Влияние мирамистина на пролиферацию клеток линий ВНК-21 и ПСГК-30 и репродукцию вируса ящура в них

В настоящее время в ветеринарной практике применяется препарат мирамистин (бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид моно­гидрат), обладающий широким бактерицидным действием. Данный антисептик активен против большинства вирусов, микоплазм, бактерий, грибов и простейших. По параметрам токсикометрии мирамистин классифицируется как малоопасное вещество. Использование клеточных структур в каче­стве тест-систем для оценки токсичности фармакологических веществ вместо классических тестов на экспериментальных животных позволяет лучше прояснить возможный механизм действия исследуемого вещества. Поскольку многие виды микоплазм поражают органы мочеполовой системы, для оценки цитотоксичности мирамистина в качестве тест-систем можно использовать клетки почек разных млекопитающих, в частности новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21), сибирского горного козерога (ПСГК-30) и другие. Показана возможность применения монослойных клеточных BHK-21 и ПСГК-30 в качестве тест-систем для оценки базовой цитотоксичности мирамистина. В процессе исследования токсичности препарата изучали влия­ние его различных концентраций на морфологию клеток, определяли количество жизнеспособных клеток и содержание общего белка как показателя прироста клеточной массы. Результаты цитоморфологического исследования свидетельствуют о том, что предельной допустимой концентрацией ми­рамистина для монослойных клеточных линий BHK-21 и ПСГК-30 является 25 мкг/см3. Применение данного антибактериального препарата в бóльших концентрациях вызывало появление и нарастание признаков эндогенной интоксикации и дегенерации. При оценке пролиферативной активности клеток под влиянием антибиотика мирамистина в разных концентрациях выявлено, что увеличение дозы препарата до 50, 75, 100, 125, 150 мкг/см3 приводит к снижению кратности прироста клеток по сравнению с контролем. Содержание в ростовой среде мирамистина в количестве до 25 мкг/см3 не влияло на интенсивность синтеза протеинов. Наличие в культуральной среде мирамистина в предельно допустимой концентрации вызывает незначительное снижение репродукции вируса ящура в культурах клеток ВНК-21 и ПСГК-30 на 4,5 и 4,0% соответственно по сравнению с контролем без антибиотика. Поскольку микоплазмы являются наиболее распространенными контаминантами клеточных культур, дальнейшие исследования будут направлены на изучение возможности применения мирамистина для деконтаминации монослойных клеточных линий ВНК-21 и ПСГК-30.

1. Fischer O., Hájková M., Hořínová Z., Jurmanová K., Zendulková D. The use of ciprofloxacin for decontamination of LSCC-H 32 cell line of chicken embryonal fibroblasts contaminated by Mycoplasma arginini. Acta Vet. Brno. 1992; 61: 51–56. DOI: 10.2754/avb199261010051.

2. Mycoplasma – The Disaster of Cell Culture. Available at: https://www.capricorn-scientific.com/lp/mycoxpert-nl/ (date of access: 12.06.2019).

3. Waites K. B., Taylor-Robinson D. Mycoplasma and Ureaplasma. In Manual of Clinical Microbiology. Eds. P. R. Murray, E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, R. H. Yolken. 7th ed. Washington: ASM Press, 1999: 782–794.

4. Полянская Г. Г. Закономерности кариотипической изменчивости в клеточных культурах при длительном культивировании в разных линиях: автореф. ... д-ра биол. наук. СПб.; 2000. 38 с. Режим доступа: https://dlib.rsl.ru/viewer/01000255531#?page=1.

5. Еропкин М. Ю., Еропкина Е. М. Культура клеток как модельная система исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов. СПб.: МОРСАР АВ; 2003. 239 с.

6. Дунаевский А. М., Кириченко И. М. Клиническое обследование использования препарата Мирамистин в терапии инфекционно-воспалительных заболеваний респираторной системы. Обзор литературы. Поликлиника. 2013; 5: 6–12. eLIBRARY ID: 23245010.

7. Романова М. А., Додонова А. Ш. Изучение цитотоксичности биологически активных соединений на культуре клеток. Молодой ученый. 2016; 18 (122): 110–114. Режим доступа: https://moluch.ru/archive/122/33642/.

8. Zurlo J. Токсикологические анализы in vitro. Режим доступа: http://base.safework.ru/iloenc?print&nd=857400333&spack=110LogLength%3D0%26LogNumDoc%3D857000927%26listid%3D010000000100%26listpos%3D2%26lsz%3D4%26nd%3D857000927%26nh%3D1%26.

9. Доронин М. И., Шишкова А. А., Клюкина Н. Д., Лозовой Д. А., Михалишин Д. В. Использование ампициллина, ципрофлоксацина, цефотаксима и полимиксина В для профилактики микробной контаминации клеточной линии BHK-21/2-17. Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2016; 14: 159–176. eLIBRARY ID: 30095811.

10. Бондаренко А. Ф. Качественный и количественный иммунохимический анализ вирусных белков. Суздаль; 1994. 92 с.