Preview

Ветеринария сегодня

Расширенный поиск

Опосредованное определение концентрации 146S компонента вируса ящура в неинактивированной суспензии при сравнении графиков второй производной для кривых ОТ-ПЦР-РВ

https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-3-34-220-227

Полный текст:

Аннотация

При репродукции в биологических системах вирус ящура формирует 4 варианта компонентов, три из которых не включают в себя РНК вируса. В процессе промышленного производства противоящурных вакцин особое внимание уделяют количеству цельных вирионов, которые обладают важнейшими биологическими свойствами вируса ящура и являются основными компонентами, определяющими иммуногенность вакцинных препаратов. Сырье для вакцин на различных этапах технологического процесса исследуют с целью определения концентрации 146S компонента вируса ящура. Традиционным методом определения является количественный вариант реакции связывания комплемента. Для опосредованного определения концентрации 146S компонента вируса ящура в вируссодержащей суспензии в последние годы стали использовать полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией в режиме реального времени. В статье представлен новый подход к опосредованному определению концентрации 146S компонента вируса ящура в неинактивированной суспензии при сравнении максимальных экстремумов графиков второй производной кривых накопления сигнала флуоресценции относительно количества циклов реакции амплификации. Существование зависимости между концентрацией 146S компонента вируса ящура и максимальными экстремумами графиков второй производной кривой накопления флуоресцентного сигнала представлено в виде квадратичной функции С146S ВЯ = 0,0111(Сp)2 – 1,0157Cp + 20,446 с высокой достоверностью аппроксимации (R2 = 0,993). Предложенная модель позволяет количественно оценивать содержание 146S компонента в вируссодержащем сырье для вакцины. Представленный способ позволяет исследовать большое количество образцов неинактивированного сырья для противоящурной вакцины за 4–5 ч. Основным преимуществом предлагаемого способа является возможность определения концентрации 146S компонента вируса ящура в суспензии, содержащей высокое количество балластного белка (более 7,00 мг/см3) и количество полных вирусных частиц от 0,01 до 5,00 мкг/см3.

Об авторах

М. И. Доронин
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Доронин Максим Игоревич, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории профилактики ящура

600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец



Д. В. Михалишин
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Михалишин Дмитрий Валерьевич, кандидат ветеринарных наук, заведующий лабораторией профилактики ящура

г. Владимир



В. А. Стариков
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Стариков Вячеслав Алексеевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики ящура

г. Владимир



Д. А. Лозовой
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Лозовой Дмитрий Анатольевич, доктор ветеринарных наук, доцент

г. Владимир



А. В. Борисов
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
Россия

Борисов Алексей Валерьевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики ящура

г. Владимир



Список литературы

1. Lubroth J., Rodriguez L., Dekker A. Vesicular diseases. In: Diseases of Swine. Ed by B. E. Straw, J. J. Zimmerman, S. D’Allaire, D. J. Taylor. 9 th ed. Ames, Iowa, USA: Blackwell Publishing Professional; 2006: 517–536.

2. Foot and mouth disease (infection with foot and mouth disease virus). In: OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 2018; Chap. 3.1.8: 433–464. Available at: https://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.01.08_FMD.pdf.

3. Пономарев А. П., Узюмов В. Л. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. Владимир: Фолиант; 2006. 250 с.

4. Alexandersen S., Zhang Z., Donaldson A. L., Garland A. J. M. The pathogenesis and diagnosis of foot-and-mouth disease. J. Comp. Pathol. 2003; 129 (1): 1–36. DOI: 10.1016/s0021-9975(03)00041-0.

5. Food-and-Mouth Disease Virus. Taxonomy. Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/taxonomy/?term=FMDV.

6. Бондаренко А. Ф. Качественный и количественный иммунохимический анализ вирусных белков. Суздаль. 1994: 92 с.

