veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2020-2-33-109-114veterinary-476Research ArticleБОЛЕЗНИ СВИНЕЙPORCINE DISEASESРазработка и применение тест-системы на основе непрямого жидкофазного блокирующего варианта ИФА для определения антигена вируса РРСС при технологическом контроле вакцинного сырьяDevelopment and use of indirect liquid-phase ELISA test system for detection of PRRS virus antigen during in-process control of raw materials intended for vaccine productionhttps://orcid.org/0000-0003-2177-9992БаборенкоЕ. П.BaborenkoYe. P.

Баборенко Елена Павловна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории профилактики болезней свиней и  рогатого скота

Yelena P. Baborenko, Candidate of Science (Biology), Senior Researcher, Laboratory for Porcine and Horned Livestock Disease Prevention

baborenko@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8326-7151БьядовскаяО. П.ByadovskayaO. P.

Бьядовская Ольга Петровна, кандидат биологических наук, заведующий референтной лабораторией болезней крупного рогатого скота

Olga P. Byadovskaya, Candidate of Science (Biology), Head of Reference Laboratory for Bovine Diseases

bjadovskaya@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4057-2367БирюченковД. А.BiryuchenkovD. A.

Бирюченков Дмитрий Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник лаборатории профилактики болезней свиней и  рогатого скота

Dmitriy А. Biryuchenkov, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Senior Researcher, Laboratory for Porcine and Horned Livestock Prevention

biruchenkov@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0281-0667КонстантиновА. В.KonstantinovA. V.

Константинов Алексей Владимирович, кандидат ветеринарных наук, начальник испытательного центра ветеринарных препаратов

Alexey V. Konstantinov, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Head of Veterinary Medicinal Product Testing Centre

konstantinov@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1385-705XЯшинР. В.YashinR. V.

Яшин Роман Владимирович, кандидат биологических наук, заведующий лабораторией профилактики болезней свиней и рогатого скота

Roman V. Yashin, Candidate of Science (Biology), Head of Laboratory for Porcine and Horned Livestock Disease Prevention

yashin@arriah.ruФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)РоссияFGBI “Federal Centre for Animal Health” (FGBI “ARRIAH”)Russian Federation20201506202002109114Copyright © Баборенко Е.П., Бьядовская О.П., Бирюченков Д.А., Константинов А.В., Яшин Р.В., 20202020Баборенко Е.П., Бьядовская О.П., Бирюченков Д.А., Константинов А.В., Яшин Р.В.Baborenko Y.P., Byadovskaya O.P., Biryuchenkov D.A., Konstantinov A.V., Yashin R.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/476

Одной из наиболее актуальных проблем свиноводства остается репродуктивно-респираторный синдром свиней, который является эндемичным заболеванием и регистрируется в большинстве стран мира. К основным мерам борьбы с заболеванием относятся профилактическая вакцинация, контроль за передвижением животных как внутри страны, так и за ее пределами, а также постоянное проведение диагностических исследований в популяции свиней. В качестве средств специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней применяются живые и инактивированные вакцины. Основным требованием, предъявляемым к инактивированным препаратам, является полная и необратимая инактивация инфекционного агента при максимальной сохранности антигенной детерминанты и иммунная защита привитых животных. Поэтому актуальной задачей является постоянное совершенствование методов контроля качества вакцин на различных технологических стадиях их производства. В статье представлены результаты разработки тест-системы на основе непрямого жидкофазного блокирующего иммуноферментного анализа для выявления и определения активности антигена вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в инфекционных и инактивированных вируссодержащих препаратах клеточных культур на промежуточных этапах производства вакцинных биопрепаратов. Разработка тест-системы включала получение очищенного и концентрированного препарата антигена вируса, а также специфических гипериммунных сывороток крови кроликов. Специфичность очищенного и концентрированного антигена вируса подтверждали с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Показано, что разработанная тест-система позволяет выявлять антиген вируса с исходным титром инфекционной активности в диапазоне от 4,87 до 7,21 lg ТЦД50/см3 , соответствующий значению титра (разведения) при постановке иммуноферментного анализа от 1:4 до 1:64. В результате проведенной работы были разработаны, прошли комиссионные испытания и утверждены ученым советом ФГБУ «ВНИИЗЖ» «Методические рекомендации по выявлению антигена вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в непрямом жидкофазном блокирующем варианте иммуноферментного анализа» (2019 г.).

Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) being endemic and reported in the most countries in the world remains one of the most challenging diseases in pig industry. The main disease control measures include preventive vaccination and animal movement control within and outside the country as well as diagnostic testing of pigs in the population. Live and inactivated vaccines are used for specific prevention of porcine reproductive and respiratory syndrome. Complete and irreversible infectious agent inactivation with maximum epitope preservation and protective immunity in immunized animals are the main requirements for inactivated vaccines. Therefore, continuous improvement of methods for vaccine quality control at various vaccine production stages is of current importance. Results of development of the test system based on indirect liquid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for PRRS virus antigen detection and activity testing in infectious and inactivated virus-containing cell cultures at intermediate stages of the vaccine production process are described in the paper. The test-system development process included purified and concentrated virus antigen as well as hyperimmune rabbit sera preparation. Specificity of purified and concentrated virus antigen was confirmed with real-time polymerase chain reaction. The developed test-system was shown to detect the virus antigen at initial infectivity titre of 4.87–7.21 lg TCID50/cm3 corresponding to ELISA titre (dilution) of 1:4 up to 1:64. Methodical Guidelines for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus antigen with indirect liquid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (2019) were developed based on the work results, commissioned and approved by the FGBI “ARRIAH” Scientific Board.

репродуктивно-респираторный синдром свинейиммуноферментный анализантигенporcine reproductive and respiratory syndromeenzyme-linked immunosorbent assayantigenРабота выполнена за счет средств ФГБУ «ВНИИЗЖ» в рамках научно-исследовательских работ по теме «Ветеринарное благополучие».The work was funded by the FGBI “ARRIAH” as part of the research activities “Animal health and welfare”.ReferencesПузанкова О. С., Гаврилова В. Л., Шевцов А. А., Баборенко Е. П., Кондакова Ж. С. Выявление специфических антител к вирусу РРСС с помощью РМН. Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2011; 1: 35–40. eLIBRARY ID: 15615534.Puzankova O. S., Gavrilova V. L., Shevtsov A. A., Baborenko Ye. P., Kondakova Zh. S. Detection of specific antibodies against PRRS virus using microneutralization test. Actual Questions of Veterinary Biology. 2011; 1: 35–40. eLIBRARY ID: 15615534. (in Russian)Ouyang K., Hiremath J., Binjawadagi B., Shyu D. L., Dhakal S., Arcos J., et al. Comparative analysis of routes of immunization of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine in a heterologous virus challenge study. Vet. Res. 2016; 47:45. DOI: 10.1186/s13567-016-0331-3.Ouyang K., Hiremath J., Binjawadagi B., Shyu D. L., Dhakal S., Arcos J., et al. Comparative analysis of routes of immunization of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine in a heterologous virus challenge study. Vet. Res. 2016; 47:45. DOI: 10.1186/s13567-016-0331-3.Zhou L., Kang R., Zhang Y., Yu J., Xie B., Chen C., et al. Emergence of two novel recombinant porcine reproductive and respiratory syndrome viruses 2 (lineage 3) in Southwestern China. Vet. Microbiol. 2019; 232: 30–41. DOI: 10.1016/j.vetmic.2019.01.026.Zhou L., Kang R., Zhang Y., Yu J., Xie B., Chen C., et al. Emergence of two novel recombinant porcine reproductive and respiratory syndrome viruses 2 (lineage 3) in Southwestern China. Vet. Microbiol. 2019; 232: 30–41. DOI: 10.1016/j.vetmic.2019.01.026.Баборенко Е. П., Бьядовская О. П., Кондакова Ж. С., Яшин Р. В. Методические рекомендации по выявлению антигена вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней в непрямом жидкофазном блокирующем варианте иммуноферментного анализа: утв. ФГБУ «ВНИИЗЖ» 10.01.2019 г. № 79-18. Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ»; 2019. 24 с.Baborenko Ye. P, Byadovskaya O. P., Kondakova Zh. S., Yashin R. V. Methodical Guidelines for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus antigen with indirect liquid-phase enzyme-linked immunosorbent assay [Metodicheskie rekomendacii po vyyavleniyu antigena virusa reproduktivno-respiratornogo sindroma svinej v nepryamom zhidkofaznom blokiruyushchem variante immunofermentnogo analiza]: approved by the FGBI “ARRIAH” on 10.01.2019 No. 79-81. Vladimir: FGBI “ARRIAH”; 2019. 24 p. (in Russian)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.