veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2024-13-1-95-102veterinary-796Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ | ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯORIGINAL ARTICLES | VETERINARY MICROBIOLOGYУсовершенствование системы поддержания производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed), применяемого для изготовления сапных диагностикумовImproved production strain maintenance technique for Burkholderia mallei 5584 (Master seed) used for glander diagnostic agent productionhttps://orcid.org/0000-0002-6204-6077АртемьеваЕ. А.ArtemevaE. A.
Артемьева Елена Александровна, канд. вет. наук, начальник отдела – Государственная коллекция микроорганизмов
Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан
Elena A. Artemeva, Cand. Sci. (Veterinary Medicine), Head of Department – State Collection of Microorganisms
Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan
artemevaelena21@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0159-3843МельниковаЛ. А.MelnikovaL. A.
Мельникова Лилия Арсентьевна, канд. вет. наук, доцент, ведущий научный сотрудник – Государственная коллекция микроорганизмов
Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан
Liliya A. Melnikova, Cand. Sci. (Veterinary Medicine), Associate Professor, Leading Researcher, Department – State Collection of Microorganisms
Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan
vnivi@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3086-4921ЗайнуллинЛ. И.ZaynullinL. I.
Зайнуллин Ленар Ильгизарович, канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник, ученый секретарь
Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан
Lenar I. Zaynullin, Cand. Sci. (Biology), Leading Researcher, Scientific Secretary
Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan
lenarilgizayn@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5876-6020БуковаН. К.BukovaN. K.
Букова Наталья Константиновна, д-р биол. наук, профессор, ученый секретарь
Звенигородское шоссе, 5, г. Москва, 123022
Nataliya K. Bukova, Dr. Sci. (Biology), Professor, Scientific Secretary
5 Zvenigorodskoye shosse, Moscow 123022
bukova@vgnki.ruФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation, and Biological SafetyRussian FederationФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)РоссияThe Russian State Center for Animal Feed and Drug Standardization and QualityRussian Federation20241503202413195102Copyright © Артемьева Е.А., Мельникова Л.А., Зайнуллин Л.И., Букова Н.К., 20242024Артемьева Е.А., Мельникова Л.А., Зайнуллин Л.И., Букова Н.К.Artemeva E.A., Melnikova L.A., Zaynullin L.I., Bukova N.K.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/796
Одним из направлений коллекционной деятельности является оптимизация существующих методов и разработка новых технологий консервации штаммов микроорганизмов, поэтому проведение работ по усовершенствованию ранее разработанных методик сохранения аутентичности штаммов является актуальной задачей. В статье приведена информация по поддержанию производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) с использованием разработанной ранее системы, которая была дополнена новыми этапами согласно современным требованиям, предъявляемым к коллекционным фондам штаммов возбудителей особо опасных болезней. Предыдущая схема поддержания штамма предусматривала его хранение в нативном виде, что способствовало накоплению генетических мутаций и, как следствие, изменению свойств бактериальной клетки. Для увеличения сроков хранения данного штамма и обеспечения стабильности его биологических свойств применен метод лиофилизации. В качестве криопротектора использовали обезжиренное молоко. Сублимационную сушку проводили по выбранному режиму. Данный метод дает возможность пассировать штамм на чувствительных моделях один раз в 5 лет, что более выгодно и безопасно с экономической и биологической точек зрения. Для безопасной работы с производственным штаммом 5584 возбудителя сапа разработан метод его инактивации гамма-лучами при 30 кГр, который позволил добиться стерильности микробной взвеси и сохранить структуру бактериальных клеток. При сравнении ранее разработанной и дополненной схем установлено, что усовершенствованная система поддержания штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) позволяет исключить утрату его биологических свойств, необходимых для производства качественных сапных диагностикумов, используемых для своевременного выявления заболевания у восприимчивых животных при проведении диагностических исследований.