7. Лозовой Д. А., Михалишин Д. В., Доронин М. И., Щербаков А. В., Тимина А. М., Шишкова А. A. и др. Способ определения концентрации 146S-компонента вируса ящура в вируссодержащем сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Патент № 2619878 Российская Федерация, МПК G01N 33/58 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01). ФГБУ «ВНИИЗЖ». № 2016140460. Заявл. 14.10.2016. Опубл. 18.05.2017. Бюл. № 14.

8. Liu W., Saint D. A. Validation of a quantitative method for real-time PCR kinetics. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002; 294 (2): 347–353. DOI: 10.1016/S0006-291X(02)00478-3.

9. Peirson S. N., Butler J. M., Foster R. G. Experimantal validation of novel and conventional approaches to quantitative real-time PCR data analysis. Nucleic Acids Res. 2003; 31 (14):e73. DOI: 10.1093/nar/gng073.

10. Shaw A. E., Reid S. M., Ebert K., Hutchings G. H., Ferris N. P., King D. P. Implementation of a one-step real-time RT-PCR protocol for diagno sis of foot-and-mouth disease. J. Virol. Methods. 2007; 143 (1): 81–85. DOI: 10.1016/j.jviromet.2007.02.009.

11. Scherbakov A., Lomakina N., Drygin V., Gusev А. Application of RT-PCR and nucleotide sequencing in foot-and-mouth disease diagnosis. Veterinary Quarterly. 1998; 20 (2): 32–34. DOI: 10.1080/01652176.1998.9694962.

12. Wernike K., Beer M., Hoffmann B. Rapid detection of foot-and-mouth disease virus, influenza A virus and classical swine fever virus by high-speed real-time RT-PCR. J. Virol. Methods. 2013; 193 (1): 50–54. DOI: 10.1016/j.jviromet.2013.05.005.

13. Chomczynski P., Sacchi N. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twentysomething years on. Nat. Protoc. 2006; 1 (2): 581–585. DOI: 10.1038/nprot.2006.83.

14. Peirson S. N., Butler J. N. RNA extraction from mammalian tissues. In: Circadian Rhythms. Methods in Molecular Biology™. Eds E. Rosato. 2007; 362: 315–327. DOI: 10.1007/978-1-59745-257-1_22.

15. The analysis of DNA or RNA using its wavelengths: 230 nm, 260 nm, 280 nm. Available at: https://www.webcitation.org/6ATzE7YQz?url=http://bioteachnology.com/dna/analysis-dna-rna-wavelengths-230-260-280-nm (date of access: 02.06.2019).

16. Glasel J. A. Validity of nucleic acid purities monitored by 260 nm/280 nm absorbance ratios. Biotechniques. 1995; 18 (1): 62–63. PMID: 7702855.

17. Rutledge R. G., Côté C. Mathematics of quantitative kinetic PCR and the application of standard curves. Nucleic Acids Res. 2004; 31 (16):e93. DOI: 10.1093/nar/gng093.

18. Wittwer C. T., Gutekunst M., Lohmann S. Method for quantification of an analyte. Patent No. 6,503,720 B2 United States, Int. Cl. C12Q 1/68, C12P 19/34; C07H 21/04; CO7H 21/00. Roche Diagnostics GmbH (DE); University of Utah Research Foundation, Salt Lake City, UT (US). Appl. No. 09/789,170. Filed: Feb. 20, 2001. Prior publication data: Mar. 7, 2002. Date of patent: Jan. 7, 2003.


Для цитирования:


Доронин М.И., Михалишин Д.В., Стариков В.А., Лозовой Д.А., Борисов А.В. Опосредованное определение концентрации 146S компонента вируса ящура в неинактивированной суспензии при сравнении графиков второй производной для кривых ОТ-ПЦР-РВ. Ветеринария сегодня. 2020;(3):220-227. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-3-34-220-227

For citation:


Doronin M.I., Mikhalishin D.V., Starikov V.A., Lozovoy D.A., Borisov A.V. Indirect determination of FMDV 146S component concentration in non-inactivated suspension by comparison of graphs of the second derivative for real-time RT-PCR curves. Veterinary Science Today. 2020;(3):220-227. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-3-34-220-227

Просмотров: 175


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)