Разработка и применение тест-системы на основе непрямого жидкофазного блокирующего варианта ИФА для определения антигена вируса РРСС при технологическом контроле вакцинного сырья

Одной из наиболее актуальных проблем свиноводства остается репродуктивно-респираторный синдром свиней, который является эндемичным заболеванием и регистрируется в большинстве стран мира. К основным мерам борьбы с заболеванием относятся профилактическая вакцинация, контроль за передвижением животных как внутри страны, так и за ее пределами, а также постоянное проведение диагностических исследований в популяции свиней. В качестве средств специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней применяются живые и инактивированные вакцины. Основным требованием, предъявляемым к инактивированным препаратам, является полная и необратимая инактивация инфекционного агента при максимальной сохранности антигенной детерминанты и иммунная защита привитых животных. Поэтому актуальной задачей является постоянное совершенствование методов контроля качества вакцин на различных технологических стадиях их производства. В статье представлены результаты разработки тест-системы на основе непрямого жидкофазного блокирующего иммуноферментного анализа для выявления и определения активности антигена вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в инфекционных и инактивированных вируссодержащих препаратах клеточных культур на промежуточных этапах производства вакцинных биопрепаратов. Разработка тест-системы включала получение очищенного и концентрированного препарата антигена вируса, а также специфических гипериммунных сывороток крови кроликов. Специфичность очищенного и концентрированного антигена вируса подтверждали с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Показано, что разработанная тест-система позволяет выявлять антиген вируса с исходным титром инфекционной активности в диапазоне от 4,87 до 7,21 lg ТЦД₅₀/см³ , соответствующий значению титра (разведения) при постановке иммуноферментного анализа от 1:4 до 1:64. В результате проведенной работы были разработаны, прошли комиссионные испытания и утверждены ученым советом ФГБУ «ВНИИЗЖ» «Методические рекомендации по выявлению антигена вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в непрямом жидкофазном блокирующем варианте иммуноферментного анализа» (2019 г.).

1. Пузанкова О. С., Гаврилова В. Л., Шевцов А. А., Баборенко Е. П., Кондакова Ж. С. Выявление специфических антител к вирусу РРСС с помощью РМН. Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2011; 1: 35–40. eLIBRARY ID: 15615534.

2. Ouyang K., Hiremath J., Binjawadagi B., Shyu D. L., Dhakal S., Arcos J., et al. Comparative analysis of routes of immunization of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine in a heterologous virus challenge study. Vet. Res. 2016; 47:45. DOI: 10.1186/s13567-016-0331-3.

3. Zhou L., Kang R., Zhang Y., Yu J., Xie B., Chen C., et al. Emergence of two novel recombinant porcine reproductive and respiratory syndrome viruses 2 (lineage 3) in Southwestern China. Vet. Microbiol. 2019; 232: 30–41. DOI: 10.1016/j.vetmic.2019.01.026.

4. Баборенко Е. П., Бьядовская О. П., Кондакова Ж. С., Яшин Р. В. Методические рекомендации по выявлению антигена вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней в непрямом жидкофазном блокирующем варианте иммуноферментного анализа: утв. ФГБУ «ВНИИЗЖ» 10.01.2019 г. № 79-18. Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ»; 2019. 24 с.