One of the aspects important for strain collection maintenance is the optimization of existing methods and development of new techniques for microbial strain preservation, that is why the improvement of previously developed methods for authentic strain preservation is an urgent task. The article provides information on the maintenance of Burkholderia mallei 5584 (Master seed) using previously developed technique, which was supplemented with new stages in accordance with modern requirements for strain collections of highly dangerous disease agents. The previous strain maintenance technique involved its storage in its native state, which facilitated accumulation of genetic mutations and, ultimately modification of bacterial cell properties. To extend the storage time of this strain and to ensure the stability of its biological properties, the freeze-drying method was used. Skimmed milk was used as a cryoprotectant. Freeze-drying was performed under selected conditions. This technique allows for the strain sub-culturing on sensitive models once every 5 years, which is more expedient and safe from an economic and biological point of view. For safe handling of Burkholderia mallei 5584 production strain, an inactivation technique using gamma rays at 30 kGy was developed, which allowed to achieve microbial suspension sterility and preserve the bacterial cell structure. When comparing the previously developed and supplemented techniques, it was found that the improved technique of Burkholderia mallei 5584 (Master seed) maintenance makes it possible to avoid the loss of its biological properties needed for the production of high-quality laboratory diagnostic agents used for timely disease detection in susceptible animals by diagnostic tests.
сапBurkholderia malleiпассажлиофилизизациябиологические свойствагамма-облучениеglandersBurkholderia malleipassagefreeze-dryingbiological propertiesgamma irradiationРабота выполнена за счет средств ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в рамках научно-исследовательской работы по теме «Изучение биологических характеристик штаммов возбудителей заразных и особо опасных болезней животных и их стабильности в процессе длительного хранения».The work was funded by the Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety within the research topic “Study of the biological characteristics of strains of contagious and highly dangerous animal disease pathogens and their stability during long-term storage”.ВВЕДЕНИЕ
Эпизоотическое благополучие по заразным и особо опасным инфекционным болезням, в частности по сапу, обеспечивается ветеринарной службой, которая проводит противоэпизоотические мероприятия, направленные на предупреждение заноса возбудителя на территорию Российской Федерации, посредством систематического контроля за благополучием поголовья лошадей (ослов, мулов), а также недопущения распространения заболевания и его ликвидации в случае появления [1].
Сап – это инфекционная болезнь непарнокопытных животных семейства лошадиных, вызываемая микробом, относящимся к роду Burkholderia, виду mallei, и протекающая в основном в хронической форме. В естественных условиях могут заражаться и хищники семейства кошачьих (при поедании мяса больных сапом животных), а также верблюды и человек [2-5]. Данный возбудитель относится к II группе патогенности (опасности), против сапа не разработаны средства специфической профилактики и лечения, в связи с чем заболевание занимает особое место в вопросах биологической безопасности Российской Федерации [6-7]. С конца 50-х годов прошлого столетия и до настоящего времени сап не регистрировался на территории России. Хотя в течение этого времени возникали случаи заболевания с подозрением на сап, но ни один из них не был подтвержден [8]. На сегодняшний день вспышка сапа зарегистрирована в Забайкальском крае с введением карантина по заболеванию (постановление губернатора Забайкальского края от 18.02.2023 № 81). Не исключена опасность возникновения новых случаев сапа в связи с неблагополучием по данному заболеванию государств, граничащих с территорией России (Монголия и Китай), где часто не соблюдаются требования ветеринарного законодательства, в частности имеются факты несанкционированного обмена/перемещения скота и импортируемого животноводческого сырья [1][9]. Кроме того, непредсказуемую эпизоотическую ситуацию по этому заболеванию могут создавать современные международные контакты, где задействованы животные, восприимчивые к сапу (торговля, гастроли цирков и театра зверей, конноспортивные соревнования, международные аукционы и др.).
В настоящее время сап часто регистрируется в Монголии, Турции, Иране, Ираке, странах Аравийского полуострова, Бразилии, Китае, Индии, на Филиппинах [9-14]. По данным Всемирной организации здравоохранения животных, Продовольственной и сельскохозяйственной организации ООН, Всемирной организации здравоохранения, в мире отмечается тенденция к увеличению случаев возникновения сапа у человека и животных, что относит его к возвращающимся инфекциям.
