Получение клеточной линии козьего происхождения (Capra hircus) TCh как результат кариологической и морфологической трансформации ПЛК ЯДК-04 при субкультивировании с применением сыворотки крупного рогатого скота, обработанной лантаноидами

Способность перевиваемых линий клеток к эволюции дает возможность создавать в процессе последовательного культивирования новые трансформированные клеточные культуры, обладающие неограниченным жизненным потенциалом и отличающиеся от исходных прототипов. Универсальных механизмов и способов получения новых клеточных линий практически не существует. Но было замечено, что иммортализация клеток связана с хромосомными перестройками (морфология хроматид) и изменением количества хромосом. Представлены результаты получения новой клеточной линии тестикул козленка Testis Capra hircus(ТСh), пригодной для эффективной репродукции дерматотропных и других видов вирусов животных, с целью наработки вирусного материала, применяемого для изготовления средств специфической профилактики и диагностики заболеваний животных. Монослойная линия клеток ТСh трансформировалась из перевиваемой линии клеток ЯДК-04 в результате проведения более 50 пассажей культивирования в ростовой среде с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота, обработанной лантаноидами. Применение сыворотки крови крупного рогатого скота, очищенной и обогащенной лантаноидами, при культивировании постоянной линии клеток ЯДК-04 привело к значительным хромосомным перестройкам и способствовало формированию стабильной и продуктивной новой клеточной линии ТСh, которая отличалась по цитоморфологическим и кариологическим признакам и обладала неограниченным потенциалом к пассированию без изменения кариотипа и морфологии клеток. Новая перевиваемая линия клеток оказалась пригодной для эффективной репродукции возбудителей таких болезней, как заразный узелковый дерматит, оспа овец, чума мелких жвачных животных. В основном это вирусы дерматотропного происхождения.

1. Полянская Г. Г. Типы клеточных культур. Образование, основные характеристики иизменчивость клеточных культур. Вкн.:Методы культивирования клеток. СПб.: Политехнический университет; 2008; 22–40.

2. ФрешниР.Я. Культура животных клеток. М.:БИНОМ. Лаборатория знаний; 2012. 691 с.

3. Хейфлик Л. Смертность и бессмертие на клеточном уровне: обзор. Биохимия. 1997; 62(11): 1380–1393. Режим доступа: https://biochemistrymoscow.com/ru/archive/1997/62-11-1380/#_pdf.

4. Мамаева С. Е. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре. Цитология. 1996; 38(8): 787–814. EDN: MOVXVX.

5. Полянская Г. Г. Кариотипическая изменчивость в клеточных линиях и структура кариотипа. Клеточные культуры. Информационный бюллетень. 2009; 24: 15–24.

6. Полянская Г. Г., Мусорина А. С. Коллекция культур клеток позвоночных: создание, деятельность, каталог. СПб.: Политехнический университет; 2018. 185 с.

7. ДунканЭ.Л., РедделР.Р. Генетические изменения, связанные с иммортализацией: обзор. Биохимия. 1997; 62(11): 1477–1490. Режим доступа: https://biochemistrymoscow.com/ru/archive/1997/62-11-1477/#_pdf.

8. Реддел Р. Р., Брайан Т. М., Мернейн Д. П. Иммортализованные клетки без измеримой активности теломеразы: обзор. Биохимия. 1997; 62(11): 1467–1476. Режим доступа: https://biochemistrymoscow.com/ru/archive/1997/62-11-1467/#_pdf.

9. HessW.R., MayH.J., PattyR.E. Serial cultures of lamb testicular cells and their use in virus studies. Am. J. Vet. Res. 1963; 24: 59–64. PMID:13954242.

10. Федорова Е. Е., Худяков Г. А., Герасимова Н. И., Герасимов В. Н. Штамм культивируемых клеток гонад Capra hircus L. – продуцент вирусов животных. Патент № 2061753 C1 Российская Федерация, МПК С12N5/06, 7/00. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных. №94028942/13. Заявл. 02.08.1994. Опубл. 10.06.1996.

11. ГерасимовВ.Н., ГерасимоваН.И., ДьяконовЛ.П., ГруздевК.Н., ЗахаровВ.М., МанинБ.Л. Линия клеток яичников козы домашней Capra hircusL. ЯДК-04 длярепродукции вирусов животных. Патент №2335537C2 Российская Федерация, МПК С12N 5/06 (2006.01). ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»). № 2006114337/13. Заявл.26.04.2006. Опубл.10.10.2008. Бюл. № 28.

