Клинические признаки и патолого-анатомические изменения при клостридиозной энтеротоксемии кроликов

ВВЕДЕНИЕ

Повышенный интерес к здоровому питанию способствует увеличению потребления крольчатины в России, поэтому изучение проблем инфекционной патологии в кролиководстве является актуальным научным направлением. Производить мясо кроликов выгодно за счет быстрой регенерации поголовья². Но при их выращивании и содержании возникают свои специфические проблемы, связанные с болезнями и последующим падежом.

В кролиководческой практике ветеринарные врачи часто сталкиваются с симптомокомплексом энтеритов, сопровождающихся диареей, в результате чего могут развиваться энтеротоксемия, септические процессы, приводящие к смерти животного. Причиной энтеротоксемии всегда являются микроорганизмы различных видов [1].

Развитие энтеротоксемии у кроликов очень часто вызывает энтеротоксигенный штамм Clostridium spiroforme, что происходит на фоне дисбактериоза. Чаще всего заболевают животные в возрасте 3–6 недель после отъема от крольчих. У молодых кроликов недостаточное количество либо отсутствие некоторых представителей нормальной желудочно-кишечной флоры и высокий pH в желудке позволяют C. spiroforme размножаться [2]. В этот период у крольчат регистрируют самый высокий уровень смертности. Клинические проявления острой формы энтеротоксемии, вызванной C. spiroforme: отсутствие аппетита, вялость, коричневый водянистый понос с примесью крови и слизи, загрязняющий промежность и задние конечности. По мере прогрессирования заболевания снижается температура тела, смерть наступает через 24–48 ч [3]. При вскрытии устанавливают петехиальные и экхимотические кровоизлияния на серозной поверхности слепой кишки. Может поражаться аппендикс и проксимальный отдел толстой кишки, в которых наблюдают кровоизлияния и/или слизь [4].

Наличие бактерий рода Clostridium является следствием снижения резистентности организма животных, заболеваний желудочно-кишечного тракта и нарушения обмена веществ [5]. Патогенез желудочно-кишечных заболеваний кроликов складывается из нарушения нормальной перистальтики кишечника, которая возможна только при наличии большого количества неперевариваемой клетчатки [6]. При ухудшении моторики кишечника жидкость всасывается из желудка, дополнительно уплотняя содержимое. Сжатая пища вызывает дискомфорт, что еще больше способствует анорексии и усугубляет гипомоторику желудочно-кишечного тракта. Недостаточное потребление клетчатки в результате либо неправильного питания, либо состояний, вызывающих анорексию, является основной причиной желудочно-кишечного застоя. Клетчатка стимулирует моторику слепоободочной кишки или за счет эффекта увеличения объема содержимого, или напрямую. Диеты с высоким содержанием клетчатки способствуют выработке в слепой кишке особых летучих жирных кислот, которые обеспечивают нормальную работу желудочно-кишечного тракта [7].

Замедление моторики приводит к изменениям рН содержимого слепой кишки, вызывающим увеличение количества Clostridium spp. и колиформных видов, таких как Escherichia coli, на фоне снижения численности популяций нормальных микроорганизмов. Популяции указанных потенциально патогенных бактерий обычно присутствуют в небольших количествах в слепой кишке [8]. Слепая кишка действует как камера ферментации и содержит сложный состав микробиома, включая анаэробные микроорганизмы, такие как Bacteroides, крупные метахроматически окрашивающиеся бактерии, грамотрицательные овальные и веретенообразные палочки, дрожжи, несколько непатогенных видов простейших и амеб, а также многие еще не изученные виды бактерий [9][10]. Консорциум этих микроорганизмов отвечает за переработку поступающей в слепую кишку клетчатки в легкоусвояемые питательные вещества, которые затем повторно попадают в организм кроликов при поедании цекотрофов [11][12].

