Получение иммортализованной культуры клеток почки кролика

Получение иммортализованных клеточных линий, происходящих из органов и тканей сельскохозяйственных животных, является актуальным направлением биотехнологии. В статье представлены результаты получения постоянной (иммортализованной) клеточной линии из первично трипсинизированной культуры клеток почки взрослого кролика. В процессе субкультивирования проводили цитоморфологические и кариологические исследования на 1, 3, 24, 31, 38, 56, 66, 75, 86, 101-м пассажах. При проведении длительных последовательных пассажей была прослежена динамика спонтанного формирования постоянной клеточной линии с использованием стандартных питательных сред и эмбриональной сыворотки. В отличие от известных клеточных линий, произошедших от обыкновенного домашнего кролика (Oryctolagus cuniculus L.), было отмечено, что иммортализация не сопровождалась увеличением продуктивности клеток и уменьшением их размеров. Размеры клеток полученной перевиваемой линии достигали в адгезированном состоянии 200 микрометров, продуктивность составляла 7000 клеток на квадратный сантиметр. Значительные отличия (в сравнении с известными линиями) в процессе пассирования обнаруживались и в кариотипе. При стабилизации культуральных свойств постоянной линии клеток на 66–101-м пассажах генотип сформировался как околотетраплоидный. Известные клеточные линии – почка кролика (RK-13) и роговица глаза кролика (SIRC) – по кариотипу оказались псевдотриплоидные. Данная культура оказалась малочувствительной к вирусам – возбудителям болезней кроликов и чувствительной к гетерологичным вирусам свиней и крупного рогатого скота.

1. Hayflick L., Moorhead P. S. The serial cultivation of human diploid cell strains. Exp. Cell Res. 1961; 25 (3): 585–621. DOI: 10.1016/0014-4827(61)90192-6.

2. Дункан Э. Л., Реддел Р. Р. Генетические изменения, связанные с иммортализацией. Биохимия. 1997; 62 (11): 1477–1490. Режим доступа: https://journals.belozersky.msu.ru/biochemistry-content/d/1997/11/1477-1490.pdf.

3. Мамаева С. Е. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре. Цитология. 1996; 38 (8): 787–814.

4. Полянская Г. Г. Кариотипическая изменчивость в клеточных линиях и структура кариотипа. Клеточные культуры (информационный бюллетень). 2009; 24: 15–24.

5. Манин Б. Л., Коропова Н. В., Трофимова Е. А. Идентификация постоянных клеточных линий животных по кариологическим, морфологическим и культуральным признакам. Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2012; 10: 246–254. eLIBRARY ID: 18881531.

6. Каталог. Российская коллекция клеточных культур (РККК). Ред. Г. П. Пинаев и др. СПб.; 2004. 315 с.

7. Глаголева И. С., Плотникова Э. М. Возможность применения первичных культур клеток почек новорожденных крольчат в производстве вакцинных препаратов. Гены и клетки. 2014; 9 (3): 151–154. eLIBRARY ID: 29332365.

8. Животная клетка в культуре (методы и применение в биотехнологии). Под ред. Л. П. Дьяконова; Рос. акад. с.-х. наук. 2-е изд. доп. М.: Спутник+; 2009. 656 с.

9. Плотникова Э. М., Кириллова Ю. М., Глаголева И. С. Подбор оптимальных условий роста первичной культуры клеток почек новорожденных кроликов. Веткорм. 2012; 4: 42–44. eLIBRARY ID: 20356980.

10. Вологина И. В., Манин Б. Л., Коропова Н. В. Оптимизация условий трипсинизации и культивирования первичных клеток почек кролик. Достижения молодых ученых – в ветеринарную практику: материалы V Международной научной конференции (г. Владимир, 5–6 декабря 2019 г.). Под общ. ред. Д. А. Лозового. Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ»; 2019; 57–62. eLIBRARY ID: 41589695.

11. Реддел Р. Р., Брайан Т. М., Мернейн Д. П. Иммортализованные клетки без измеримой активности теломеразы. Биохимия. 1997; 62 (11): 1467–1476. Режим доступа: http://journals.belozersky.msu.ru/biochemistry/paper/1997/11/1467.