Разработка тест-системы для выявления антител к вирусу SARS-CoV-2 в сыворотках крови восприимчивых животных

Новая коронавирусная инфекция (COVID-19), вызываемая вирусом SARS-CoV-2, стала причиной пандемии, а также была зарегистрирована в популяциях животных – у норок фермерских хозяйств, собак и представителей кошачьих: домашних кошек, львов и тигров. Доказана чувствительность некоторых видов животных к вирусу SARS-CoV-2 при экспериментальном заражении. Для выявления случаев инфицирования животных эффективно применяются серологические методы. В настоящее время для обнаружения антител к коронавирусам используют такие методы, как реакция нейтрализации, иммунофлуоресцентный метод и иммуноферментный анализ. В результате проведенных исследований была разработана тест-система на основе непрямого варианта иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу SARS-CoV-2 в сыворотках крови восприимчивых животных. Использование в качестве антигена очищенного концентрированного инактивированного вируса позволяет выявлять антитела к различным иммунодоминантным белкам (S и N) SARS-CoV-2. Оптимизированы условия постановки реакции, установлен позитивно-негативный порог при исследовании 154 негативных сывороток крови от животных шести видов (хорьков, норок, лис, песцов, кошек и собак). При определении воспроизводимости метода среднее значение коэффициента вариации не превышало 7%, что является допустимым значением. Специфичность и чувствительность относительно реакции нейтрализации при исследовании 30 сывороток крови от хорьков составила 100 и 92,6% соответственно. Высокая диагностическая чувствительность и специфичность, показанные при исследовании 50 сывороток крови от норок, лис, кошек и собак с разным иммунным статусом, позволяют рекомендовать разработанную тест-систему для проведения скрининговых исследований и контроля поствакцинального иммунитета.

1. Cui J., Li F., Shi Z.-L. Origin and evolution of pathogenic coronaviruses. Nat. Rev. Microbiol. 2019; 17 (3): 181–192. DOI: 10.1038/s41579-018-0118-9.

2. Yao H., Song Y., Chen Y., Wu N., Xu J., Sun C., et al. Molecular architecture of the SARS-CoV-2 virus. Cell. 2020; 183 (3): 730–738. DOI: 10.1016/j.cell.2020.09.018.

3. Харченко Е. П. Коронавирус SARS-CoV-2: особенности структурных белков, контагиозность и возможные иммунные коллизии. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2020; 19 (2): 13–30. DOI: 10.31631/2073-3046-2020-19-2-13-30.

4. Herrera N. G., Morano N. C., Celikgil A., Georgiev G. I., Malonis R. J., Lee J. H., et al. Characterization of the SARS-CoV2 S protein: Biophysical, biochemical, structural, and antigenic analysis. ACSOmega. 2021; 6 (1): 85–102. DOI: 10.1021/acsomega.0c03512.

5. Richard M., Kok A., de Meulder D., Bestebroer T. M., Lamers M. M., Okba N. M. A., et al. SARS-CoV-2 is transmitted via contact and via the air between ferrets. Nat. Commun. 2020; 11 (1):3496. DOI: 10.1038/s41467020-17367-2.

6. Shi J., Wen Z., Zhong G., Yang H., Wang C., Huang B., et al. Susceptibility of ferrets, cats, dogs, and other domesticated animals to SARS-coronavirus 2. Science. 2020; 368 (6494): 1016−1020. DOI: 10.1126/science.abb7015.

7. Pickering B. S., Smith G., Pinette M. M., Embury-Hyatt C., Moffat E., Marszal P., et al. Susceptibility of domestic swine to experimental infection with severe acute respiratory syndrome coronavirus 2. Emerg. Infect. Dis. 2021; 27 (1): 104–112. DOI: 10.3201/eid2701.203399.

8. Sit T. H. C., Brackman C. J., Ip S. M., Tam K. W. S., Law P. Y. T., To E. M. W., et al. Infection of dogs with SARS-CoV-2. Nature. 2020; 586 (7831): 776–778. DOI: 10.1038/s41586-020-2334-5.

9. Oreshkova N., Molenaar R. J., Vreman S., Harders F., Oude Munnink B. B., Hakze-van der Honing R. W., et al. SARS-CoV-2 infection in farmed minks, the Netherlands, April and May 2020. Euro Surveill. 2020; 25 (23):2001005. DOI: 10.2807/1560-7917.ES.2020.25.23.2001005.

10. Zhang Q., Zhang H., Gao J., Huang K., Yang Y., Hui X., et al. A serological survey of SARS-CoV-2 in cat in Wuhan. Emerg. Microbes. Infect. 2020; 9 (1): 2013–2019. DOI: 10.1080/22221751.2020.1817796.

11. Wernike K., Aebischer A., Michelitsch A., Hoffmann D., Freuling C., Balkema-Buschmann A., et al. Multi-species ELISA for the detection of antibodies against SARS-CoV-2 in animals. Transbound. Emerg. Dis. 2020; tbed.13926. DOI: 10.1111/tbed.13926.