РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ КОНКУРЕНТНОГО ВАРИАНТА ИФА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К РОТАВИРУСУ ГРУППЫ А В СЫВОРОТКАХ КРОВИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Полный текст:


Аннотация

Разработана тест-система на основе конкурентного варианта иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антител к ротавирусу группы А в сыворотках крови, полученных от разных видов сельскохозяйственных животных (КРС, свиньи). В качестве антигена для ИФА был выбран штамм TE87 серогруппы А ротавируса КРС, адаптированный к перевиваемой культуре клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ) с титром инфекционной активности 7,0-7,5 lg ТЦД50/см3, обладающий группоспецифичностью и наиболее технологичный для наработки производственного антигена. Специфичность полученных компонентов - ротавирусного антигена и гипериммунной сыворотки кролика - подтверждали методом ПЦР-РВ и иммуноблота. Разработка тест-системы на основе конкурентного варианта ИФА включала в себя выбор оптимального состава блокирующего буфера, разведения антигена, специфической гипериммунной сыворотки и антивидового конъюгата. Определены допустимые значения оптической плотности контрольных сывороток, установлены значения позитивно-негативного порога реакции. Оценку специфичности и чувствительности метода относительно коммерческого набора Ingenasa (Испания) проводили при параллельном тестировании 203 проб сыворотки крови КРС. В результате проведенных исследований разработан чувствительный (92%) и специфичный (94%) конкурентный вариант ИФА, позволяющий с точностью 92,6% выявлять антитела к ротавирусу группы А в сыворотках крови КРС и свиней. С использованием разработанной тест-системы проведено исследование 2259 образцов сывороток крови КРС и свиней, поступивших в 2016-2017 гг. из 48 хозяйств различных регионов Российской Федерации. Средний процент серопозитивных к ротавирусу группы А животных у КРС составил 42%, а у свиней - 84%.

Об авторах

О. П. Бьядовская
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия


Е. А. Бухон
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия


А. А. Нестеров
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Россия


Список литературы

1. Ашмарин И. П., Васильев Н. Н., Амбросов В. А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. - 76 с.

2. Вирусные гастроэнтериты смешанной этиологии и их профилактика / А. И. Собко, Ф. С. Вабишевич, В. Н. Ткацкая [и др.] // Вопросы вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы науч. конф. - Покров, 1992. - Ч. 1. - С. 154-155.

3. Львов Д. К. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. - М.: МИА, 2013. -С. 520-522.

4. Мникова Л. А., Гоголев М. М., Ишкова Т. А. Иммунофер-ментная тест-система для идентификации рота- и коронави-русного антигена, антигена диареи крупного рогатого скота // С.-х. биология. - 2000. - № 6. - С. 117-119.

5. Сергеев В. А., Непоклонов Е. А., Алипер Т. И. Ротавирусы. Вирусы и вирусные инфекции. - М.: Библионика, 2007. -С. 365-369.

6. Agrawal D. K., Singh N. P., Chauhan R. S. Colostral antibodies against rotavirus infection in neonatal calves // J. Immunol. Immunopathol. - 2002. - Vol. 4. - P. 107-109.

7. Almeida J. D., Craig C. R., Hall T. E. Multiple viruses present in the faeces of a scouring calf // Vet. Rec. - 1978. - Vol. 102, No. 8. -P. 170-171.

8. Beards G. M. Polymorphism of genomic RNAs within rotavirus serotypes and subgroups // Arch. Virol. - 1982. - Vol. 74, No. 1 - P. 65-70.

9. Characterization of virus-like particles produced by the expression of rotavirus capsid proteins in insect cells / S. E. Crawford, M. Labbé, J. Cohen [et al.] // J. Virol. - 1994. - Vol. 68, No. 9. -P. 5945-5952.

10. Development, characterization, and diagnostic applications of monoclonal antibodies against bovine rotavirus / Y. Al-Yousif, F. Al-Majhdi, C. Chard-Bergstrom [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2000. - Vol. 7, No. 2. - P. 288-292.

11. Diversity in Indian equine rotaviruses: identification of genotype G10, P6[1] and G1 strains and a new VP7 genotype (G16) strain in specimens from diarrheic foals in India / B. R. Gulati, R. Deepa, B. K. Singh [et al.] // J. Clinical Microbiol. - 2007. - Vol. 45, No. 3. - P. 972-978.

12. Estes M. K. Rotaviruses and their replication // Fields Virology / ed. D. M. Knipe, P. M. Howley [et al.]. - 4th еd. - Philadelphia, 2001. - P. 1747-1785.

13. Group A rotavirus in calves in Minas Gerais State, Brazil / E. F. Barbosa, H. C. P. Figueiredo, A. M. Garcia [et al.] // Ciencia Rural. - 1998. - Vol. 28. - P. 435-439.

14. Prevalence of bovine group A rotavirus shedding among dairy calves in Ohio / A. Lucchelli [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1992. -Vol. 53, No. 2. - P. 169-174.

15. Tsunemitsu H., Jiang B., Saif L. J. Detection of group C rotavirus antigens and antibodies in animals and humans by enzyme-linked immunosorbent assays // J. Clin. Microbiol. - 1992. - Vol. 30, No. 8. - P. 2129-2134.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Бьядовская О.П., Бухон Е.А., Нестеров А.А. РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ КОНКУРЕНТНОГО ВАРИАНТА ИФА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К РОТАВИРУСУ ГРУППЫ А В СЫВОРОТКАХ КРОВИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ. Ветеринария сегодня. 2017;(4):63-66.

For citation: Bjadovskaya O.P., Bukhon Y.A., Nesterov A.A. DEVELOPMENT AND USE OF THE COMPETITIVE ELISA-BASED TEST SYSTEM FOR DETECTION OF ANTIBODIES TO GROUP A ROTAVIRUS IN LIVESTOCK SERA. Veterinary Science Today. 2017;(4):63-66. (In Russ.)

Просмотров: 159

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2304-196X (Print)
ISSN 2658-6959 (Online)