Preview

Ветеринария сегодня

Расширенный поиск

Определение концентрации 146S частиц вируса ящура спектрометрическим способом при оценке количества вирусной РНК

https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-4-35-304-312

Полный текст:

Аннотация

В процессе промышленного производства противоящурных вакцин особое внимание уделяют концентрации 146S частиц, которые наделены важнейшими биологическими свойствами вируса ящура и являются основными компонентами, влияющими на иммуногенную активность вакцинных препаратов. По этой причине каждую серию вакцинного сырья исследуют на определение концентрации 146S компонента. В статье представлены результаты изучения применения спектрометрического метода для определения концентрации полных частиц при оценке количества РНК вируса ящура, выделенной после иммунного захвата. Данный способ является дешевым, простым в исполнении, позволяет определять концентрацию 146S частиц вируса ящура в неинактивированной культуральной суспензии. Выявлено существование зависимости между концентрацией 146S частиц и количеством молекул РНК, выделенных из вирионов после их штаммоспецифического иммунного захвата и количественно детектированных спектрометрическим методом. Представленный метод позволяет определять значение концентрации 146S компонента вируса ящура в неинактивированном сырье для вакцины с применением предложенной линейной модели. Корреляция спектрометрического способа с полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией в режиме реального времени и реакцией связывания комплемента при тестировании 360 неинактивированных суспензий вируса ящура всех типов составила 94,5–99,5%. Для положительного контроля совпадение фактических и ожидаемых результатов соответствовало 99,0–99,6%. В отрицательном контрольном образце геном и 146S частицы вируса ящура не обнаружены, что соответствовало ожиданиям.

Об авторах

М. И. Доронин
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Доронин Максим Игоревич, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории профилактики ящура

г. Владимир



Д. В. Михалишин
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Михалишин Дмитрий Валерьевич, кандидат ветеринарных наук, заведующий лабораторией профилактики ящура

г. Владимир



В. А. Стариков
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Стариков Вячеслав Алексеевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики ящура

г. Владимир



Д. А. Лозовой
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Лозовой Дмитрий Анатольевич, доктор ветеринарных наук, доцент

г. Владимир



Ю. С. Елькина
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Елькина Юлия Сергеевна, аспирант, технолог лаборатории профилактики ящура

г. Владимир



А. В. Борисов
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Борисов Алексей Валерьевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики ящура

г. Владимир



Список литературы

1. Foot and mouth disease (infection with foot and mouth disease virus). In: OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 2018; Chap. 3.1.8: 433–464. Available at: https://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.01.08_FMD.pdf.

2. Lubroth J., Rodriguez L., Dekker A. Vesicular diseases. In: Diseases of Swine. Ed. by B. E. Straw, J. J. Zimmerman, S. D’Allaire, D. J. Taylor. 9th ed. Ames, Iowa, USA: Blackwell Publishing Professional; 2006: 517–536.

3. Nucleotide Database of National Center for Biotechnology Information (NCBI). Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/?term=FMDV+complete (date of access: 25.02.2019).

4. Пономарев А. П., Узюмов В. Л. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. Владимир: Фолиант; 2006. 250 с.

5. Alexandersen S., Zhang Z., Donaldson A. L., Garland A. J. M. The pathogenesis and diagnosis of foot-and-mouth disease. J. Comp. Pathol. 2003; 129 (1): 1–36. DOI: 10.1016/s0021-9975(03)00041-0.

6. Бондаренко А. Ф. Качественный и количественный иммунохимический анализ вирусных белков. Суздаль; 1994. 92 с.

7. Лозовой Д. А., Михалишин Д. В., Доронин М. И., Щербаков А. В., Тимина А. М., Шишкова А. A. и др. Способ определения концентрации 146S-компонента вируса ящура в вируссодержащем сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Патент № 2619878 Российская Федерация, МПК G01N 33/58 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01). ФГБУ «ВНИИЗЖ». № 2016140460. Заявл. 14.10.2016. Опубл. 18.05.2017. Бюл. № 14.

8. Chomczynski P., Sacchi N. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twentysomething years on. Nat. Protoc. 2006; 1 (2): 581–585. DOI: 10.1038/ nprot.2006.83.

9. Peirson S. N., Butler J. N. RNA extraction from mammalian tissues. In: Circadian Rhythms. Methods in Molecular Biology™. Ed. by E. Rosato. 2007; 362: 315–327. DOI: 10.1007/978-1-59745-257-1_22.

10. Владимиров Ю. А., Потапенко А. Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов. М.: Высшая школа; 1989: 20–22.

11. Капорский Л. Н. Оптическая плотность. В кн.: Физическая энциклопедия. Т. 3: Магнитоплазменный – Пойнтинга теорема. Гл. ред. А. М. Прохоров. М.: Большая Российская энциклопедия; 1992: 441.

12. Glasel J. A. Validity of nucleic acid purities monitored by 260nm/280nm absorbance ratios. Biotechniques. 1995; 18 (1): 62–63. PMID: 7702855.

13. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика: пер. с англ. М.: Мир, 1991. 544 с.

14. Newell D. B. A more fundamental International System of Units. Physics Today. 2014; 67 (7): 35–41. DOI: 10.1063/PT.3.2448.

15. Strohmaier K., Adam K.-H. Die Struktur des Virus der Maulund Klauenseuche. Zentralblatt für Veterinärmedizin. Reihe B. 1976; 23 (5/6): 483– 506. DOI: 10.1111/j.1439-0450.1976.tb01628.x


Для цитирования:


Доронин М.И., Михалишин Д.В., Стариков В.А., Лозовой Д.А., Елькина Ю.С., Борисов А.В. Определение концентрации 146S частиц вируса ящура спектрометрическим способом при оценке количества вирусной РНК. Ветеринария сегодня. 2020;(4):304-312. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-4-35-304-312

For citation:


Doronin M.I., Mikhalishin D.V., Starikov V.A., Lozovoy D.A., El’kina Yu.S., Borisov A.V. Determination of FMDV 146S particle concentration by spectrometric method during viral RNA quantification. Veterinary Science Today. 2020;(4):304-312. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-4-35-304-312

Просмотров: 214


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)