Для недопущения возникновения, завоза и проникновения этого заболевания в страну проводятся диагностические мероприятия с использованием сапных диагностикумов, выпускаемых ФГУП «Курская биофабрика – фирма «БИОК» (сыворотка сапная положительная для реакции связывания комплемента – РСК; антиген сапной для РСК; маллеин и антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации – РА) из производственного штамма Burkholderia mallei 5584. Его получают один раз в 5 лет из Государственной коллекции штаммов – возбудителей особо опасных болезней, используемых в ветеринарии и животноводстве, которая занимается хранением штамма в нативном и лиофилизированном виде и поддержанием его биологических свойств. Полученные рядом авторов результаты показали, что хранение микроорганизмов в нативном виде не соответствует современным требованиям, так как в процессе многократных пересевов накапливаются мутации, которые приводят к изменению их изначальных биологических свойств [15-18]. Ввиду того что одним из направлений коллекционной деятельности является оптимизация существующих методов и разработка новых технологий консервации штаммов микроорганизмов, актуально проведение работ по усовершенствованию ранее разработанных методик сохранения аутентичности штаммов [19-22].
Исходя из вышесказанного, целью работы было усовершенствовать систему поддержания производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маsterseed), используемую для сохранения его жизнеспособности и биологических свойств.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работу по поддержанию производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маsterseed) проводили в отделе «Государственная коллекция микроорганизмов» ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».
Штамм хранится в нативном виде на мясо-пептонном глицериновом агаре (МПГА) и пересевается каждые 30 дней с проверкой биологических свойств один раз в год и в лиофилизированном виде (криопротектор – обезжиренное молоко) с определением его жизнеспособности и аутентичности заявленным паспортным данным каждые 5 лет и пассажем через организм чувствительных моделей (золотистых хомячков) один раз в год.
Ростовые свойства и морфологию клеток штамма, хранящегося в нативном и лиофилизированном виде, изучали на культурах второй генерации, выросших после посева на МПГА, мясо-пептонном глицериновом бульоне (МПГБ) и картофельной среде Павловского. Изучение тинкториальных свойств проводили микроскопией мазков, окрашенных по Граму; подвижность определяли методом висячей капли с помощью световой микроскопии. Ферментативные свойства изучали путем посева на среды Гисса и обезжиренное молоко, а также по образованию сероводорода на МПГА и индола на среде Строгова, засеянных культурой, с использованием индикаторных бумажек (в первом случае пропитанной ацетатом свинца, во втором – щавелевой кислотой), прикрепленных пробкой над поверхностью среды. Тест на наличие каталазы проводили нанесением 3%-го раствора перекиси водорода на поверхность выросшей культуры2.
Патогенность штамма определяли заражением чувствительных лабораторных животных (золотистых хомячков) с последующей оценкой развития характерных клинических признаков сапа, патолого-анатомической картины поражения легких, печени, селезенки и выделением чистой культуры возбудителя.
С целью изучения агглютинабельных свойств из штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) изготавливали антиген и сыворотку к нему, которые испытывали в пластинчатой РА. Сыворотку получали путем трехкратной гипериммунизации кроликов инактивированными клетками штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) в концентрации 2 × 109 м. к./см3 инъекцией в краевую ушную вену с интервалом в три дня: первое введение – 0,5 см3, второе введение – 1,0 см3, третье введение – 2,0 см3. Тотальное обескровливание кроликов проводили на 7-й день после последнего введения антигена.
Сыворотку исследовали по антигенным свойствам (в пластинчатой и пробирочной РА и пробирочной РСК).
Для определения специфичности брали близкородственные в антигенном отношении штаммы возбудителей мелиоидоза и Alcaligenes faecalis [23]. Для этого осуществляли посев на МПГА и мясо-пептонный агар (МПА), инкубировали при 37 °С в течение 48 ч, смывали 0,85%-м раствором NaCl и использовали для постановки РА и РСК в соответствии с СанПиН 3.3686-213.
