Изучение возможности внутриутробного заражения козлят вирусом артрита-энцефалита коз

ВВЕДЕНИЕ

Артрит-энцефалит коз (АЭК) является одной из важных проблем современного козоводства в России и за ее пределами. По литературным данным, вирусоносителями возбудителя данной инфекции является более 45–60% всей популяции коз, содержащихся в личных подсобных (ЛПХ) и крестьянских фермерских (КФХ) хозяйствах, расположенных во всех федеральных округах Российской Федерации [1].

Этиологическим фактором АЭК является вирус семейства Retroviridae, входящий в группу лентивирусов мелких жвачных животных (small ruminant lentiviruses, SRLVs), разделенных на пять генетических групп [2]. Заболевание относится к группе лентивирусных инфекций и характеризуется длительным бессимптомным вирусоносительством с последующим развитием симптомокомплекса поражений опорно-двигательного аппарата (артриты), дыхательной системы и ткани молочной железы. У молодняка 2–3-месячного возраста наблюдаются поражения центральной нервной системы, проявляющиеся потерей ориентации, запрокидыванием головы и нарушением координации [3-6].

Существует вертикальный и горизонтальный пути передачи возбудителя инфекции. Заражение животных происходит лактогенным путем при выпаивании новорожденным козлятам молозива или молока от козы, являющейся носителем вируса АЭК [7-9], а также воздушно-капельным путем при скученном содержании и реже – половым путем [10-12].

В отношении внутриутробного пути передачи вируса в литературных источниках мнения различаются. Волкова И. Ю. [13] указывает, что данный способ заражения возможен. Однако в ряде публикаций авторы говорят о том, что наличие десмохориального типа плаценты у коз препятствует передаче вируса от матери плоду [3][8][14][15]. Тем не менее в некоторых зарубежных источниках приводятся данные о детекции вируса при обследовании новорожденных козлят методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) [16][17].

Несмотря на это, в Кодексе здоровья наземных животных ВОЗЖ (Всемирная организация здравоохранения животных) информация о возможном внутриутробном пути передачи вируса АЭК не приводится [18].

Отсутствие средств специфической терапии и профилактики данного заболевания препятствует проведению массовых высокоэффективных мероприятий по недопущению распространения данной патологии среди поголовья коз. Основным способом профилактики и оздоровления хозяйств является постоянный мониторинг всего поголовья, а в случае обнаружения серопозитивных животных – проведение комплекса мероприятий по замене больного стада на здоровое. Одним из таких мероприятий является введение технологии стерильных окотов – комплекса мер по недопущению прямого контакта серопозитивной козы с новорожденным козленком с последующим выкармливанием его обеззараженным молозивом и молоком.

Учитывая диаметрально противоположную информацию, изложенную в литературных источниках, а также принимая во внимание тот факт, что в настоящее время АЭК внесен в «Перечень заразных, в том числе особо опасных, болезней животных, по которым могут устанавливаться ограничительные мероприятия (карантин)»¹, была сформулирована цель исследований: изучить возможность внутриутробного заражения новорожденных козлят вирусом АЭК.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования проводили в 2023–2024 гг. в лаборатории болезней молодняка Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока ФГБУН «Сибирский федеральный научный центр агробиотехнологий Российской академии наук» (ИЭВСиДВ СФНЦА РАН) и крестьянско-фермерском хозяйстве, расположенном в одном из регионов Уральского федерального округа. В опыте использовали 18 сукотных коз зааненской породы, серопозитивных по АЭК. Диагноз животным ставили путем исследования проб крови на наличие провирусной ДНК методом ПЦР, а также двукратного исследования сыворотки крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) на наличие антител к вирусу АЭК за неделю до осеменения и на 60-е сут сукотности.

Отбор проб крови от коз-матерей производили в вакуумные пробирки Bodywin (Китай) с активатором свертывания и этилендиаминтетрауксусной кислотой.

Наличие антител к вирусу АЭК в сыворотке крови определяли с использованием наборов для непрямого ИФА ID Screen® MVV/CAEV Indirect Screening test (IDVet, Франция). Учет результатов проводили на полуавтоматическом планшетном иммуноферментном анализаторе TECAN Infinite F50 (Австрия).

Эвтаназию новорожденных животных осуществляли в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите домашних животных (глава 2, статья 11)². В качестве способа эвтаназии использовали метод ударника [19].

Вскрытие трупов новорожденных козлят осуществляли общепринятым методом Г. В. Шора [20]. Пробы крови и внутренних органов отбирали с соблюдением правил асептики и антисептики в стерильные пробирки с использованием стерильных одноразовых зондов для сбора материала (VetGenomics, Россия), а также карт для сбора и хранения образцов биоматериала «ДНК-архив» (Россия).