Доминирующими микроорганизмами тощей кишки у кроликов являются представители типов Bacteroidetes и Firmicutes. Первые главным образом участвуют в обмене углеводов, стероидов и других питательных веществ, поддерживая морфологию и физиологическую функцию кишечного тракта, а также баланс кишечной микрофлоры. Firmicutes играют важную роль в метаболизме углеводов [13]. Среди представителей типа Firmicutes в составе микробиоты кишечного тракта преобладают клостридии, которые участвуют в процессе абсорбции питательных веществ и синтеза короткоцепочечных жирных кислот [14]. Чрезмерное количество этих бактерий может вызвать ряд патологических изменений: от вздутия кишечника до смерти от энтеротоксемии. Образование газов и токсинов сопровождается болью, в результате стрессового состояния снижается, а затем полностью пропадает аппетит, развивается гипомобильность.

Повышенное количество углеводов создает среду, в которой размножаются такие патогены, как кишечная палочка и различные виды клостридий [15]. Глюкоза – побочный продукт расщепления сложных углеводов, необходимый для выработки йота-токсина бактериями рода Clostridium. Таким образом, диарея и энтеротоксемия у домашних кроликов часто вызваны нарушением микрофлоры, обычно называемым дисбактериозом [16].

Немаловажны и сопутствующие факторы, которые способствуют размножению патогенных бактерий: стресс, нарушения в кормлении, применение антибиотиков, генетическая предрасположенность к дисфункции кишечника [17][18]. Развитие ацидозов и повышение кислотности в желудке приводит к увеличению и накоплению биомассы бактерий рода Clostridium и приобретению ими вирулентности. На активизацию бактерий могут также влиять стресс-факторы (резкие изменения в кормлении, связанные со снижением уровня углеводов, повышением уровня протеинов; перегруппировка, транспортировка животных и др.) [19]. Активное размножение бактерий сопровождается выработкой большого количества экзотоксинов, которые действуют локально на слизистую кишечника или всасываются в кровь, вызывая более широкие и тяжелые системные поражения организма, и служат основными факторами патогенности клостридий. У некоторых видов бактерий (C. chauvoei, C. septicum), токсигенность которых невысока, факторами патогенности являются жгутики, обеспечивающие гемагглютинацию [20].

В группу клостридий включено несколько патогенных видов, вызывающих кишечные проявления болезни, а также нейротоксические или гистотоксические инфекции. У животных наиболее распространены кишечные инфекции, вызванные C. perfringens, C. difficile, C. histolyticum и C. septicum; C. perfringens вызывает такие синдромы поражения кишечника, как энтероколит, энтеротоксемию, гастрит. По данным А. В. Суповой и соавт., наиболее часто среди анаэробов выделялись C. perfringens, C. sporogenes, C. bifermentans, C. septicum, C. cadaveris, C. tertium, C. difficile, C. novyi, C. baratii [1].

При клостридиозах возможно внутриутробное или раннее постнатальное заражение. Инфицирование происходит через молоко; молозиво; подстилку; предметы внешней среды, контаминированные фекалиями взрослых животных; корма; почву; воду [2][7]. При внутриутробной инфекции возбудитель проникает в матку с током крови, что приводит к заражению плода, абортам, метритам и эндометритам. Представители рода Clostridium являются возбудителями маститов наряду с микроорганизмами других семейств [21].

Клостридиозы в животноводческих хозяйствах Сибири чаще протекают в виде смешанных инфекций [22].

Учитывая сегментированность рынка кролиководства и его статус развивающейся отрасли на территории Западной Сибири, проблемы, с которыми сталкиваются ветеринарные врачи, плохо изучены и нуждаются в детальном рассмотрении. В частности, научная новизна данной статьи заключается в изучении проблемы клостридиозной энтеротоксемии на примере отдельного кролиководческого хозяйства Западной Сибири.

В связи с этим целью настоящей работы является изучение этиологии, эпизоотических данных, клинической картины и патолого-анатомических изменений у кроликов при клостридиозной энтеротоксемии в кролиководческом хозяйстве Западной Сибири.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалом для исследования служили пробы патологического материала (печень, селезенка, содержимое желудка, содержимое кишечника, легкие, сердце, почки) от павших либо вынужденно убитых больных кроликов разных возрастных групп: от рождения до 35 сут – 21 гол.; 35–77 сут – 45 гол.; ремонтный молодняк 35–71 сут – 14 гол.; маточное поголовье от 72 сут – 9 гол.

