Инактивация вируса ящура для изготовления вакцин

Инактивация – это потеря вирусом способности к репродукции и инфицированию восприимчивых животных при сохранении антигенных свойств. В работе показана эффективность применения аминоэтилэтиленимина в качестве инактиванта вируса ящура. Определены скорость снижения титра инфекционности при выбранных параметрах процесса инактивации, влияние аминоэтилэтиленимина на стабильность вируса в процессе инактивации и на иммуногенность вакцин после хранения при температуре 2–8 °С. Представлен метод вычисления пятидесятипроцентной инактивирующей кон- центрации аминоэтилэтиленимина (К₅₀), позволяющей определять качественную характеристику вируссодержащей суспензии, сравнивать активность инактивантов и их способность обеспечивать авирулентность препарата в заданный промежуток времени. В результате проведенных исследований было установлено, что значение К₅₀ для неочищенной и очищенной вируссодержащих суспензий было одинаковым – 0,0045%, а уровень безопасности после 12 ч инактивации составил одну ТЦД₅₀ в 10⁹ –10¹¹ л вируссодержащей суспензии. Также было выявлено, что увеличение времени инактивации в два раза повысило вирулицидную активность аминоэтилэтиленимина: для типа О – в 1,8 раза, для типа А – в 2,4 раза. В то же время очистка от клеточного дебриса на процесс инактивации не оказывала существенного влияния. Аминоэтилэтиленимин не разрушает 146S частицы вируса, что и было подтверждено при исследовании иммуногенной активности вакцин в процессе хранения. Таким образом, аминоэтилэтиленимин, выпускаемый в виде 15%-го водного раствора российской фирмой ООО «Биохимресурс» (г. Владимир), соответствует высоким стандартам качества. При исследовании иммуногенности эмульсионной бивалентной противоящурной вакцины для крупного рогатого скота в остром опыте установили, что активность препарата составила 10,08 защитных доз в прививном объеме 2 см³.

1. Сергеев В. А., Непоклонов Е. А., Алипер Т. И. Вирусы и вирусные вакцины. М.: Библионика; 2007. 524 с.

2. Vallée H., Carré H., Rinjard P. Sur l’immunisation anti-aphteuse par le virus formolé. Rev. gén. Méd. vét. 1926; 35: 129–134.

3. Barteling S. J., Woortmeyer R. Formaldehyde inactivation of foot-and-mouth disease virus. Conditions for the preparation of safe vaccine. Arch. Virol. 1984; 80 (2–3): 103–117. DOI: 10.1007/BF01310652.

4. Gard S. Theoretical considerations in the inactivation of viruses by chemical means. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1960; 83: 638–648. DOI: 10.1111/j.1749-6632.1960.tb40934.x.

5. Melvin P. A., Pryce J.-M. G. Production of viral antigens with N-acetyl-ethyleneimine. Patent No. US3318775A United States, Int. C12N7/00. Imperial Chemical Industries Ltd. Date of filing: 29.01.1963. Date of publication: 09.05.1967. Режим доступа: https://patents.google.com/patent/US3318775A/en.

6. Улупов Н. А., Михалишин В. В., Гусев А. А., Лёзова Т. Н. Аминоэтилэтиленимин – средство инактивации инфекционности вируса ящура. Современные аспекты ветеринарной патологии животных: материалы конференции, посвященной 40-летию со дня основания ВНИИЗЖ (23–25 ноября 1998 г.). Владимир; 1998; 53–62.

7. Pay T. W. F., Telling R. C., Kitchener B. L., Southern J. Some observations of FMD virus inactivation with acetylethyleneimine. In: European Commission for the Control of Foot-and-Mouth Disease. Report of the Meeting of the Research Group of the Standing Technical Committee (22–24 October 1971, Tubingen, Germany). Romе: FAO; 1972; 81–86. Режим доступа: https://www.fao.org/3/ca9381en/ca9381en.pdf.

8. Brown F., Crick J. Application of agar-gel diffusion analysis to a study of the antigenic structure of inactivated vaccines prepared from the virus of foot-and-mouth disease. J. Immunol. 1959; 82 (5): 444–447. PMID: 13641679.

