Изучение культуральных свойств изолята возбудителя коронавирусного энтерита собак в различных культурах клеток

Этиология заболеваний, сопровождающихся поражением желудочно-кишечного тракта у собак, многообразна. Вторым наиболее распространенным у собак энтеропатогеном вирусной природы в мире после парвовируса является коронавирус CCoV. Обширные исследования, проведенные учеными из разных стран, доказывают повсеместное распространение коронавирусной инфекции в популяции собак. В связи с этим не теряют актуальности вопросы профилактики данного заболевания, в первую очередь изготовление эффективных иммунобиологических препаратов, обеспечивающих надежную защиту от данной инфекции. Целью настоящей работы являлось изучение культуральных свойств изолята CCoV, выбор наиболее подходящей для его репродукции клеточной системы и оптимизация параметров культивирования вируса в чувствительных клеточных линиях. В опытах использовали изолят CCoV, выделенный из патологического материала, полученного от погибшего щенка с симптомами энтерита. В ходе исследований было испытано семь перевиваемых и две первично трипсинизированные культуры клеток и установлено, что наиболее чувствительной клеточной системой для репродукции данного изолята является перевиваемая культура клеток почки кошки CRFK, в которой на 2-е сут культивирования отмечалось характерное цитопатическое действие. Титр инфекционной активности вируса в данной культуре был на уровне 3,58 ± 0,14 lg ТЦД50/см3 . Определено, что такие клеточные линии, как перевиваемая культура клеток селезенки кошки (FS) и первично трипсинизированная культура клеток селезенки котенка (СК), также чувствительны к изоляту CCoV, но в меньшей степени, чем CRFK. Также в ходе опытов изучалось влияние на накопление коронавируса таких показателей, как множественность заражения, время культивирования, способ заражения, срок предварительного контакта (адсорбции) вируса с культурой клеток и возраст клеточной системы для некоторых выбранных культур клеток. Сделан вывод, что линии клеток CRFK и FS могут быть использованы для получения вирусного материала с целью разработки средств диагностики и специфической профилактики коронавирусного энтерита собак.

1. Alves C. D. B. T., Granados O. F. O., Budaszewski R. D. F., Streck A. F., Weber M. N., Cibulski S. P., et al. Identification of enteric viruses circulating in a dog population with low vaccine coverage. Braz. J. Microbiol. 2018; 49 (4): 790–794. DOI: 10.1016/j.bjm.2018.02.006.

2. McElligott S., Collins P. J., Sleator R. D., Martella V., Decaro N., Buonavoglia C., O’Shea H. Detection and genetic characterization of canine parvoviruses and coronaviruses in southern Ireland. Arch. Virol. 2011; 156 (3): 495–503. DOI: 10.1007/s00705-010-0861-3.

3. Decaro N., Desario C., Billi M., Mari V., Elia G., Cavalli A., et al. Western European epidemiologicalsurvey for parvovirus and coronavirusinfections in dogs. Vet. J. 2011; 187 (2): 195–199. DOI: 10.1016/j.tvjl.2009.10.027.

4. Decaro N., Buonavoglia C. An update on canine coronaviruses: viral evolution and pathobiology. Vet. Microbiol. 2008; 132 (3–4): 221–234. DOI: 10.1016/j.vetmic.2008.06.007.

5. MaG. G., Lu C. P. Two genotypes of canine coronavirussimultaneously detected in the fecalsamples of healthy foxes and raccoon dogs. Wei Sheng Wu Xue Bao. 2005; 45 (2): 305–308. PMID: 15989282. (in Chinese)

6. Rosa G. M., Santos N., Grøndahl-Rosado R., Fonseca F. P., Tavares L., Neto I., et al. Unveiling patterns of viral pathogen infection in free-ranging carnivores of northern Portugal using a complementary methodological approach. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2020; 69:101432. DOI: 10.1016/j.cimid.2020.101432.

7. Zarnke R. L., Evermann J., Ver Hoef J. M., McNay M. E., Boertje R. D., Gardner C. L., et al. Serologic survey for canine coronavirus in wolves from Alaska. J. Wildl. Dis. 2001; 37 (4): 740–745. DOI: 10.7589/0090-3558-37.4.740.

8. Sanchez-Morgado J. M., Poynter S., Morris T. H. Molecular characterization of a virulent canine coronavirus BGF strain. Virus Res. 2004; 104 (1): 27–31. DOI: 10.1016/j.virusres.2004.02.038.

9. Evermann J. F., Abbott J. R., Han S. Canine coronavirus-associated puppy mortality without evidence of concurrent canine parvovirus infection. J. Vet. Diagn. Invest. 2005; 17 (6): 610–614. DOI: 10.1177/1040638705 01700618.

10. Escutenaire S., Isaksson M., Renström L. H., Klingeborn B., Buonavoglia C., Berg M., et al. Characterization of divergent and atypical canine coronaviruses from Sweden. Arch. Virol. 2007; 152 (8): 1507–1514. DOI: 10.1007/s00705-007-0986-1.

11. Buonavoglia C., Decaro N., Martella V., Elia G., Campolo M., Desario C., et al. Canine coronavirus highly pathogenic for dogs. Emerg. Infect. Dis. 2006; 12 (3): 492–494. DOI: 10.3201/eid1203.050839.

12. Zicola A., Jolly S., Mathijs E., Ziant D., Decaro N., Mari V., Thiry E. Fatal outbreaks in dogs associated with pantropic canine coronavirus in France and Belgium. J. SmallAnim. Pract. 2012; 53 (5): 297–300. DOI: 10.1111/j.1748- 5827.2011.01178.x.

13. Ntafis V., Mari V., Danika S., Fragkiadaki E., Buonavoglia C. An outbreak of canine coronavirusin puppiesin aGreek kennel. J. Vet. Diagn. Invest. 2010; 22 (2): 320–323. DOI: 10.1177/104063871002200231.

14. Radford A. D., Singleton D. A., Jewell C., Appleton C., Rowlingson B., Hale A. C., et al. Outbreak of severe vomiting in dogs associated with a canine enteric coronavirus, United Kingdom. Emerg. Infect. Dis. 2021; 27 (2): 517–528. DOI: 10.3201/eid2702.202452.

15. Collins M., Singleton D. A., Noble P. J. M., Pinchbeck G. L., Smith S., Brant B., et al. Small animal disease surveillance 2020/21: SARS-CoV-2, syndromic surveillance and an outbreak of acute vomiting in UK dogs. Vet. Rec. 2021; 188 (8):304. DOI: 10.1002/vetr.427.

16. Pratelli A., Elia G., Martella V., Tinelli A., Decaro N., Marsilio F., et al. M gene evolution of canine coronavirusin naturally infected dogs. Vet. Rec. 2002; 151 (25): 758–761. PMID: 12521247.

17. Wang X., Li C., Guo D., Wang X., Wei S., Geng Y., et al. Co-circulation of canine coronavirusI and IIa/b with high prevalence and genetic diversity inHeilongjiang Province, Northeast China. PLoSOne. 2016; 11 (1):e0146975. DOI: 10.1371/journal.pone.0146975.