Животных разводят в кролиководческом хозяйстве закрытого типа, расположенном на юге Западной Сибири, с использованием клеточной системы содержания, автоматических систем кормления и водопоения. Водоснабжение нецентрализованное из собственной скважины с системой водоочистки. Навозоудаление производится ежедневно скребковым транспортером и вывозится в навозохранилище, расположенное на расстоянии не менее 1 км от фермы. Рацион кормления составляет промышленный сбалансированный комбикорм. Все половозрелые группы кроликов (самки, самцы, откорм, ремонтный молодняк) содержатся в одном корпусе без соблюдения принципа «все пусто – все занято». Дезинфекцию проводят только в присутствии животных, так как отсутствует помещение для их перегруппировки в период противоэпизоотических работ. Поголовье вакцинировано против вирусной геморрагической болезни и миксоматоза кроликов. В соответствии с планом противоэпизоотических мероприятий проводятся профилактические обработки против кокцидиоза и гельминтозов. Хозяйство считается благополучным по инфекционным болезням.

Животных лечили антибиотиками, которые применяли перорально через систему поения: антибиотики группы фторхинолонов («Энрофлон 10%») 5–7 дней – 1 г/л воды, сульфаниламиды («Триметоприм», «Зинаприм») 5–7 дней – 1 г/л воды. Также внутримышечно однократно вводили препарат тетрациклиновой группы «Нитокс 200» в дозе 0,1 мл/кг массы тела. Перерывы между приемами лекарственных средств составляли 7–10 дней.

Культивирование и идентификацию штаммов бактерий производили в 2023 г. на базе научно-исследовательской лаборатории «Биохимических, молекулярно-генетических исследований и селекции сельскохозяйственных животных» ФГБОУ ВО «Кузбасский государственный аграрный университет имени В. Н. Полецкова» методом классического бактериологического анализа.

Трупы доставляли в лабораторию сразу после падежа в течение не более 30 мин в термоконтейнере с хладагентами. В лаборатории проводили вскрытие трупов, оценку патолого-анатомических изменений и постановку диагнозов.

Питательные среды и условия культивирования. Кусочки органов засевали на 5%-й мясо-пептонный бульон (МПБ) с глюкозой, инкубировали 18–24 ч при 37 °С в анаэробных условиях. После инкубации производили первичный посев на среду Вильсона – Блера (инкубация 24–48 ч при 37 °С в анаэробных условиях). Положительным результатом культивирования микроорганизмов рода Clostridium считали почернение среды с образованием газа, выражающемся в разрыве плотной среды, и стойкий неприятный запах масляной кислоты.

Для определения рода выделенных культур микроорганизмов проводили следующие тесты: окраска по Граму, рост на МПБ в присутствии 6,5%-го NaCl и 20% желчи (инкубация 24 ч при 37 °С в анаэробных условиях), наличие гемолиза на 5%-м кровяном агаре (инкубация 24 ч при 37 °С в анаэробных условиях), наличие каталазы с применением перекиси водорода, наличие оксидазы с применением коммерческого ОКСИтеста, образование индола с применением реактива Ковача.

Видовую идентификацию проводили на дифференциально-диагностических средах Гисса с арабинозой, дульцитом, фруктозой, галактозой, глюкозой, инозитолом, инулином, лактозой, мальтозой, маннитом, маннозой, мелезитозой, мелибиозой, раффинозой, рамнозой, рибозой, салицином, сорбитом, сорбозой, сахарозой, трегалозой и ксилозой (инкубация 24 ч при 37 °С в анаэробных условиях). После инкубации определяли способность к ферментации изолированных культур по изменению цвета среды и наличию газообразования.

Токсинообразующие свойства определяли внутрибрюшинной инъекцией микробной взвеси 70 белым мышам в количестве 0,5 мл в дозе 500 млн микробных клеток, выращенных на 5%-м кровяном агаре (инкубация 24 ч при 37 °С в анаэробных условиях). Положительным результатом считали гибель животного после инъекции.

Все эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с межгосударственными стандартами по содержанию и уходу за лабораторными животными ГОСТ 33216-2014 и ГОСТ 33215-2014, принятыми Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации, а также согласно требованиям Директивы 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза от 22.09.2010 по охране животных, используемых в научных целях.