9. Brown F., Hyslop N. St G., Crick J., Morrow A. W. The use of acetylethyleneimine in the production of inactivated foot-and-mouth disease vaccines. J. Hyg. (Lond). 1963; 61 (3): 337–344. DOI: 10.1017/s0022172400039620.

10. Bahnemann H. G. Inactivation of viral antigens for vaccine preparation with particular reference to the application of binary ethylenimine. Vaccine. 1990; 8 (4): 299–303. DOI: 10.1016/0264-410x(90)90083-x.

11. Bahnemann H. G. Binary ethylenimine as an inactivant for foot-and-mouth disease virus and its application for vaccine production. Arch. Virol. 1975; 47 (1): 47–56. DOI: 10.1007/BF01315592.

12. Михалишин Д. В. Разработка технологии изготовления эмульсионной вакцины против ящура сельскохозяйственных животных: автореф. дис. … д-ра вет. наук. Владимир; 2021. 39 с.

13. Улупов Н. А. Влияние буферного раствора на инактивацию вируса ящура формальдегидом. Ветеринария. 1974; 9: 38–39.

14. Улупов Н. А., Дудников А. И. Изучение активности химических препаратов при инактивации вируса ящура. Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии: тезисы докладов научной конференции ВНИЯИ. Владимир; 1983; 34–35.

15. Улупова Т. Н., Улупов Н. А., Рыбаков С. С., Коропов В. Н., Дудников А. И. Сравнительное изучение инактивирующей активности азиридинов по отношению к вирусу ящура. Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии: тезисы докладов научной конференции ВНИЯИ. Владимир; 1983; 37–39.

16. Warrington R. E., Cunliffe H. R., Bachrach H. L. Derivatives of aziridine as inactivants for foot-and-mouth disease virus vaccines. Am. J. Vet. Res. 1973; 34 (8): 1087–1091. PMID: 4356910.

17. Улупов Н. А. Методика оценки инактивирующих свойств химических препаратов. Владимир; 1980. 4 с.

18. Barteling S. J. Development and performance of inactivated vaccines against foot and mouth disease. Rev. Sci. Tech. 2002; 21 (3): 577–588. DOI: 10.20506/rst.21.3.1361.

19. Aarthi D., Ananda Rao K., Robinson R., Srinivasan V. A. Validation of binary ethyleneimine (BEI) used as an inactivantforfoot and mouth disease tissue culture vaccine. Biologicals. 2004; 32 (3): 153–156. DOI: 10.1016/j.biologicals.2004.09.001.

20. Улупов Н. А., Дудников А. И., Михалишин В. В. Лапинизированная противоящурная вакцина ФГУ «ВНИИЗЖ». Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2008; 6: 323–340. eLIBRARY ID: 14933111.

21. Елькина Ю. С. Противоящурные вакцины типов О, Азия-1, А для формирования раннего иммунитета у животных: автореф. дис. … канд. вет. наук. Владимир; 2021. 21 с.

22. Еремец В. И., Большакова М. В., Фомина Г. А. и др. Изыскание эффективных инактивантов при крупномасштабном производстве противоящурных вакцин. Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию института (8–9 июня 2000 г.). Щелково; 2000; 52–54.

23. Пиголева И. В., Шарыпов А. С., Шабалина Т. Н., Заглядова С. В., Китова М. В., Антонов С. А. и др. Испытания эмульсионных вакцин на основе белых масел, полученных гидрокаталитической переработкой нефтяного сырья. Ветеринария сегодня. 2017; (4): 42–48.

24. Лозовой Д. А., Михалишин Д. В., Лёзова Т. Н., Михалишин В. В., Константинов А. В., Стариков В. А., Борисов А. В. Эффективность сорбированной вакцины против гетерологичных штаммов вируса ящура типа А. Ветеринария. 2016; 2: 16–19. eLIBRARY ID: 25522294.

25. Foot and mouth disease (infection with foot and mouth disease virus). In: WOAH. Terrestrial AnimalHealth Code. 2022; Chapter 3.1.8. Режим доступа: https://www.woah.org/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.01.08_FMD.pdf.