Для первичного выделения нуклеиновых кислот из биологического материала использовали набор «РеалБест экстракция 100» (АО «Вектор-Бест», Россия).

Детекцию вируса АЭК в пробах биологического материала осуществляли на регистрирующем амплификаторе производства Bio-Rad Laboratories, Inc. (США) с помощью «Набора реагентов для выявления провирусной ДНК вируса артрита-энцефалита коз (АЭК) методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени» (АО «Вектор Бест», Россия). Проводили 50 циклов амплификации. Положительными считали образцы с Ct < 40.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Для проведения исследования все поголовье коз (n = 50), содержащихся в одном из КФХ, перед осеменением проверили на наличие антител к вирусу АЭК методом ИФА. В качестве подтверждающего теста на наличие провирусной ДНК использовали ПЦР. Для дальнейшего исследования отобрали коз со значением коэффициента серопозитивности Кс ≥ 100 (по результатам ИФА) и положительными результатами ПЦР-теста (n = 29). Затем на 60-е сут сукотности провели повторное обследование методом ИФА для подтверждения поставленного диагноза «артрит-энцефалит коз».

Во время окота с соблюдением правил асептики и антисептики производили прием и изъятие новорожденных козлят, полностью исключая их послеродовой контакт с матерью. В опыте использовали только самцов, так как они не представляли товарной ценности. Всего для исследования было отобрано 18 гол. (рис.).

После эвтаназии с соблюдением правил асептики и антисептики производили вскрытие и отбор биологического материала: проб крови, тканей сердца, печени, легких. Хранение и транспортировку биологического материала проводили при температуре 4 °С.

Дальнейшую работу с пробами биологического материала проводили в условиях ПЦР-лаборатории ИЭВСиДВ СФНЦА РАН.

Результаты исследований представлены в таблице 1.

Ни в одной из проб биологического материала, исследованных методом ПЦР в режиме реального времени, вирус АЭК (CAEV) обнаружен не был. Данный факт подтвердил, что внутриутробное заражение козлят от матерей-вирусоносителей невозможно.

Полученные в ходе эксперимента данные отличаются от приведенной в ряде иностранных публикаций информации. Так, J. Furtado Araújo et al. [17] указывают, что при обследовании 73 новорожденных козлят методом ПЦР в 46,57% проб был обнаружен вирус АЭК. Одним из объяснений расхождения наших результатов с приведенными литературными данными может служить комментарий из статьи О. Л. Колбасовой и соавт. [2], что качество ПЦР напрямую зависит от праймеров, которые должны соответствовать генетическому варианту вируса, циркулирующего среди животных в хозяйстве.

При проведении эксперимента все козы были проверены с использованием комбинации диагностических тестов ИФА и ПЦР, и в опыт были отобраны животные, двукратно показавшие положительные результаты. Следовательно, комплекс праймеров, входящих в состав используемой в работе ПЦР-системы, соответствовал генетическому варианту вируса, циркулировавшего в хозяйстве.

Приведенные данные подтверждают актуальность применения методики стерильных родов (полное исключение контакта матери и новорожденного козленка сразу после окота) как одного из основных способов профилактики распространения АЭК внутри хозяйства и формирования здорового стада.

Подтверждением эффективности данного метода и, как следствие, отсутствия внутриутробного пути передачи вируса АЭК служат следующие примеры.

Пример 1. Опыт проводили на базе ЛПХ, расположенного в Южном федеральном округе. Поголовье коз на момент начала исследования насчитывало 18 гол. (табл. 2).

Как видно из представленных данных, в 2022 г. при первичном обследовании поголовья, состоящего из 18 половозрелых животных, у 11 коз в сыворотке крови были обнаружены антитела к вирусу АЭК. Владельцы ЛПХ приняли решение оздоровить стадо, для чего ввели в практику обязательное проведение стерильных окотов для всех котных коз и выкармливание новорожденных козлят молозивом, пастеризованным при температуре 60 °С в течение 30 мин, с дальнейшим использованием заменителя цельного молока. Из стада были выведены 4 козы с явными клиническими признаками АЭК, остальные были покрыты имеющимися серопозитивными козлами.

В 2023 г. при обследовании ремонтного поголовья, сформированного из козлят, полученных методом стерильных окотов (13 гол.), все животные показали отрицательный результат. Единственное серопозитивное животное оказалось козочкой, которую владельцы хотели еще раз покрыть, но, получив данные о том, что все козлята являются серонегативными, было принято решение отправить ее на убой.

