Биохимические показатели крови у самок и самцов лисиц платинового окраса в онтогенезе

ВВЕДЕНИЕ

Анализ биохимических показателей крови позволяет установить изменения, происходящие в организме животных и человека, а также судить о специфичности изменений, характерных для определенной патологии.

Несмотря на многочисленные и многолетние исследования, состав крови остается недостаточно изучен, особенно его изменения в половозрастном аспекте у пушных зверей. Такое положение дел можно объяснить различными особенностями процедуры взятия проб крови и применением разных методик их исследования [1].

Как показывает анализ научно-методической литературы, в основном она была опубликована 40–60 лет назад, а за это, пусть и кажущееся непродолжительным, время произошли достаточно заметные изменения: продолжилась адаптация организма пушных зверей к клеточным условиям разведения, ухудшился рацион пушных зверей. Это способствовало изменению состава крови, поэтому даже эталонные величины следует пересматривать каждые 10–15 лет. В первую очередь изменяется уровень трансаминаз [2]. Необходимо также обратить внимание, что в разных методиках используются разные единицы измерения показателей крови, что затрудняет сравнительный анализ результатов исследований, выполненных в разные годы, тем более с разницей в 40–60 лет. Исследования крови пушных зверей описаны в основном в монографиях В. А. Берестова, которым уже около полувека [3][4]. Эти работы трудно найти в библиотеках из-за их редкости, поэтому 20 лет назад книга В. А. Берестова по клинической биохимии пушных зверей была переиздана, но со старыми данными – без их уточнения и изменения [5].

Биохимические реакции в организме тесно взаимосвязаны, реакции обмена веществ предельно согласованы между собой. В связи с многообразием выполняемых кровью биологических функций актуальным является изучение биохимических показателей сыворотки крови лисиц платинового окраса в онтогенезе, что и явилось целью данного исследования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектом исследования служили лисицы платинового окраса, принадлежавшие звероводческому хозяйству ООО «Звероводческое племенное хозяйство «Вятка» Кировской области: 10 самок и 10 самцов, исследования крови которых производили в возрасте 1,5; 4 и 6 мес. Зверей кормили по общепринятым нормам, применяемым в данном зверохозяйстве.

Работа осуществлялась в лаборатории ветеринарии ФГБНУ ВНИИОЗ им. проф. Б. М. Житкова. Для биохимических исследований до утреннего кормления зверей производили отбор крови из латеральной подкожной вены голени в специальную пробирку с активатором сгустка. Затем получали сыворотку крови путем центрифугирования при 2000 об/мин в течение 15 мин. На полуавтоматическом анализаторе BiochimSA (США) с использованием коммерческих наборов определяли уровень аспартатаминотрансферазы (АСТ, Е/л), аланинаминотрансферазы (АЛТ, Е/л), щелочной фосфатазы (Е/л), общего белка (г/л), альбумина (г/л), мочевины (ммоль/л), креатинина (мкмоль/л), α-амилазы (Е/л), холестерина (мкмоль/л).

Результаты обрабатывали с использованием пакета лицензионных прикладных программ MS Excel (Office 2019), IBM SPSS Statistics 26. При оценке однородности групп и достоверности различий средних между группами использовали непараметрический U-тест Манна – Уитни. Уровень статистической значимости полученных различий между сравниваемыми выборками принимали при p < 0,05. Данные были обобщены в среднее (М), среднюю ошибку среднего значения (m) [6].

Работа выполнена с соблюдением международных принципов, изложенных в Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным (Declaration of Helsinki, 2013), Директиве Европейского парламента и Совета Европейского союза 2010/63/EC «О защите животных, используемых для научных целей» (Directive 2010/63/EU, 2010), а также согласно правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных (приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 № 755) и методическим указаниям проведения научно-хозяйственных опытов по кормлению пушных зверей [7-9].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

При биохимическом исследовании сыворотки крови на АСТ и α-амилазу отмечено, что между самками и самцами в возрасте 1,5; 4 и 6 мес. разницы в значениях не наблюдается. При определении АСТ у самок показатели увеличились в возрасте 6 мес. на 5,25% по сравнению с 1,5 мес. (p ≤ 0,05). У самцов показатели при определении АСТ к 6 мес. уменьшились на 13,68% (p ≤ 0,05).

