Preview

Ветеринария сегодня

Расширенный поиск

ВЫЯВЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ CAMPYLOBACTER SPP. С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-4-31-3-7

Полный текст:

Аннотация

Бактерии рода Campylobacter – одни из основных зоонозных патогенов, вызывающих заболевания человека и животных. Кампилобактерии являются микроаэрофилами, поэтому для роста им требуется низкая концентрация кислорода (3–5%) и высокая концентрация диоксида углерода (3–10%). В качестве источника энергии они используют не углеводы, а аминокислоты. Классические бактериологические методы выявления бактерий рода Campylobacter не всегда являются успешными из-за сложности обеспечения оптимальных условий для их роста. В связи с этим разработка и внедрение в практику молекулярных методов обнаружения и идентификации Campylobacter является актуальной задачей. Была оптимизирована методика качественного обнаружения генома бактерий Campylobacter spp. посредством полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием термоциклера CFX-96. Мишенью амплификации был выбран высокоспецифичный участок гена 16S pРНК, позволяющий определить шесть видов кампилобактерий: C. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis, C. helveticus и C. hyointestinalis. Подобрана оптимальная концентрация ионов магния (2,5 мМ) и температура отжига праймеров (58 °С). Было протестировано 18 референтных штаммов различных бактерий. Положительный результат был показан только со штаммами, относящимися к роду Campylobacter. Чувствительность метода составила 40 молекул-мишеней. С использованием данной методики исследовали 76 проб сырья животного происхождения. Геном Campylobacter spp. был обнаружен в 18 образцах. Полученные результаты показывают, что оптимизированный вариант полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, основанный на амплификации гена 16S pРНК, представляет собой специфичный, чувствительный, быстрый, воспроизводимый и точный метод для качественного обнаружения Campylobacter spp. в пробах сырья животного происхождения.

Об авторах

Г. С. Скитович
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Старший научный сотрудник, кандидат биологических наук

Владимир 



К. В. Серова
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Ведущий ветеринарный врач

Владимир 



Н. Б. Шадрова
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Заведующий лабораторией, кандидат биологических наук

Владимир



О. В. Прунтова
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия

Главный эксперт, доктор биологических наук, профессор

Владимир



Список литературы

1. Минаев В. И., Черкасский Б. Л., Минаева Н. З. Лабораторная диагностика кампилобактериоза в современных условиях // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 1991. – № 8. – C. 18–21.

2. Питательная среда для выделения и культивирования кампилобактерий / З. У. Темирханова, П. Ш. Гашимова, Н. В. Сафонова [и др.] // Микробиология. – 1999. – № 6. – C. 27–30.

3. Рекомендации по постановке ПЦР / Евроген. – вер. 18 сентября 2017 г. – URL: http://evrogen.ru/kit-user-manuals/Evrogen-PCRrecommendation.pdf.

4. A one-year study of Campylobacter carriage by individual Danish broiler chickens as the basis for selection of Campylobacter spp. strains for a chicken infection model / D. D. Bang, E. M. Nielsen, K. Knudsen, M. Madsen // Epidemiol. Infect. – 2003. – Vol. 130 (2). – P. 323–333; DOI: 10.1017/s095026880200821x.

5. Bronowski C., James C. E., Winstanley C. Role of environmental survival in transmission of Campylobacter jejuni // FEMS Microbiol. Lett. – 2014. – Vol. 356 (1). – P. 8–19; DOI: 10.1111/1574-6968.12488.

6. Campylobacter helveticus sp. nov., a new thermophilic species from domestic animals: characterization, and cloning of a species-specifi c DNA probe / J. Stanley, A. P. Burnens, D. Linton [et al.] // J. Gen. Microbiol. – 1992. – Vol. 138 (11). – P. 2293–2303; DOI: 10.1099/00221287-138-11-2293.

7. Campylobacter hyointestinalis subsp. lawsonii subsp. nov., isolated from the porcine stomach, and an emended description of Campylobacter hyointestinalis / S. L. On, B. Bloch, B. Holmes [et al.] // Int. J. Syst. Bacteriol. – 1995. – Vol. 45 (4). – P. 767–774; DOI: 10.1099/00207713-45-4-767.

8. Detection of Campylobacter spp. in chicken fecal samples by real-time PCR / M. Lund, S. Nordentoft, K. Pedersen, M. Madsen // J. Clin. Microbiol. – 2004. – Vol. 42 (11). – P. 5125–5132; DOI: 10.1128/JCM.42.11.5125-5132.2004.

9. Diversity of serotypes of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli isolated in laboratory animals / N. S. Taylor, M. A. Ellenberger, P. I. Wu, J. G. Fox // Lab. Anim. Sci. – 1989. – Vol. 39 (30). – P. 219–221; PMID: 2724920.

10. Estimating the true incidence of campylobacteriosis and salmonellosis in the European Union, 2009 / A. H. Havelaar, S. Ivarsson, M. Lofdahl, M. J. Nauta // Epidemiol. Infect. – 2013. – Vol. 141 (2). – P. 293– 302; DOI: 10.1017/S0950268812000568.

11. Evaluation of a Campylobacter fetus subspecies venerealis realtime quantitative polymerase chain reaction for direct analysis of bovine preputial samples / B. Chaban, S. Chu, S. Hendrick [et al.] // Can. J. Vet. Res. – 2012. – Vol. 76 (3). – P. 166–173; PMCID: PMC3384278.