Для подтверждения гибели от микроорганизмов рода Clostridium из пораженных паренхиматозных органов мышей делали мазки-отпечатки, окрашивая по Граму. При этом для более четкого окрашивания спор растворы красителей на предметном стекле нагревали над пламенем горелки до образования паров, что позволяло идентифицировать клостридии. Свидетельством наличия клостридий служило присутствие в мазке крупных палочковидных грамположительных микроорганизмов без визуализируемой споры (C. perfringens) либо с терминальной спорой, превышающей диаметр вегетативной клетки (C. histolyticum).

Статистическую обработку результатов проводили с определением относительных величин изолированных микроорганизмов в процентах, вычисляемых методом деления количества выделенных микроорганизмов из каждого органа на общее количество изолятов, умноженное на 100%³.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

За период с января по ноябрь 2023 г. в хозяйстве был зафиксирован падеж кроликов всех половозрастных групп в количестве 12 402 гол. Падежом считали отход в количестве более 5 гол. (так как количество менее 5 гол. считается нормальным отходом в результате причин неинфекционного генеза: травмы, физиологические особенности и т. д.) в одной группе за один день, с характерными клиническими симптомами, такими как вялость, истощение, взъерошенный шерстный покров, вздутый живот, диарея со зловонным запахом. Падеж отмечали во всех группах откорма, реже – у взрослых самок и самцов от 1 до 3 лет (рис. 1). Наибольшее число животных в возрасте 35–77 сут пало в августе (1050 гол.), в группе кроликов 0–35 сут пик падежа наблюдали в сентябре (564 гол.), максимальное количество ремонтного молодняка погибло в мае (122 гол.), маточного поголовья – в ноябре (116 гол.).

У животных в группе от рождения до 35 сут фиксировали следующие клинические симптомы: вздутие живота, профузный понос со зловонным запахом, взъерошенный шерстный покров, истощение, обезвоживание, с момента появления которых смерть наступала через 1–2 сут. Наибольшее количество павших особей зарегистрировано в возрастной группе от 35 до 77 сут – 7763 гол., при этом клиническая картина была сходна с таковой в группе молодняка до 35 сут.

Клиническая картина у маточного поголовья характеризовалась мертворождаемостью (20% от полученного потомства), вялостью, вздутием живота, крольчата у таких самок были слабые, плохо выкормленные и погибали на 3–5-е сут после рождения.

Патолого-анатомическая картина была характерна для общего токсикоза:

– труп истощен, костные структуры хорошо выражены;

– живот вздут;

– волосяной покров в области ануса и хвоста запачкан фекалиями;

– подкожная клетчатка суховатая;

– скелетные мышцы бледные, истонченные;

– слизистая оболочка желудка припухшая, покрасневшая, с большим количеством слизи (серозно-катаральный гастрит);

– слизистая оболочка тонкого кишечника диффузно утолщена с покраснениями и большим количеством слизи;

– брыжеечные лимфатические узлы увеличены в размере, на разрезе сочные, местами покрасневшие, с изменениями, типичными для острого серозно-геморрагического воспаления;

– селезенка обычно без видимых изменений;

– печень несколько увеличена в размере, дряблая, неравномерно окрашена, серо-желтоватого цвета с пятнистыми покраснениями;

– почки увеличены, незначительно размягчены, серовато-глинистого цвета, граница между корковым и мозговым слоями неясная;

– сердце увеличено в объеме за счет расширения сердечных полостей, преимущественно правых, дрябловатое, поверхность разреза с сероватым оттенком;

– в легких застойная гиперемия и отек.

При проведении бактериологического исследования чаще всего клостридии высевали из патологического материала от животных в возрасте 35–77 сут, реже всего – от кроликов старше 72 сут (рис. 2). Основными органами, обсемененными Clostridium spp., являлись: желудок (12–89%), кишечник (24–74%), сердце (10–64%). Также бактерии обнаруживали в печени (5–17%), почках (15–21%) и легких (3–46%).

