veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"veterinary-226Research ArticleБОЛЕЗНИ СВИНЕЙPORCINE DISEASESИзучение репродукции вируса африканской чумы свиней на первичной культуре клеток костного мозга свиней до и после криоконсервированияStudy of african swine fevervirus reproduction in porcine primary bone marrow cell culture before and after cryopreservationЖуковИ. Ю.ZhukovI. Yu.zhukov@arriah.ruШевченкоИ. В.ShevchenkoI. V.shevchenko@arriah.ruВласоваН. Н.VlasovaN. N.vlasova_nn@arriah.ruВаренцоваА. А.VarentsovaA. A.varentsova@arriah.ruМанинБ. Л.ManinB. L.manin_bl@arriah.ruПузанковаО. С.PuzankovaO. S.puzankova@arriah.ruГавриловаВ. Л.GavrilovaV. L.gavrilova_vl@arriah.ruИголкинА. С.IgolkinA. S.igolkin_as@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation20160204201801715Copyright © Жуков И.Ю., Шевченко И.В., Власова Н.Н., Варенцова А.А., Манин Б.Л., Пузанкова О.С., Гаврилова В.Л., Иголкин А.С., 20182018Жуков И.Ю., Шевченко И.В., Власова Н.Н., Варенцова А.А., Манин Б.Л., Пузанкова О.С., Гаврилова В.Л., Иголкин А.С.Zhukov I.Y., Shevchenko I.V., Vlasova N.N., Varentsova A.A., Manin B.L., Puzankova O.S., Gavrilova V.L., Igolkin A.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/226

В настоящей работе приводятся данные по получению клеток костного мозга свиней, селезенки свиней, лимфатических узлов, свиной почки, тестикул свиней, используемых для репродукции вируса африканской чумы свиней. Изучение сохранности клеток при криоконсервировании проводили только с культурой клеток костного мозга свиней. Замораживание и хранение проводили при -70, -150 и -196°С. В качестве криопротектора применяли диметилсульфоксид в концентрации 10% с добавлением 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота. После размораживания клеток и освобождения от криопротектора для предотвращения агрегации клеток добавляли 10 ME/мл гепарина натрия. Самые высокие гемадсорбирующие титры были получены при культивировании вируса африканской чумы свиней на культуре клеток костного мозга свиней, хранившейся при температуре -150 и -196°С в течение 5-6 месяцев, они составляли 5,76±0,25 lg ГАдЕ5О/0,15 см3 и (4,66-4,87)±0,25 lg ГАдЕ50 /15 см3 соответственно. Клетки костного мозга свиней сохраняли свою жизнеспособность только в течение 4 месяцев хранения при -70°С и после размораживания были способны поддерживать репродукцию вируса на уровне (3,2-3,86)±0,25 lg ГАдЕ5О/0,15 см3.

This paper presents data on the preparation of cells from porcine bone marrow, spleen, lymph nodes, kidneys and testicles used for African swine fever virus reproduction. Viability of cells after cryopreservation was studied only in porcine bone marrow cell culture. The cell culture was frozen and stored at -70, -150 and -196°C. 10% dimethyl sulfide supplemented with 10% of fetal bovine serum was used as a cryoprotectant. When the cells were thawed and the cryoprotectant was removed 10 lU/ml of heparin sodium was added to prevent cell aggregation. ASFV culturing in porcine bone marrow cell culture stored at -150 and -196°C during 5-6 months demonstrated the highest haemadsorption titers: 5,76±0,25 Ig HAdU50/0,15 cm3 and (4,66-4,87)±0,25 Ig HAdU50/0,15 cm3, respectively. Porcine bone marrow cells remained viable only for four months of storage at -70°C and were able to maintain the virus reproduction at the level of (3,2-3,86)±0,25 Ig HAdU50/0,15 cm3 when thawed.

