Определение репродуктивных свойств вируса классической чумы свиней вирулентных и вакцинных штаммов в первичных и перевиваемых культурах клеток

Классическая чума свиней относится к особо опасным болезням этого вида животных, вспышки которой ежегодно нотифицируют в ряде стран. Несмотря на наличие средств специфической профилактики, опасность распространения заболевания в отдельной стране или во всем мире в целом сохраняется до сих пор. В связи с этим применение высокочувствительных методов ранней диагностики инфекции и определение наличия циркуляции вируса в природе являются необходимыми при надзоре и эрадикации данной болезни. Разработка новейших методов диагностики опирается на хорошо разработанную систему культивирования вируса, поэтому повышение уровня репродукции вируса классической чумы свиней, изучение возможности использования новых, лишенных эндогенной контаминации линий клеток до сих пор остается весьма актуальной задачей. Данная работа посвящена изучению чувствительности первичных и перевиваемых культур клеток к вирусу классической чумы свиней (вакцинных штаммов и ряда полевых изолятов, выделенных на территории России) с детекцией динамики его репродукции при помощи полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Также проведен анализ интенсивности репродукции вируса в первичных и перевиваемых  культурах клеток, при этом установлено, что вирус классической чумы свиней не обладает способностью к размножению  в некоторых из них без предварительной адаптации. Показано, что для накопления вируса как полевых изолятов, так и вакцинных штаммов целесообразно применять первичные культуры клеток тестикул свиньи и тестикул ягнят при добавлении в питательную среду 10%-й нормальной серонегативной к вирусу классической чумы свиней сыворотки свиньи, а не фетальной бычьей сыворотки. Определены параметры культивирования и оптимальный состав поддерживающих питательных сред, использование которых способствует увеличению накопления вируса в 4–10 раз как в первичных, так и в перевиваемых культурах клеток.

1. Жестерев В. И., Балышева В. И., Чурбанова Г. Н., Устаров Р. Д., Зуев В. В. Изучение некоторых биологических свойств вируса КЧС. Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: материалы научно-практической конференции ВНИИВВиМ «Классическая чума свиней– неотложные проблемы науки и практики» (9–11 ноября 1994 г.). Покров; 1995; 14–15. eLIBRARY ID: 20845304.

2. Барышников П. И. Ветеринарная вирусология: учебное пособие. Барнаул: Изд-во АГАУ; 2006. 113 c.

3. Крупальник В. Л., Наврузшоева Г. Ш. Классическая и африканская чума свиней: Лекция. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К. И. Скрябина; 2012. 37 c.

4. Федорова А. А., Корпусова Т. И., Петрова О. Н., Решетников Г. Г., Ковалишин В. Ф., Пронин И. А. и др. Иммунобиологические свойства культурального штамма вируса классической чумы свиней. Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных: материалы Международной научной конференции молодых ученых (24–26 марта 2004 г.). Владимир: ФГУ «ВНИИЗЖ»; 2004; 100–101.

5. Бабкин Н. В. Использование метода флуоресцирующих антител для определения чувствительности культур клеток к вирусу КЧС. Ветеринарна медицина. Харьков; 2005; 85: 50–52.

6. Вишняков И. Ф., Митин Н. И., Карпов Г. М., Куриннов В. В., Яшин А. Т. Диагностика и дифференциальная диагностика африканской и классической чумы свиней. Ветеринария. 1991; 4: 28–31. eLIBRARY ID: 18836843.

7. Егорова А. И., Толокнов А. С., Филина А. Ю., Окулова О. Н. Выявление вируса КЧС в полевых материалах методом реакции иммунофлюоресценции (РИФ) в перевиваемых гибридных клетках. Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных: тезисы докладов конференции, посвященной 100-летию открытия вируса ящура (27–31 октября 1997 г.). Владимир; ВНИИЗЖ; 1997; 118.

8. Безбородова С. В., Дрыгин В. В., Перевозчикова Н. А. Повышение чувствительности и специфичности метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления вируса классической чумы свиней (КЧС). Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции (17–23 апреля 1995 г.). Владимир: ВНИИЗЖ; 1995; 15.

9. Gallei A., Rümenapf T., Thiel H. J., Becher P. Characterization of helper virus-independent cytopathogenic classical swine fever virus generated by an in vivo RNA recombination system. J. Virol. 2005; 79 (4): 2440–2448. DOI: 10.1128/JVI.79.4.2440-2448.2005.

10. Филина А. Ю., Герасимов В. Н., Байбиков Т. З., Егорова А. И. Культивирование различных штаммов вируса классической чумы свиней в перевиваемых культурах клеток. Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2007; 5: 278–284. eLIBRARY ID: 14454067.

11. Сергеев В. А., Орлянкин Б. Г., Алексеев К. П., Забережный А. Д., Алипер Т. И., Непоклонов Е. А. Вакцины и стратегия вакцинации против классической чумы свиней. Ветеринария. 2018; 4: 3–11. eLIBRARY ID: 32825056.

12. Гребенникова Т. В., Забережный А. Д., Алипер Т. И., Непоклонов Е. А. Генетическая характеристика вакцинного штамма КС вируса классической чумы свиней: сравнительный анализ первичной последовательности генов поверхностных гликопротеинов Erns, E1, E2. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1999; 2: 34–40. eLIBRARY ID: 21818654.

13. Raut S. D., Rajak K. K., Kumar R., Singh V. K., Saxena A., Chaudhary D., et al. Characterization of cytopathogenicity of classical swine fever virus isolate induced by Newcastle disease virus. Virus Disease. 2015; 26 (1-2): 70–76. DOI: 10.1007/s13337-015-0253-0.

14. Zhang H., Leng C., Feng L., Zhai H., Chen J., Liu C., et al. A new subgenotype 2.1d isolates of classical swine fever virus in China, 2014. Infect. Genet. Evol. 2015; 34: 94–105. DOI: 10.1016/j.meegid.2015.05.031.

15. Коломыцев А. А., Миколайчук С. В. Анализ выполнения мероприятий по борьбе с классической чумой свиней, принятых на всесоюзном и всероссийском уровнях, разрабатываемых ВНИИВВИМ. Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: материалы научно-практической конференции ВНИИВВиМ «Классическая чума свиней – неотложные проблемы науки и практики» (9–11 ноября 1994 г.). Покров; 1995; 107–108. eLIBRARY ID: 20844475.

16. Перзашкевич В. С., Кадетов В. В., Цыбанов С. Ж., Куриннов В. В., Балышева В. И. Очистка вируса классической чумы свиней. Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: материалы научно-практической конференции ВНИИВВиМ «Классическая чума свиней – неотложные проблемы науки и практики» (9–11 ноября 1994 г.). Покров; 1995; 20–21. eLIBRARY ID: 20849169.

17. Методические указания по выделению вируса классической чумы свиней на различных культурах клеток с идентификацией возбудителя в реакции иммунофлюоресценции: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 МУ 19-17. Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ»; 2017. 21 с.

18. Колбин И. С., Власова Н. Н., Иголкин А. С., Елсукова А. А., Гаврилова В. Л., Пузанкова О. С. Методические рекомендации по выделению вируса классической чумы свиней на первичных культурах клеток (СС, КМС, СП, ТЯ, ТС) с идентификацией возбудителя методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени: утв. ФГБУ «ВНИИЗЖ» 14.09.2021 № 42-21. Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ»; 2021. 56 с.

19. Инструкция по применению тест-системы «КЧС» для выявления возбудителя классической чумы свиней методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени: утв. 26.10.2020. М.: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. 2020. 25 с.