При определении АЛТ у самок в возрасте 1,5 мес. показатели были выше на 37,28%, чем у самок в возрасте 4 мес. (p ≤ 0,05), а у самцов в возрасте 1,5 мес. АЛТ на 37,57% больше, чем у самцов в возрасте 4 мес. (p ≤ 0,05). Отношение АСТ к АЛТ, известное как коэффициент де Ритиса, у здоровых зверей колеблется от 0,9 до 1,73 Е/л [10]. Соотношения АСТ/АЛТ у лис разного пола в возрасте 1,5 мес. находились на одном уровне, а у самок в возрасте 4 мес. на 31,58% больше, чем у самок в возрасте 1,5 мес., но в возрасте 6 мес. соотношение АСТ/АЛТ стало таким же, как в возрасте 1,5 мес. (табл. 1).

У самцов в возрасте 6 мес. соотношение АСТ/АЛТ по сравнению с животными в возрасте 4 мес. увеличилось на 53,13% (p ≤ 0,05). Березина Ю. А. и соавт. изучали активность АЛТ и АСТ у серебристо-черной лисицы в постнатальном онтогенезе. На протяжении всего изучаемого периода жизни у лисиц уровень АЛТ возрастал больше, чем АСТ. Необходимо отметить, что активность ферментов у самок была ниже, чем у самцов. В процессе онтогенетического развития лисиц количество в крови АЛТ и АСТ возрастало, у взрослых зверей зафиксированы наибольшие значения этих показателей. Так, у взрослых самок по сравнению с 2-месячными щенками уровень АЛТ увеличивался на 27% (p < 0,01), у взрослых самцов – на 34% (p < 0,05); активность АСТ повышалась соответственно на 16 и 26% (p < 0,01), что описано и в других исследованиях [11]. У 6-месячных самцов лисиц платинового окраса содержание АСТ стало на 12,04% ниже, чем у животных в 1,5 мес., что не является достоверным. Максимальное содержание трансаминаз, наблюдаемое у пушных зверей осенью (6-месячный возраст) – в период подготовки к холодному периоду года, способствует активному увеличению массы тела у зверей, что также совпадает с результатами исследований других авторов [12][13]. Увеличение активности АЛТ (цитоплазматического фермента) происходит при легких формах повреждения гепатоцитов, а АСТ (митохондриального фермента) – при значительном повреждении печеночных клеток [14][15].

При определении уровня щелочной фосфатазы было выявлено, что у самок в возрасте 1,5 мес. этот показатель был на 33,65% выше по сравнению с показателями у животных в возрасте 4 мес. и в 2 раза выше, чем у лисиц в возрасте 6 мес. (p ≤ 0,05). Активность щелочной фосфатазы снижается с возрастом животных, так как фермент участвует в обызвествлении костной ткани, развитие которой, как известно, с возрастом замедляется. Пушные звери растут быстрыми темпами, поэтому размеры и массу взрослых зверей они приобретают уже к 6 мес. [10][16]. Возраст зверей прямо пропорционально связан с уровнем описываемого показателя. У 1,5-месячных щенков выявлены половые различия в уровне активности щелочной фосфатазы. У самцов данный показатель выше, чем у самок, на 21,05% (p ≤ 0,05). К 6-месячному возрасту уровень щелочной фосфатазы у самок и самцов выравнивается.

Установлено, что содержание мочевины в процессе роста у самок возрастало на 19,03%, у самцов – на 43,56% (p ≤ 0,05), что не превышало референтных показателей (табл. 2). Мочевина синтезируется в печени, с кровью переносится в почки и затем, фильтруясь через сосудистый клубочек, выделяется с мочой. Мочевина играет в организме осмотически активную роль. Накопление данного вещества способствует появлению отеков тканей паренхиматозных органов (легких, печени, почек, поджелудочной железы, селезенки, щитовидной железы), центральной нервной системы, миокарда, подкожной клетчатки. Важность исследований на мочевину определяется тем, что из остаточного азота примерно половина количества приходится на мочевину. Это обусловлено тем, что в печени мочевина, являющаяся конечным продуктом обмена белков, образуется из аммиака. Также следует отметить, что при дефиците азота значительно усиливается реабсорбция мочевины в почках. Изменение (снижение или увеличение) содержания мочевины в крови животных может наблюдаться при потреблении корма со слишком малым либо чрезмерно большим количеством белка. Как известно, уровень мочевины у собак, которых кормят сухими кормами, примерно в 1,7 раза ниже, чем у тех, которых кормят мясными консервами [17][18].

