РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ КОНКУРЕНТНОГО ВАРИАНТА ИФА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К РОТАВИРУСУ ГРУППЫ А В СЫВОРОТКАХ КРОВИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Разработана тест-система на основе конкурентного варианта иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антител к ротавирусу группы А в сыворотках крови, полученных от разных видов сельскохозяйственных животных (КРС, свиньи). В качестве антигена для ИФА был выбран штамм TE87 серогруппы А ротавируса КРС, адаптированный к перевиваемой культуре клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ) с титром инфекционной активности 7,0-7,5 lg ТЦД₅₀/см³, обладающий группоспецифичностью и наиболее технологичный для наработки производственного антигена. Специфичность полученных компонентов - ротавирусного антигена и гипериммунной сыворотки кролика - подтверждали методом ПЦР-РВ и иммуноблота. Разработка тест-системы на основе конкурентного варианта ИФА включала в себя выбор оптимального состава блокирующего буфера, разведения антигена, специфической гипериммунной сыворотки и антивидового конъюгата. Определены допустимые значения оптической плотности контрольных сывороток, установлены значения позитивно-негативного порога реакции. Оценку специфичности и чувствительности метода относительно коммерческого набора Ingenasa (Испания) проводили при параллельном тестировании 203 проб сыворотки крови КРС. В результате проведенных исследований разработан чувствительный (92%) и специфичный (94%) конкурентный вариант ИФА, позволяющий с точностью 92,6% выявлять антитела к ротавирусу группы А в сыворотках крови КРС и свиней. С использованием разработанной тест-системы проведено исследование 2259 образцов сывороток крови КРС и свиней, поступивших в 2016-2017 гг. из 48 хозяйств различных регионов Российской Федерации. Средний процент серопозитивных к ротавирусу группы А животных у КРС составил 42%, а у свиней - 84%.

ротавирус, культура клеток, иммуноферментный анализ, сыворотки крови, крупный рогатый скот, свиньи, rotavirus, cell culture, enzyme-linked immunosorbent assay, sera, livestock, pigs

1. Ашмарин И. П., Васильев Н. Н., Амбросов В. А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. - 76 с.

2. Вирусные гастроэнтериты смешанной этиологии и их профилактика / А. И. Собко, Ф. С. Вабишевич, В. Н. Ткацкая [и др.] // Вопросы вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы науч. конф. - Покров, 1992. - Ч. 1. - С. 154-155.

3. Львов Д. К. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. - М.: МИА, 2013. -С. 520-522.

4. Мникова Л. А., Гоголев М. М., Ишкова Т. А. Иммунофер-ментная тест-система для идентификации рота- и коронави-русного антигена, антигена диареи крупного рогатого скота // С.-х. биология. - 2000. - № 6. - С. 117-119.

5. Сергеев В. А., Непоклонов Е. А., Алипер Т. И. Ротавирусы. Вирусы и вирусные инфекции. - М.: Библионика, 2007. -С. 365-369.

6. Agrawal D. K., Singh N. P., Chauhan R. S. Colostral antibodies against rotavirus infection in neonatal calves // J. Immunol. Immunopathol. - 2002. - Vol. 4. - P. 107-109.

7. Almeida J. D., Craig C. R., Hall T. E. Multiple viruses present in the faeces of a scouring calf // Vet. Rec. - 1978. - Vol. 102, No. 8. -P. 170-171.

8. Beards G. M. Polymorphism of genomic RNAs within rotavirus serotypes and subgroups // Arch. Virol. - 1982. - Vol. 74, No. 1 - P. 65-70.

9. Characterization of virus-like particles produced by the expression of rotavirus capsid proteins in insect cells / S. E. Crawford, M. Labbé, J. Cohen [et al.] // J. Virol. - 1994. - Vol. 68, No. 9. -P. 5945-5952.

10. Development, characterization, and diagnostic applications of monoclonal antibodies against bovine rotavirus / Y. Al-Yousif, F. Al-Majhdi, C. Chard-Bergstrom [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2000. - Vol. 7, No. 2. - P. 288-292.

11. Diversity in Indian equine rotaviruses: identification of genotype G10, P6[1] and G1 strains and a new VP7 genotype (G16) strain in specimens from diarrheic foals in India / B. R. Gulati, R. Deepa, B. K. Singh [et al.] // J. Clinical Microbiol. - 2007. - Vol. 45, No. 3. - P. 972-978.

12. Estes M. K. Rotaviruses and their replication // Fields Virology / ed. D. M. Knipe, P. M. Howley [et al.]. - 4th еd. - Philadelphia, 2001. - P. 1747-1785.

13. Group A rotavirus in calves in Minas Gerais State, Brazil / E. F. Barbosa, H. C. P. Figueiredo, A. M. Garcia [et al.] // Ciencia Rural. - 1998. - Vol. 28. - P. 435-439.

14. Prevalence of bovine group A rotavirus shedding among dairy calves in Ohio / A. Lucchelli [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1992. -Vol. 53, No. 2. - P. 169-174.

15. Tsunemitsu H., Jiang B., Saif L. J. Detection of group C rotavirus antigens and antibodies in animals and humans by enzyme-linked immunosorbent assays // J. Clin. Microbiol. - 1992. - Vol. 30, No. 8. - P. 2129-2134.