Поддержание биологических свойств производственного штамма в соответствии с заявленными паспортными данными осуществляли посредством пассажей на золотистых хомячках, которых заражали подкожно в область затылка.
Вся экспериментальная часть работы с лабораторными животными проводилась в соответствии с основными этическими принципами проведения экспериментов на животных, изложенных в «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 18 марта 1986 г.). Эксперименты были научно обоснованы и утверждены Комиссией по биоэтике ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (протокол № 10 от 11.09.2023).
Для получения антигена производственный штамм Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) инактивировали гамма-лучами на установке «Исследователь» (Россия) по ранее определенной дозе облучения 30 кГр в отделе радиобиологии4.
При отработке режима инактивации применяли дозы 15, 20, 25, 30, 35 кГр. Для этого готовили клеточные взвеси с концентрацией 109 м. к./см3 на стерильном 0,85%-м растворе NaCl. Полноту инактивации определяли посевом клеток на питательную среду (МПГА и МПГБ) с последующим инкубированием в течение 10 дней при температуре 37 °С.
Режим лиофилизации штамма отрабатывали на лиофильной установке LZ-9 (Frigera, Чехия). В качестве криопротекторных сред применяли обезжиренное молоко и сахарозо-желатиновую среду.
В данной работе использовалась система поддержания производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) [22], которая была дополнена новыми этапами, отвечающими современным требованиям хранения коллекционных штаммов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Для повышения качества и стандартности производственных, референтных и вакцинных штаммов необходимо тщательное изучение стабильности их биологических свойств с характерными для возбудителя генетически закрепленными признаками: морфологическими, биохимическими, антигенными и другими [17][24][25]. Работа по определению жизнеспособности и изучению биологических свойств производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) была проведена с использованием разработанной ранее и дополненной нами системы поддержания данного штамма возбудителя сапа, применяемого для изготовления диагностикумов, в соответствии с современными требованиями к хранению микроорганизмов [8, 22, 26].
Полученные результаты исследований показали, что штамм на МПГА давал рост в виде полупрозрачных гладких колоний с перламутровым оттенком, сливающихся на 3–5-е сут после посева в сплошной налет на поверхности среды (рис. 1А). Культура бактерий на МПГБ на 3–5-е сут вызывала помутнение среды, на ее поверхности образовывалась нежная пленка и пристеночное кольцо (рис. 1В), а также наблюдался вязкий осадок, поднимающийся со дна пробирки штопором и разбивающийся при встряхивании.
На картофельной среде Павловского 2-суточная культура росла в виде медообразного налета яркожелтого цвета (рис. 2А), 5-суточная культура – в виде слизистого налета с более темной окраской (рис. 2В).
В препарате «висячая капля» клетки были неподвижны, но наблюдали броуновское движение. Мазок штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed), приготовленный из 2-суточной культуры и окрашенный по Граму, при микроскопии в иммерсионной системе представлял собой зернистые палочки с закругленными концами. Бактерии – грамотрицательные, окрашивались в розовый цвет, вызывали свертывание молока без дальнейшей пептонизации (рис. 3А). При росте в бульоне наблюдали изменение цвета индикаторной бумажной полоски, что указывало на образование бактериями сероводорода (рис. 3В). Не разжижали 12%-й желатин (рис. 3С), не образовывали индол (цвет индикатора не изменялся) и каталазу.
Рис. 1. Рост штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) на МПГА (А) и МПГБ (В). Красной стрелкой обозначено пристеночное кольцо и нежная пленка на поверхности среды
Fig. 1. Growth of Burkholderia mallei strain 5584 (Master seed) on beef-extract glycerol agar (A) and beef-extract glycerol broth (B). The ring and pellicle are indicated with a red arrow on the surface of the growth medium
Рис. 3. Свертывание молока без дальнейшей пептонизации (А); образование сероводорода (В); отсутствие разжижения 12%-го желатина (С) культурой Burkholderia mallei 5584 (Маster seed)
Fig. 3. Milk coagulation without further peptonization (A); formation of hydrogen sulfide (B); no liquefaction of 12% gelatin (C) by Burkholderia mallei 5584 (Master seed)
Культура штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) не вызывала изменения окраски сред Гисса на желтый цвет и образования пузырьков газа в поплавках, так как не ферментировала сахара.