12. Манин Б. Л., Трофимова Е. А., Гусарова С. Е., Кононова С. В., Шумилова И. Н., Вологина И. В., Колчанов Н. А. TCh (Testis Capra hircus) – перевиваемая, монослойная сублиния клеток тестикул месячного козленка, предназначенная для репродукции вирусов оспы, чумы мелких жвачных и заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота, а также для изготовления диагностических и профилактических ветеринарных биопрепаратов. Патент №2768962C1 Российская Федерация, МПК С12N5/076 (2010.01). ФГБУ«Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). № 2021110116. Заявл. 12.04.2021. Опубл. 25.03.2022. Бюл.№ 9.

13. MoorheadP.S., NowellP.C., MellmanW.J., BattipsD.M., HungerfordD.A. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood. Exp. Cell. Res. 1960; 20: 613–616. DOI:10.1016/0014-4827(60)90138-5.

14. BinepalY. S., OngadiF. A., Chepkwony J. C. Alternative cell lines for the propagation oflumpy skin disease virus. Onderstepoort J. Vet. Res. 2001; 68 (2): 151–153. PMID: 11585094.

15. The European Collection ofAuthenticated Cell Cultures. Cell Lines and Hybridomas. Режим доступа: https://www.culturecollections.org.uk/products/celllines/index.aspx.

16. CarnV.M. Control of capripoxvirus infections. Vaccine. 1993; 11(13): 1275–1279. DOI: 10.1016/0264-410x(93)90094-e.

17. Sheep pox and goat pox. In: WOAH. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 2023; Chapter 3.8.12. Режим доступа: https://www.woah.org/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.08.12_S_POX_G_POX.pdf.

18. Пономарев А. П., Белик Е. В., Манин Б. Л., Коган М. М. Способ очистки сыворотки крови крупного рогатого скота от контаминирующих агентов. Патент № 2664729 C1 Российская Федерация, МПК G01N33/49 (2006.01). ООО НПП «БИОХИМСЕРВИС». № 2017117994. Заявл. 23.05.2017. Опубл. 22.08.2018. Бюл.№ 24.

19. Российская коллекция клеточных культур (РККК): каталог. Под ред. Г. П. Пинаева, Г. Г. Полянской. СПб.; 2004. 315 с.

20. Манин Б. Л., Коропова Н. В., Трофимова Е. А. Идентификация постоянных клеточных линий животных по кариологическим, морфологическим и культуральным признакам. Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2012; 10: 246–254. EDN: PXEUPH.

21. Манин Б. Л., Малахова Л. В., Сарбасов А. Б., Мороз Н. В. Цитоморфологические трансформации в клетках ЯДК-04 при взаимодействии с вирусом чумы мелких жвачных животных. Ветеринария сегодня. 2019; (2): 41–45. DOI: 10.29326/2304-196X-2019-2-29-41-45.

22. Сарбасов А. Б., Манин Б. Л., Яшин Р. В., Шумилова И. Н., Диев В. И. Изучение репродукции вирусов оспы овец и оспы коз в первичных и субкультивируемых клетках. Ветеринария сегодня. 2019; (2): 35–40. DOI: 10.29326/2304-196X-2019-2-29-35-40.

23. Шумилова И. Н., Кононова С. В., МанинБ.Л., Коропова Н. В., Кононов А. В. Культивирование вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота в перевиваемых линиях культур клеток. Ветеринария. 2017; 7: 53–57. EDN: ZCCTSD.

24. KitchingR. P. Vaccines for lumpy skin disease, sheep pox and goat pox. Dev. Biol. (Basel). 2003; 114: 161–167. PMID: 14677686.

25. ZhouJ. S., MaH. L., GuoQ. S. Culturing of ovine testicular cells and observation ofpathological changes of the cell inoculated with attenuated sheep pox virus. Chin. J. Vet. Sci. Tech. 2004; 34(9): 71–74.

26. Kalra S. K., Sharma V. K. Adaptation of Jaipur strain of sheeppox virus in primary lamb testicular cell culture. Indian J. Exp. Biol. 1981; 19 (2): 165–169. PMID: 7287068.