вирус африканской чумы свинейкультура клеток костного мозга свинейгемадсорбирующий титр вирусаAfrican swine fever virusporcine bone marrow cell culturevirus hemadsorption titerReferencesДьяконов Л.П. Животная клетка в культуре. - М., 2009. - 120 с.Дьяконов Л.П. Животная клетка в культуре. - М., 2009. - 120 с.Макаров В.В., Сухарев О.И.,Литвинов О.Б. Система «клещи рода Ornithodoros - вирус африканской чумы свиней»: биоэкология, вирусология, эпизоотология // Ветеринарная патология. - 2011. - № 3. - С. 18-19.Макаров В.В., Сухарев О.И.,Литвинов О.Б. Система «клещи рода Ornithodoros - вирус африканской чумы свиней»: биоэкология, вирусология, эпизоотология // Ветеринарная патология. - 2011. - № 3. - С. 18-19.Манин Б.Л. Криоконсервирование и культивирование клеточных линий - две фазы существования биологических объектов // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2008. - Т. 6, - С. 390-405.Манин Б.Л. Криоконсервирование и культивирование клеточных линий - две фазы существования биологических объектов // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2008. - Т. 6, - С. 390-405.Методические рекомендации по получению культуры клеток костного мозга свиней для изучения культуральных свойств изолятов вируса африканской чумы свиней / A.A. Варенцова, И.Ю. Жуков, В.Л. Гаврилова [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2014. - 14 с.Методические рекомендации по получению культуры клеток костного мозга свиней для изучения культуральных свойств изолятов вируса африканской чумы свиней / A.A. Варенцова, И.Ю. Жуков, В.Л. Гаврилова [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2014. - 14 с.Низкотемпературное консервирование костного мозга / Н.С. Пушкарь, А.М. Белоус, A.A. Цуцаева [и др.]. - Киев: Наук. Думка, 1976. - 288 с.Низкотемпературное консервирование костного мозга / Н.С. Пушкарь, А.М. Белоус, A.A. Цуцаева [и др.]. - Киев: Наук. Думка, 1976. - 288 с.Оптимизация условий получения культуры клеток костного мозга свиней / И.Ю. Жуков, И.В. Шевченко, A.A. Варенцова [и др.] // IV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «Молодежь и наука XXI» 16-20.09.14 г.: сб. научных трудов. Т. 1. - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2014. - С. 46-52.Оптимизация условий получения культуры клеток костного мозга свиней / И.Ю. Жуков, И.В. Шевченко, A.A. Варенцова [и др.] // IV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «Молодежь и наука XXI» 16-20.09.14 г.: сб. научных трудов. Т. 1. - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2014. - С. 46-52.Оптимизация условий хранения альвеолярных макрофагов и клеток костного мозга свиней при низких температурах / О.С. Пузанкова, И.Ю. Жуков, A.A. Варенцова [и др.] // IV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «Молодежь и наука XXI» 16-20.09.14: сб. научных трудов. Т. 1. - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2014. - С. 103-111.Оптимизация условий хранения альвеолярных макрофагов и клеток костного мозга свиней при низких температурах / О.С. Пузанкова, И.Ю. Жуков, A.A. Варенцова [и др.] // IV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «Молодежь и наука XXI» 16-20.09.14: сб. научных трудов. Т. 1. - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2014. - С. 103-111.Способы культивирования вирусов. Культура клеток. - URL: medicalplanet.su/1372/html (дата обращения: 20.11.15).Способы культивирования вирусов. Культура клеток. - URL: medicalplanet.su/1372/html (дата обращения: 20.11.15).Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. - М.: Медицина, 1978. - 200 с.Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. - М.: Медицина, 1978. - 200 с.Шишков В.П. Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: Советская энциклопедия, 1981. - С. 247-248.Шишков В.П. Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: Советская энциклопедия, 1981. - С. 247-248.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. Interaction entry of African swine fever virus with macrophages // Virus Res. - 1990. - Vol. 17, № 2. - P. 93-104.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. Interaction entry of African swine fever virus with macrophages // Virus Res. - 1990. - Vol. 17, № 2. - P. 93-104.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever vi-rusintoVero cells // Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 393-398.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever vi-rusintoVero cells // Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 393-398.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. The entry of African swine fever virus into Vero cells // Virology. - 1989. - Vol. 171, № 1, -P. 68-75.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E. The entry of African swine fever virus into Vero cells // Virology. - 1989. - Vol. 171, № 1, -P. 68-75.Apoptosis indused in an early step of African swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication / A.L. Carrascosa, MJ. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 294, № 2. - P. 372-382.Apoptosis indused in an early step of African swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication / A.L. Carrascosa, MJ. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 294, № 2. - P. 372-382.Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2010. Vol. 140, № 1 -2. - P. 9-17.Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2010. Vol. 140, № 1 -2. - P. 9-17.Dyakonov L.P. Animal cell in culture. - М., 2009. -120 p.Dyakonov L.P. Animal cell in culture. - М., 2009. -120 p.Makarov V.V., Sukharev O.l., Litvinov O.B. Ornitho-doros ticks - African swine fever virus system: Bioecology, virology, epidemiology//Veterinarnaya Patologiya.