводит к снижению привесов и молочной продуктивности, абортам, маститам, нарушению функции воспроизводства, поражению органов дыхания, истощению животных, а в отдельных случаях – их гибели. В настоящее время болезнь включена в список МЭБ и подлежит обязательной нотификации. Возникновение и распространение заболевания на территории Российской Федерации обусловило необходимость проведения исследований в рамках совершенствования методов лабораторной диагностики. Впервые в России разработана тест-система на основе непрямого «сэндвич»-варианта иммуноферментного анализа для диагностики заразного узелкового (нодулярного) дерматита крупного рогатого скота, позволяющая в течение 24 часов провести исследование биоматериала. Разработка тест-системы включала в себя получение специфических антител от лабораторных животных (кролики и морские свинки), подбор оптимального разведения улавливающих и детекторных антител, состава буферных растворов и условий постановки реакции. С использованием разработанной методики исследовано 50 образцов исходных культуральных антигенов вируса заразного узелкового дерматита, а также вируссодержащих суспензий, отобранных на различных этапах очистки и концентрирования. Для подтверждения результатов ИФА все исследованные пробы были тестированы методом ПЦР-РВ. Кроме того, для всех исследуемых материалов определяли титр инфекционной активности вируса методом титрования в культуре клеток ЯДК-04. Диагностическая специфичность теста составила 100%, а аналитическая чувствительность – 3,5 lg ТЦД50. Разработанный «сэндвич»-вариант ИФА позволяет тестировать одновременно в формате 96-луночного планшета до 24 проб антигена в разведении 1:2–1:16 и может быть использован для диагностики заразного узелкового (нодулярного) дерматита крупного рогатого скота.

Об авторах

О. А. Рябикина
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Младший научный сотрудник,

г. Владимир



В. И. Диев
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Доктор ветеринарных наук, профессор, 

г. Владимир



О. П. Бьядовская
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

И. о. заведующего лабораторией, кандидат биологических наук, 

г. Владимир



А. В. Константинов
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Начальник отдела, кандидат ветеринарных наук, 

г. Владимир



С. К. Старов
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Заместитель директора, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник, 

г. Владимир



А. В. Кононов
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Начальник отдела, кандидат ветеринарных наук, 

г. Владимир



В. Ю. Кулаков
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук, 

г. Владимир



О. Н. Петрова
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Заведующий сектором, кандидат биологических наук, 

г. Владимир



Список литературы

1. Видовая и штаммовая дифференциация каприпоксвирусов методом полимеразной цепной реакции / Е. С. Орлова, А. В. Щербаков, В. И. Диев, В. М. Захаров // Молекулярная биология. – 2006. – Т. 40, № 1. – С. 158–164.

2. Гуненков В. В. Заразный узелковый дерматит крупного рогатого скота // Сборник науч. тр. ВГНКИ. – М., 2005. – Т. 66. – С. 46–54.

3. Методические рекомендации по анализу параметров в системах «доза-эффект» с альтернативным способом оценивания / В. Ю. Кулаков, С. Н. Колосов, А. В. Константинов [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». – Владимир, 2016. – 31 с.

4. Методические указания по выявлению ДНК полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита (нодулярного дерматита) КРС с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени: утв. Россельхознадзором 13.09.17 / МУ 35-17; ФГБУ «ВНИИЗЖ». – Владимир, 2017. – 11 с.

5. Мищенко В. А. Современная ситуация по инфекционным болезням КРС в России // Актуальные ветеринарные аспекты молочного и мясного животноводства: материалы международной конференции, 23–24 апреля 2015 г. – М., 2015. – С. 1–6.

6. Evaluation of different diagnostic methods for diagnosis of lumpy skin diseases in cows / W. S. Awad, A. K. Ibrahim, K. Mahran [et al.] // Trop. Anim. Health Prod. – 2010. – Vol. 42, No. 4. – P. 777–783; doi: 10.1007/s11250-009-9486-5.

7. Kitching R. P. Vaccines for lumpy skin disease, sheep pox and goat pox // Vaccines for OIE list A and emerging animal diseases / ed. F. Brown, J. A. Roth // Dev. Biol. (Basel). – 2003. – Vol. 114. – P. 161–167.

8. Quantification of lumpy skin disease virus following experimental infection in cattle / S. Babiuk, T. R. Bowden, G. Parkyn [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. – 2008. – Vol. 55, No. 7. – P. 299–307; doi: 10.1111/j.18651682.2008.01024.x.

9. The novel Capripoxvirus vector lumpy skin disease virus (LSDV) efficiently boosts MVA HIV responses in rhesus macaques / W. A. Burgers, Z. Ginbot, Y.-J. Shen [et al.] // J. Gen. Virol. – 2014. – Vol. 95. – P. 2267–2272; doi: 10.1099/vir.0.067835-0.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Рябикина О.А., Диев В.И., Бьядовская О.П., Константинов А.В., Старов С.К., Кононов А.В., Кулаков В.Ю., Петрова О.Н. ТЕСТ-СИСТЕМА НА ОСНОВЕ НЕПРЯМОГО «СЭНДВИЧ»-ВАРИАНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА ЗАРАЗНОГО УЗЕЛКОВОГО (НОДУЛЯРНОГО) ДЕРМАТИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА. Ветеринария сегодня. 2018;(3):52-57. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-3-26-52-57

For citation: Ryabikina O.A., Diev V.I., Byadovskaya O.P., Konstantinov A.V., Starov S.K., Kononov A.V., Kulakov V.Y., Petrova O.N. TEST-SYSTEM BASED ON INDIRECT “SANDWICH” ELISA TO DETECT THE LUMPY SKIN DISEASE VIRUS ANTIGEN. Veterinary Science Today. 2018;(3):52-57. (In Russ.) https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-3-26-52-57

Просмотров: 176

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)