В 2024 г. при повторном двукратном обследовании методом ИФА вновь сформированного поголовья коз все животные показали отрицательный результат на наличие антител к вирусу АЭК.

Пример 2. Опыт проводили на базе ЛПХ, расположенного на территории Новосибирской области. На момент начала проведения мониторинга поголовье составляли 24 дойные козы нубийской породы (табл. 3).

При первичном обследовании животных методом ИФА в 2020 г. было установлено, что все поголовье коз инфицировано вирусом АЭК.

Владельцами хозяйства было принято решение о проведении комплекса мер по оздоровлению стада. Для этого все последующие окоты проводились с использованием технологии стерильных окотов, а полученное потомство выпаивалось пастеризованными при температуре 60 °С в течение 30 мин молозивом и молоком, полученными от коз-матерей.

Обследование молодняка, полученного по данной технологии в 2021 г., показало, что из 20 животных 12 являются носителями вируса АЭК. При опросе владельцев было установлено, что после окончания периода молочного выпаивания данные животные в 3-месячном возрасте были помещены в общее стадо, что послужило причиной их заражения вирусом АЭК от больных коз-матерей.

Учитывая данный факт, все полученное в 2022 г. от серопозитивных коз потомство владельцы ЛПХ содержали в отдельном помещении, полностью исключая контакт с зараженными животными и предметами ухода за ними. В результате при обследовании методом ИФА вновь сформированного поголовья (возраст 6–7 мес.) у всех животных (23 гол.) в сыворотке крови отсутствовали антитела к вирусу АЭК. Владельцами было принято решение о ликвидации всех серопозитивных животных с последующей дезинфекцией помещений и формированием нового поголовья коз из серонегативного молодняка.

Повторные двукратные исследования в 2023 г. подтвердили отсутствие циркуляции вируса АЭК у всего поголовья коз данного ЛПХ. В 2024 г. владельцы с интервалом 6 мес. вновь проверили всех животных методом ИФА, результат был отрицательным.

Полученные во время эксперимента данные, а также результаты мониторинговых исследований, приведенные в примерах, подтверждают эффективность применения стерильных окотов как основного метода профилактики распространения АЭК внутри козоводческих хозяйств. Точное соблюдение всех технологических приемов позволяет получать здоровое потомство от животных-вирусоносителей, обладающих высокой племенной и хозяйственной ценностью.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в научной литературе приводятся противоречивые данные о возможности внутриутробного заражения козлят вирусом артрита-энцефалита коз. Ряд зарубежных авторов приводят результаты исследований, указывающих на выделение возбудителя АЭК у новорожденных козлят, полученных от серопозитивных животных. При этом в отечественной литературе, а также в Кодексе здоровья наземных животных ВОЗЖ отсутствуют данные о возможности внутриутробного пути заражения вирусом АЭК.

Проведенные нами исследования биологического материала от новорожденных козлят, полученных от серопозитивных по АЭК коз, указывают на то, что десмохориальный тип плаценты, характерный для мелкого рогатого скота, является естественным барьером для лентивирусов мелких жвачных животных, что исключает внутриутробную передачу возбудителя артрита-энцефалита коз. Учитывая вышеизложенное, а также то, что в настоящее время отсутствуют средства специфической профилактики и терапии АЭК, единственным способом предупреждения возникновения данного заболевания являются технологические методы, в частности, стерильные роды, исключающие передачу вируса от матери новорожденному козленку.

Данный факт подтвержден многолетним мониторингом поголовья коз, содержащихся в двух ЛПХ, расположенных в Южном федеральном округе и Новосибирской области, на наличие в стаде серопозитивных по АЭК животных. В обоих случаях переход владельцев к применению технологии стерильных родов, исключающей контакт новорожденных козлят с серопозитивными матерями, позволил в течение двух лет полностью вывести из стада зараженных животных и заменить все поголовье серонегативными по АЭК особями без экономических потерь и покупки здоровых животных в других хозяйствах.

Приведенные данные подтверждают, что использование технологии стерильных окотов с последующим выкармливанием полученного потомства пастеризованными при температуре 60 °С в течение 30 мин молозивом и молоком в настоящее время является единственным способом профилактики распространения АЭК внутри стада коз, содержащихся в одном хозяйстве.

Тем не менее, учитывая небольшую выборку животных в опыте, а также то, что в научной литературе мнения о возможности внутриутробного заражения диаметрально различаются, необходимо проведение дальнейших исследований с охватом большего количества животных.