- 2011. - № 3.-P. 18-19.Makarov V.V., Sukharev O.l., Litvinov O.B. Ornitho-doros ticks - African swine fever virus system: Bioecology, virology, epidemiology//Veterinarnaya Patologiya.- 2011. - № 3.-P. 18-19.Manin B.L. Cryopreservation and culturing of cell lines: two phases of biological object existence//Proceedings of the Federal Centre for Animal Health. - Vladimir, 2008.-Vol. 6.-P. 390-405.Manin B.L. Cryopreservation and culturing of cell lines: two phases of biological object existence//Proceedings of the Federal Centre for Animal Health. - Vladimir, 2008.-Vol. 6.-P. 390-405.Methodical recommendations for preparation of porcine bone marrow cell culture for study of ASFV isolate cultural properties / A.A. Varentsova, I.Yu. Zhukov, V.L. Gavrilova [et al.]; FGBI «ARRIAH». - Vladimir, 2014. -14 p.Methodical recommendations for preparation of porcine bone marrow cell culture for study of ASFV isolate cultural properties / A.A. Varentsova, I.Yu. Zhukov, V.L. Gavrilova [et al.]; FGBI «ARRIAH». - Vladimir, 2014. -14 p.Low-temperature preservation of bone marrow/ N.S. Pushkar, A.M. Belous, A.A. Tsutsayeva [et al.]. - Kiev: Naukova Dumka, 1976 - 288 p.Low-temperature preservation of bone marrow/ N.S. Pushkar, A.M. Belous, A.A. Tsutsayeva [et al.]. - Kiev: Naukova Dumka, 1976 - 288 p.Optimization of bone marrow cell culture preparation conditions / I.Yu. Zhukov, I.V. Shevchenko, A.A. Varentsova [et al.] //The IV International scientific workshop for young scientists «Youth and Science XXI» 16-20.09.14.: Proceedings. Vol. 1. - Ulyanovsk: USAA named after P.A. Stolypin, 2014. - P. 46-52.Optimization of bone marrow cell culture preparation conditions / I.Yu. Zhukov, I.V. Shevchenko, A.A. Varentsova [et al.] //The IV International scientific workshop for young scientists «Youth and Science XXI» 16-20.09.14.: Proceedings. Vol. 1. - Ulyanovsk: USAA named after P.A. Stolypin, 2014. - P. 46-52.Optimization of storage conditions for porcine alveolar macrophages and bone marrow cells at low temperatures / O.S. Puzankova, I.Yu. Zhukov, A.A. Varentsova [etal.]//The IV International scientific workshop for young scientists «Youth and Science XXI» 16-20.09.14.: Proceed Fig. 2. Bone marrow cells stained with acridine orange (0,01 %), post 3 months of storage at-196°C in liquid nitrogen Fig. 3. Bone marrow cells stained with acridine orange (0,01 %), post 6 months of storage at-196°C in liquid nitrogen ings. Vol. 1. - Ulyanovsk: USAA named after P.A. Stolypin, 2014,-P. 103-111.Optimization of storage conditions for porcine alveolar macrophages and bone marrow cells at low temperatures / O.S. Puzankova, I.Yu. Zhukov, A.A. Varentsova [etal.]//The IV International scientific workshop for young scientists «Youth and Science XXI» 16-20.09.14.: Proceed Fig. 2. Bone marrow cells stained with acridine orange (0,01 %), post 3 months of storage at-196°C in liquid nitrogen Fig. 3. Bone marrow cells stained with acridine orange (0,01 %), post 6 months of storage at-196°C in liquid nitrogen ings. Vol. 1. - Ulyanovsk: USAA named after P.A. Stolypin, 2014,-P. 103-111.Virus culture methods. Cell culture. - URL: medical-planet.su/1372/html (reference date: 20.11.15).Virus culture methods. Cell culture. - URL: medical-planet.su/1372/html (reference date: 20.11.15).Uchitel I.Ya. Role of macrophages in immunity. - M.: Meditsina, 1978. - 200 p.Uchitel I.Ya. Role of macrophages in immunity. - M.: Meditsina, 1978. - 200 p.ShishkovV.P. Veterinary medicine encyclopedia. -M.: Sovetskaya Entsiklopedia, 1981. - P. 247-248.ShishkovV.P. Veterinary medicine encyclopedia. -M.: Sovetskaya Entsiklopedia, 1981. - P. 247-248.Alcami A.,Carrascosa A.L.,Vinuela E. Interaction entry of African swine fever virus with macrophages//Virus Res. - 1990. - Vol. 17, № 2. - P. 93-104.Alcami A.,Carrascosa A.L.,Vinuela E. Interaction entry of African swine fever virus with macrophages//Virus Res. - 1990. - Vol. 17, № 2. - P. 93-104.Alcami A., Carrascosa A.L.,Vinuela E. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever virus into Vero cells //Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 393-398.Alcami A., Carrascosa A.L.,Vinuela E. Saturable binding sites mediate the entry of African swine fever virus into Vero cells //Virology. - 1989. - Vol. 168, № 2. - P. 393-398.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E.The entry of African swine fever virus into Vero cells //Virology. - 1989. -Vol. 171, № 1,-P. 68-75.Alcami A., Carrascosa A.L., Vinuela E.The entry of African swine fever virus into Vero cells //Virology. - 1989. -Vol. 171, № 1,-P. 68-75.Apoptosis indused in an early step of African swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication / A.L. Carrascosa, MJ. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 294, № 2. - P. 372-382.Apoptosis indused in an early step of African swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication / A.L. Carrascosa, MJ. Bustos, M.L. Nogal [et al.] // Virology. - 2002. - Vol. 294, № 2. - P. 372-382.Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] //Veterinary Microbiology. - 2010. Vol. 140, № 1-2. - P. 9-17.Cellular processes essential for African swine fever virus to infect and replicate in primary macrophages / S. Basta, H. Gerber, A. Schaub [et al.] //Veterinary Microbiology. - 2010. Vol. 140, № 1-2. - P. 9-17.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.