12. Fitzgerald C. Campylobacter // Clin. Lab. Med. – 2015. – Vol. 35 (2). – P. 289–298; DOI: 10.1016/j.cll.2015.03.001.

13. Foodborne illness acquired in the United States – Major pathogens / E. Scallan, R. M. Hoekstra, F. J. Angulo [et al.] // Emerg. Infect. Dis. – 2011. – Vol. 17 (1). – P. 7–15; DOI: 10.3201/eid1701.P11101.

14. Global epidemiology of Campylobacter infection / N. O. Kaakoush, N. Castano-Rodriguez, H. M. Mitchell, S. M. Man // Clin. Microbiol. Rev. – 2015. – Vol. 28 (3). – P. 687–720; DOI: 10.1128/CMR.00006-15.

15. Humphrey T., O’Brien S., Madsen M. Campylobacters as zoonotic pathogens: A food production perspective // Int. J. Food Microbiol. – 2007. – Vol. 117 (3). – Р. 237–257; DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2007.01.006.

16. Huq M., Gonis G., Istivan T. Development and evaluation of a multiplex PCR for the detection of Campylobacter concisus and other Campylobacter spp. from gastroenteritis cases // Open J. Med. Microbiol. – 2014. – Vol. 4 (1). – P. 29–37; DOI: 10.4236/ojmm.2014.41005.

17. Identifi cation of Campylobacteria isolated from Danish broilers by phenotypic tests and species-specifi c PCR assays / M. Waino, D. D. Bang, M. Lund [et al.] // J. Appl. Microbiol. – 2003. – Vol. 95 (4). – P. 649–655; DOI: 10.1046/j.1365-2672.2003.01996.x.

18. Identification of hyperinvasive Campylobacter jejuni strains isolated from poultry and human clinical sources / C. Fearnley, G. Manning, M. Bagnall [et al.] // J. Med. Microbiol. – 2008. –Vol. 57 (5). – P. 570–580; DOI: 10.1099/jmm.0.47803-0.

19. Infectious agent and immune response characteristics of chronic enterocolitis in captive rhesus macagues / K. Sestak, C. K. Merritt, J. Borda [et al.] // Infect. Immun. – 2003. –Vol. 71 (7). – P. 4079–4086; DOI: 10.1128/iai.71.7.4079-4086.2003.

20. Lehtola M. J., Loades C. J., Keevil C. W. Advantages of peptide nucleic acid oligonucleotides for sensitive site directed 16S rRNA fl uorescence in situ hybridization (FISH) detection of Campylobacter jejuni, Campylobacter coli and Campylobacter lari // J. Microbiol. Methods. – 2005. – Vol. 62 (2). – P. 211–219; DOI: 10.1016/j.mimet.2005.02.009.

21. Man S. M. The clinical importance of emerging Campylobacter species // Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol. – 2011. – Vol. 8 (12). – P. 669–685; DOI: 10.1038/nrgastro.2011.191.

22. New methods for detection of campylobacters in stool samples in comparison to culture / E. Bessede, A. Delcamp, E. Sifre [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 2011. – Vol. 49 (3). – P. 941–944; DOI: 10.1128/JCM.01489-10.

23. Pitkanen T. Review of Campylobacter spp. in drinking and environmental waters // J. Microbiol. Methods. – 2013. – Vol. 95 (1). – P. 39– 47; DOI: 10.1016/j.mimet.2013.06.008.

24. Rodrigues-Lazaro D., Hernandez M., Pla M. Simultaneous quantitative detection of Listeria spp. and Listeria monocytogenes using a duplexreal-time PCR-based assay // FEMS Microbiol. Lett. – 2004. – Vol. 233 (2). – P. 257–267; DOI: 10.1016/j.femsle.2004.02.018.

25. The role of environmental reservoirs in human campylobacteriosis / H. Whiley, B. van den Akker, S. Giglio, R. Bentham // Int. J. Environ. Res. Public Health. – 2013. – Vol. 10 (11). – P. 5886–5907; DOI: 10.3390/ijerph10115886.

26. Whiley H., McLean R., Ross K. Detection of Campylobacter jejuni in Lizard faeces from cenral Australia using quantitative PCR // Pathogens. – 2017. – Vol. 6 (1):1; DOI: 10.3390/pathogens6010001.

27. Winters D. K., O’Leary A. E., Slavik M. F. Polymerase chain reaction for rapid detection of Campylobacter jejuni in artifi cially contaminated foods // Lett. Appl. Microbiol. – 1998. – Vol. 27 (3). – P. 163–167; DOI: 10.1046/j.1472765x.1998.00411.x.


Для цитирования:


Скитович Г.С., Серова К.В., Шадрова Н.Б., Прунтова О.В. ВЫЯВЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ CAMPYLOBACTER SPP. С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ. Ветеринария сегодня. 2019;(4):3-7. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-4-31-3-7

For citation:


Skitovich G.S., Serova K.V., Shadrova N.B., Pruntova O.V. DETECTION OF CAMPYLOBACTER SPP. WITH REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION. Veterinary Science Today. 2019;(4):3-7. (In Russ.) https://doi.org/10.29326/2304-196X-2019-4-31-3-7

Просмотров: 73


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)