Study of african swine fevervirus reproduction in porcine primary bone marrow cell culture before and after cryopreservation

This paper presents data on the preparation of cells from porcine bone marrow, spleen, lymph nodes, kidneys and testicles used for African swine fever virus reproduction. Viability of cells after cryopreservation was studied only in porcine bone marrow cell culture. The cell culture was frozen and stored at -70, -150 and -196°C. 10% dimethyl sulfide supplemented with 10% of fetal bovine serum was used as a cryoprotectant. When the cells were thawed and the cryoprotectant was removed 10 lU/ml of heparin sodium was added to prevent cell aggregation. ASFV culturing in porcine bone marrow cell culture stored at -150 and -196°C during 5-6 months demonstrated the highest haemadsorption titers: 5,76±0,25 Ig HAdU₅₀/0,15 cm³ and (4,66-4,87)±0,25 Ig HAdU_50/0,15 cm³, respectively. Porcine bone marrow cells remained viable only for four months of storage at -70°C and were able to maintain the virus reproduction at the level of (3,2-3,86)±0,25 Ig HAdU₅₀/0,15 cm³ when thawed.

вирус африканской чумы свиней, культура клеток костного мозга свиней, гемадсорбирующий титр вируса, African swine fever virus, porcine bone marrow cell culture, virus hemadsorption titer

1. Дьяконов Л.П. Животная клетка в культуре. - М., 2009. - 120 с.

2. Макаров В.В., Сухарев О.И.,Литвинов О.Б. Система «клещи рода Ornithodoros - вирус африканской чумы свиней»: биоэкология, вирусология, эпизоотология // Ветеринарная патология. - 2011. - № 3. - С. 18-19.

3. Манин Б.Л. Криоконсервирование и культивирование клеточных линий - две фазы существования биологических объектов // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2008. - Т. 6, - С. 390-405.

4. Методические рекомендации по получению культуры клеток костного мозга свиней для изучения культуральных свойств изолятов вируса африканской чумы свиней / A.A. Варенцова, И.Ю. Жуков, В.Л. Гаврилова [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2014. - 14 с.

5. Низкотемпературное консервирование костного мозга / Н.С. Пушкарь, А.М. Белоус, A.A. Цуцаева [и др.]. - Киев: Наук. Думка, 1976. - 288 с.

6. Оптимизация условий получения культуры клеток костного мозга свиней / И.Ю. Жуков, И.В. Шевченко, A.A. Варенцова [и др.] // IV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «Молодежь и наука XXI» 16-20.09.14 г.: сб. научных трудов. Т. 1. - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2014. - С. 46-52.

7. Оптимизация условий хранения альвеолярных макрофагов и клеток костного мозга свиней при низких температурах / О.С. Пузанкова, И.Ю. Жуков, A.A. Варенцова [и др.] // IV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «Молодежь и наука XXI» 16-20.09.14: сб. научных трудов. Т. 1. - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2014. - С. 103-111.

8. Способы культивирования вирусов. Культура клеток. - URL: medicalplanet.su/1372/html (дата обращения: 20.11.15).

9. Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. - М.: Медицина, 1978. - 200 с.

10. Шишков В.П. Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: Советская энциклопедия, 1981. - С. 247-248.

11. Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. Interaction entry of African swine fever virus with macrophages // Virus Res. - 1990. - Vol. 17, № 2. - P. 93-104.

12. Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever vi-rusintoVero cells // Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 393-398.

13. Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. The entry of African swine fever virus into Vero cells // Virology. - 1989. - Vol. 171, № 1, -P. 68-75.

14. Apoptosis indused in an early step of African swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication / A.L. Carrascosa, MJ. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 294, № 2. - P. 372-382.

15. Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2010. Vol. 140, № 1 -2. - P. 9-17.

16. Dyakonov L.P. Animal cell in culture. - М., 2009. -120 p.

17. Makarov V.V., Sukharev O.l., Litvinov O.B. Ornitho-doros ticks - African swine fever virus system: Bioecology, virology, epidemiology//Veterinarnaya Patologiya.- 2011. - № 3.-P. 18-19.

18. Manin B.L. Cryopreservation and culturing of cell lines: two phases of biological object existence//Proceedings of the Federal Centre for Animal Health. - Vladimir, 2008.-Vol. 6.-P. 390-405.

19. Methodical recommendations for preparation of porcine bone marrow cell culture for study of ASFV isolate cultural properties / A.A. Varentsova, I.Yu. Zhukov, V.L. Gavrilova [et al.]; FGBI «ARRIAH». - Vladimir, 2014. -14 p.

20. Low-temperature preservation of bone marrow/ N.S. Pushkar, A.M. Belous, A.A. Tsutsayeva [et al.]. - Kiev: Naukova Dumka, 1976 - 288 p.

21. Optimization of bone marrow cell culture preparation conditions / I.Yu. Zhukov, I.V. Shevchenko, A.A. Varentsova [et al.] //The IV International scientific workshop for young scientists «Youth and Science XXI» 16-20.09.14.: Proceedings. Vol. 1. - Ulyanovsk: USAA named after P.A. Stolypin, 2014. - P. 46-52.

22. Optimization of storage conditions for porcine alveolar macrophages and bone marrow cells at low temperatures / O.S. Puzankova, I.Yu. Zhukov, A.A. Varentsova [etal.]//The IV International scientific workshop for young scientists «Youth and Science XXI» 16-20.09.14.: Proceed Fig. 2. Bone marrow cells stained with acridine orange (0,01 %), post 3 months of storage at-196°C in liquid nitrogen Fig. 3. Bone marrow cells stained with acridine orange (0,01 %), post 6 months of storage at-196°C in liquid nitrogen ings. Vol. 1. - Ulyanovsk: USAA named after P.A. Stolypin, 2014,-P. 103-111.

23. Virus culture methods. Cell culture. - URL: medical-planet.su/1372/html (reference date: 20.11.15).

24. Uchitel I.Ya. Role of macrophages in immunity. - M.: Meditsina, 1978. - 200 p.

25. ShishkovV.P. Veterinary medicine encyclopedia. -M.: Sovetskaya Entsiklopedia, 1981. - P. 247-248.

26. Alcami A.,Carrascosa A.L.,Vinuela E. Interaction entry of African swine fever virus with macrophages//Virus Res. - 1990. - Vol. 17, № 2. - P. 93-104.

27. Alcami A., Carrascosa A.L.,Vinuela E. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever virus into Vero cells //Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 393-398.

28. Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E.The entry of African swine fever virus into Vero cells //Virology. - 1989. -Vol. 171, № 1,-P. 68-75.

29. Apoptosis indused in an early step of African swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication / A.L. Carrascosa, MJ. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 294, № 2. - P. 372-382.

30. Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] //Veterinary Microbiology. - 2010. Vol. 140, № 1-2. - P. 9-17.