Клонирование и экспрессия в E. COLI генов К205 R и B602L вируса африканской чему свиней

Полный текст:


Аннотация

Проведено молекулярное клонирование генов K205R и B602L вируса африканской чумы свиней в f. coli. Отработаны условия экспрессии и очистки, обеспечивающие высокий выход рекомбинантныхбел ков. Очистку растворенных рекомбинантных бел ков проводили методом металл-хелатной хроматографии с применением Ni-NTA-agarose («Qiagen»). Рекомбинантные антигены биологически безопасны, более технологичны в приготовлении и обеспечивают более высокую специфичность ИФА. Выход очищенного протеина со 100 мл культуры £ со//составил 1,5 мг для pK205R и 2 мг для pB602L.

Об авторах

А. В. Щербаков
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия


А. С. Яковлева
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия


А. М. Тимина
ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Россия


М. Р. Якупов
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия


Список литературы

1. Маниатис Т.,Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. - М: Мир, 1984. - 480 с.

2. African swine fever// OIE. Manual of DiagnosticTests and Vaccines for Terrestrial Animals. - 2012. - Vol. 2, Chap. 2.8.1. - URL: http://www.oie.int/international-standard-setting/terrestrial-manual/access-online/ (дата обращения: 01.10.14).

3. African swine fever/J.M. Sanchez-Vizcaino, B. Straw, S. D'Allaire, W. Mengeling // Diseases of Swine / ed. B.E. Straw [et al.]. 9th ed. - Ames, Iowa, 2006. - P. 291-298.

4. African swine fever virus serodiagnosis: a general review with a focus on the analyses of African serum samples /С. Cubilos, S. Gomez, N. Moreno [et al.] //Virus Res. - 2013. - Vol. 173. - P. 159-167.

5. Antigenic properties and diagnostic potential of African swine fever virus protein pp62 expressed in insect cells / C. Gallardo, E. Blanco, J.M. Rodriguez [et al.] //J. Clin. Microbiol. - 2006. - Vol. 44. - P. 950-956.

6. Escribano J.M., Pastor M.J., Sanchez Vizcaino J.M. Antibodies to bovine serum albumin in swine sera: implications for false positive reactions in the serodiagnosis of African swine fever // Am. J. Vet. Res. - 1989. - Vol. 50. - P. 1118-1122.

7. High level expression of the major antigenic African swine fever virus proteins p54 and p30 in baculovirus and their potential use as diagnostic reagents / J.M. Oviedo, F. Rodriguez, P. Gomez-Puertas [et a I.] //J. Virol. Meth. - 1997, -Vol. 64, -P. 27-35.

8. Highly specific confirmatory western blot test of African swine fever virus antibody detection using the recombinant virus protein p54 / C. Alcaraz, F. Rodriguez, J. Oviedo [et al.] // J. Virol. Meth. - 1995. - Vol. 52. - P. 111-119.

9. Optimization and validation of recombinant serological tests for African swine fever diagnosis based on detection of the p30 protein produced on Trichoplusia ni larvae / D.M. Perez-Filgueira, F. Gonzalez-Camacho, C. Gallardo [et al.] //J. Clin. Microbiol. - 2006. -Vol. 44. - P. 3114-3121.

10. Recombinant antigen targets for serodiagnosis of African swine fever / C. Gallardo, A.L. Reis, G. Kalema-Zikusoka [et al.] // Clin. Vaccine Immunol. - 2009. - Vol. 16, -P. 1012-1020.

11. Serodiagnosis of African swine fever using the recombinant protein p30 expressed in insect larvae / M. Barderas, A. Wigdorovitz, F. Merelo [et al.] // J. Virol. Meth. - 2000. - Vol. 89. - P. 129-136.

12. Systematic analysis of longitudinal serological responses of pigs infected experimentally with African swine fever virus / A.L. Reis, R.M. Parkhouse, A.R. Penedos [et al.] //J. Gen. Virol. -2007. - Vol. 88. - P. 2426-2434.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Щербаков А.В., Яковлева А.С., Тимина А.М., Якупов М.Р. Клонирование и экспрессия в E. COLI генов К205 R и B602L вируса африканской чему свиней. Ветеринария сегодня. 2015;(2):27-31.

For citation: Scherbakov A.V., Yakovleva A.S., Timina A.M., Yakupov M.R. Cloning and expression of African swine fever virus K205R and B602L genes inf. COLI. Veterinary Science Today. 2015;(2):27-31. (In Russ.)

Просмотров: 37

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)