Для безопасной работы с возбудителями I–II групп патогенности (опасности), в частности при получении антигенов и гипериммунных сывороток к ним, проводят их инактивацию различными методами (физическими, механическими, химическими и др.). Предыдущая схема поддержания штамма включала инактивацию клеток автоклавированием при температуре 120 °С в течение 15 мин, что приводило к полному их разрушению. Поэтому был проведен подбор дозы гамма-облучения для штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed), результаты которого приведены в таблице 1.
Таблица 1
Определение инактивирующей дозы гамма-облучения штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed)
Table 1
Determination of Burkholderia mallei 5584 (Master seed) inactivation dose by gamma irradiation
Установлено, что облучение в дозе 30 и 35 кГр полностью инактивировало штамм, поэтому в дальнейшей работе использовалась доза 30 кГр.
Проверка агглютинабельных свойств сапной сыворотки, полученной на гамма-облученный антиген, в РА на стекле показала положительную реакцию в виде мелкозернистого агглютината, образовавшегося в течение 1–2 мин.
Патогенность штамма определяли заражением золотистых хомячков путем введения 2-суточной культуры, выращенной на МПГА при температуре 37 °С в течение 48 ч, смытой физиологическим раствором в дозе 1 × 109 м. к./см3 подкожно в область затылка, что вызывало гибель животных на 5–10-е сут. При вскрытии наблюдали следующую патолого-анатомическую картину, характерную для данного возбудителя: на месте введения имелась гнойно-некротическая язва, множественные некротические узелки диаметром 2–3 мм во внутренних органах (печени, селезенке, легких). Из посевов, сделанных из внутренних органов, крови из сердца и места введения, выделена чистая культура возбудителя сапа.
Проверка антигенных свойств штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) с сывороткой, полученной на его введение лабораторным животным, показала, что в пробирочной РА титр составил 1:1600, в РСК – 1:320, в пластинчатой РА – 1:120.
Полученная сыворотка дает перекрестные реакции в РА и РСК со штаммами возбудителей мелиоидоза – 1:1600 и Alcaligenesfaecalis – 1:40.
В целях сохранения чистоты уникальных производственных и эталонных штаммов микроорганизмов проводят их пассирование через организм чувствительных лабораторных животных [15][27-29]. В связи с этим для поддержания биологических свойств производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) согласно паспортным данным осуществлено его пассирование на золотистых хомячках. При этом была выделена чистая культура штамма, которую проверили на аутентичность и заложили на дальнейшее хранение в нативном виде, с последующими пересевами на МПГА каждые 30 дней.
Предыдущая система поддержания штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) предусматривала его хранение в нативном виде, что способствовало накоплению генетических мутаций и, как следствие, изменению свойств бактериальной клетки [22]. Так как первостепенной задачей коллекций микроорганизмов является сохранение штаммов в неизменном состоянии в течение длительного времени, внесли в систему этап лиофилизации, которую проводили по следующему режиму:
После сушки бактерии проверяли на жизнеспособность и сохранность аутентичности заявленным паспортным данным, затем закладывали на хранение в лиофилизированном виде при температуре +4 °C и через 5 лет определяли жизнеспособность и сохранность биологических свойств [30].
Параллельно поддерживали культуру штамма в нативном виде с пересевами через 28–30 дней на МПГА и сравнительной проверкой биологических свойств один раз в год.
В результате проведенной работы по хранению штамма Burkholderia mallei 5584 (Маsterseed) в течение 5 лет с использованием усовершенствованной системы его поддержания было установлено, что он сохраняет свою жизнеспособность, при этом исключается утрата или изменение его морфологических, биохимических, серологических и вирулентных свойств.
Таким образом, усовершенствованная система поддержания производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) включает этапы, представленные в таблице 2.