При биохимическом типировании выделенных культур клостридий было идентифицировано два вида: C. histolyticum и C. perfringens (рис. 3). Из патологического материала, отобранного от молодняка до 35-суточного возраста, в 43% случаев (9 гол.) изолировали C. histolyticum, в 19% случаев (4 гол.) – C. perfringens. Доля выделенных C. histolyticum из проб, полученных от 35–77-суточных кроликов, составила 42% (19 гол.), C. perfringens – 47% (21 гол.). Из биологического материала от павших либо вынужденно убитых больных особей ремонтного молодняка 35–71-суточного возраста C. histolyticum изолировали в 43% случаев (6 гол.), C. perfringens – в 29% случаев (4 гол.). В 33% проб (3 гол.) от кроликов маточного поголовья возрастом свыше 72 сут обнаружили C. histolyticum.

При заражении белых мышей установлен падеж 66 лабораторных животных, в мазках-отпечатках из внутренних органов которых идентифицировали грамположительные крупные палочки с закругленными концами или же крупные грамположительные палочки с субтерминальной спорой.

При изучении эпизоотической ситуации, сложившейся в данном хозяйстве, можно предположить, что развитие эпизоотического процесса было обусловлено рядом причин.

1. Несоблюдение требований к содержанию животных, а именно: неизолированное содержание кроликов разных возрастных групп; отсутствие условий для проведения дезинфекции с переводом животных в другие помещения. Неудовлетворительные условия содержания животных – одна из причин размножения и накопления различных видов микроорганизмов, в том числе и клостридий, что подтверждается результатами исследований других авторов [2][7][17][18]. Нарушение ветеринарно-санитарных правил и технологии содержания кроликов негативно сказывается на эпизоотическом состоянии хозяйства. Профилактика бактериальных заболеваний заключается в применении целостной системы контроля, включающей в себя мониторинг; применение эффективных антибактериальных препаратов и средств, альтернативных антибиотикам; контроль качества дезинфекции; применение принципов ХАССП (НАССР) на производстве. При низком уровне ветеринарно-санитарной обработки животноводческих помещений перед размещением очередной партии животных остаются высокоустойчивые споры клостридий в окружающей среде [23][24].
2. Применение антибиотиков для контроля размножения условно-патогенных микроорганизмов привело к селекции и накоплению штаммов токсигенных клостридий. Этот факт подтверждается многими исследованиями, проанализированными и описанными Л. Н. Мазанковой и С. Г. Перловской [25], доказывающими ключевую роль антибиотиков в развитии клостридиозной инфекции в связи с гибелью эндогенной микрофлоры, что позволяет клостридиям размножаться и продуцировать токсины.
3. Наиболее подверженной заболеванию клостридиозом группой являлись крольчата после отъема от матерей в возрасте от 35 сут., поскольку это является одним из стресс-факторов, который в совокупности с перегруппировкой животных и переходом на промышленные корма ослабляет неспецифическую защиту организма. Данный факт подтверждают и другие исследования [26][27], в которых установлено, что кролики в возрасте от 3 до 7 недель высоковосприимчивы к кишечным заболеваниям клостридиозной этиологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Причиной клостридиозов у кроликов в данном хозяйстве являются микроорганизмы двух токсинообразующих видов: C. histolyticum и C. perfringens. Наиболее восприимчивым поголовьем оказались животные после отъема от маток в возрасте от 35 до 71 сут. При этом у кроликов данной группы наблюдали ярко выраженные клинические признаки и патолого-анатомические изменения, характерные для энтеротоксемии: воспаление желудка и кишечника, дистрофические изменения печени, почек и миокарда. У взрослого поголовья клиническая картина была не столь выраженной и в основном проявлялась вздутием живота, мертворождением и рождением нежизнеспособного молодняка. Наиболее часто клостридии выделяли из биопроб желудка, кишечника и сердца. Реже Clostridium spp. изолировали из легких, печени и почек. Патолого-анатомическая картина при клостридиозах характерна для общего токсикоза: истощение, вздутие живота, серозно-катаральный гастрит, энтерит, серозно-геморрагический лимфонодулит брыжеечных лимфатических узлов, печень, миокард и почки в состоянии дистрофии, в легких – застойная гиперемия и отек.