При определении креатинина установили, что у самок в возрасте 4 мес. показатель увеличился на 75,65% (p ≤ 0,05), у самцов – на 62,65% (p ≤ 0,05), в возрасте 6 мес. у самок – на 98,1% (p ≤ 0,05), а у самцов – на 31,65% (p ≤ 0,05) по сравнению со значениями 1,5-месячных животных. Сывороточный креатинин является наиболее широко используемым функциональным биомаркером состояния почек. Концентрация его достаточно стабильна и зависит преимущественно от общего объема мышечной массы. Креатин образуется в печени из гуанидинуксусной кислоты, откуда кровью заносится в мышцы, где идет его фосфорилирование и образование креатинфосфата, при расходовании которого образуется энергия, необходимая для мышечных сокращений. Дегидратированный креатинин, будучи беспороговым веществом, выделяется с мочой. Уровень его содержания в крови определяется в основном мышечной массой и выделительной способностью почек. При хронической почечной недостаточности увеличение количества креатинина в крови сопровождается повышением концентрации и других компонентов остаточного азота, и прежде всего мочевины. Подобная картина наблюдается и при закупорке мочевыводящих путей [19][20].

Одним из основных компонентов крови является белок, который состоит из фракций (альбумина и нескольких видов глобулинов), образующих определенную формулу количественного и структурного соотношения. Белкам принадлежит важная роль в поддержании коллоидно-осмотического давления плазмы крови. Благодаря их свойству притягивать и удерживать воду сохраняется постоянным объем циркулирующей крови, а форменные элементы находятся во взвешенном состоянии. У пушных зверей платинового окраса количество общего белка как у самок, так и у самцов в возрасте 4 мес. было ниже, чем в 1,5 мес. на 43,24 и 32,51% (p ≤ 0,05) соответственно, а к 6-месячному возрасту показатель поднялся до уровня 4 мес. По данным некоторых исследователей [21], у млекопитающих, рожденных в весенний период, наблюдается относительно быстрая стабилизация обмена белков, что является биологической особенностью таких животных, для них характерны быстрая скорость роста и уменьшение периода достижения животным зрелости.

При определении альбумина и у самок, и у самцов разных возрастных групп достоверной разницы отмечено не было. Альбумин, являющийся самой главной фракцией и составляющий более 40–60% объема общего белка сыворотки крови, – это гомогенный белок плазмы, содержащий небольшое количество углеводов. У домашних животных альбумин составляет от 35 до 50% от общей концентрации белка в сыворотке крови. Важной биологической функцией альбумина в плазме является поддержание внутрисосудистого коллоидно-осмотического давления, благодаря чему предотвращается выход плазмы из капилляров [14][18][19]. В нашем случае концентрация альбумина как у самок, так и у самцов практически не изменялась (табл. 1), статистической разницы не выявлено, показатель находился в диапазоне референтных значений (табл. 2). Изменение концентрации альбумина отмечается при голодании, хронических гастроэнтеритах, когда нарушается переваривание и всасывание белка, при хронических болезнях печени (гепатит, гепатодистрофия, цирроз) [17].

При определении холестерина было отмечено снижение его уровня у самок в возрасте 4 мес. на 7,49%, в возрасте 6 мес. – на 16,78% по сравнению с 1,5-месячным возрастом. Холестерол (холестерин) является важнейшим структурным компонентом клеточных мембран. Он участвует в регуляции проницаемости клеток и предохраняет эритроциты от действия гемолитических ядов. Холестерол используется в организме для синтеза стероидных гормонов, витамина D₃, желчных кислот. Образование холестерола происходит во всех клетках организма, но в кровь поступает холестерол, образующийся в гепатоцитах и клетках тонкого кишечника. Главный синтетический и катаболический орган для холестерола – печень. Изменение уровня холестерола характерно для таких болезней и патологических состояний, как болезни печени (гепатит, обтурация желчных ходов), нефротический синдром, гипотиреоз, хронический панкреатит, ожирение, недостаток витаминов [20][22][23].

ВЫВОДЫ

Таким образом, при определении в возрастном онтогенезе биохимических показателей крови у самок и самцов установлено:

1. Показатели щелочной фосфатазы (Е/л) у самцов начиная с 1,5 мес. были выше, чем у самок на 21,05%. До 6-месячного возраста показатели снижались как у самцов, так и у самок, это обусловлено участием фермента в формировании скелета в процессе онтогенетического развития. С 4 мес. рост и развитие скелета замедляется, а к 6 мес. звери приобретают размеры и массу тела взрослых животных.
2. Значения показателей мочевины и креатинина у лисиц обоих полов в процессе роста животных увеличивались, но оставались в пределах референтных границ.
3. Содержание общего белка в сыворотке крови у самцов и самок в возрасте 4 мес. было ниже, чем в 1,5 мес. на 32,51 и 43,24% соответственно. По данным В. А. Афанасьева и Н. Ш. Перельдика [21], относительно быстрая стабилизация белкового обмена является биологической особенностью, характерной для многих млекопитающих, рожденных весной, у них ускорен темп роста и в общем сокращена фаза достижения зрелости.