Таблица 2
Первоначальная и дополненная схемы поддержания штаммаBurkholderia mallei 5584 (Маster seed)
Table 2
Original and supplemented techniques of Burkholderia mallei 5584 (Master seed) maintenance
Применение метода лиофилизации позволило увеличить сроки хранения штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed) и обеспечить стабильность его биологических свойств в течение всего срока хранения.
Кроме того, сублимационная сушка позволила проводить пассаж штамма на чувствительных лабораторных животных один раз в 5 лет, что более выгодно и безопасно с экономической и биологической точек зрения.
Вся работа, проводимая со штаммами возбудителей I–II групп патогенности (опасности), представляет собой угрозу потенциального выделения патогенного биологического агента в воздух производственной зоны, среду обитания человека и заражения персонала. Для этого должны быть разработаны надежные методы их инактивации. В нашем случае был применен метод гамма-облучения. При этом определили оптимальную дозу, составившую 30 кГр, которая позволила надежно инактивировать штамм и сохранить структурную целостность бактериальных клеток, являющихся антигеном для получения гипериммунных сывороток и постановки серологических реакций.
Таким образом, усовершенствованная система поддержания штамма Burkholderia mallei 5584 (Маsterseed) отвечает современным требованиям, предъявляемым к хранению коллекционного фонда возбудителей особо опасных болезней в течение длительного времени.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведенной работы была усовершенствована система поддержания производственного штамма Burkholderia mallei 5584 (Маster seed), обеспечивающая сохранение его биологических свойств, необходимых для производства качественных сапных диагностикумов, используемых при проведении ежегодных диагностических исследований для своевременного выявления больных животных.
1. Об установлении ограничительных мероприятий (карантина) на территории города Читы: постановление губернатора Забайкальского края от 18.02.2023 г. № 8. https://media.75.ru/documents/152305/8-ot-18-02-2023.pdf2. Лабораторная диагностика сапа: методические указания. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2011. 22 с.3. СанПиН 3.3686-21 Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней: утв. постановлением главного государственного санитарного врача РФ 28.01.2021 № 4. https://docs.cntd.ru/document/573660140 (дата обращения: 15.11.2022).4. Шашкаров В. П., Гайнутдинов Т. Р., Идрисов А. М., Гурьянова В. А., Вагин К. Н., Василевский Н. М. и др. Методические рекомендации по использованию ионизирующего излучения для инактивации возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Казань: МеДДоК; 2021. 17 с. https://doi.org/10.31016/fctrb-viev-2020-2
ReferencesМельникова Л. А., Букова Н. К., Макаев Х. Н., Иванова С. В., Мустафина Э. Н., Савкова М. Г. Сап: особо опасное инфекционное заболевание, его характеристика, эпизоотология и диагностика. Ветеринарный врач. 2016; 4: 22–25. EDN: WHTGVJMelnikova L. A., Bukova N. K., Makaev Kh. N., Ivanova S. V., Mustafina I. N., Savkova M. G. Glanders – particularly dangerous disease: characterization, epizootology and detection. Veterinarian. 2016; 4: 22–25. EDN: WHTGVJ (in Russ.)Букова Н. К., Скляров О. Д., Бабичева О. В. Сап: ретроспектива и перспективы создания вакцины. Ветеринария. 2020; 10: 3–8. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2020.23.10.03-08Bukova N. K., Sklyarov O. D., Babicheva O. V. Glanders: lookback study and vaccine’s creation current prospects. Veterinariya. 2020; 10: 3–8. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2020.23.10.03-08 (in Russ.)Sarkar-Tyson M., Titball R. W. Burkholderia mallei and Burkholderia pseudomallei In: Vaccines for Biodefense and Emerging and Neglected Diseases. Ed. by A. D. T. Barrett, L. R. Stanberry. Academic Press; 2009; Chapter 43: 831–843. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-369408-9.00043-3Sarkar-Tyson M., Titball R. W. Burkholderia mallei and Burkholderia pseudomallei In: Vaccines for Biodefense and Emerging and Neglected Diseases. Ed. by A. D. T. Barrett, L. R. Stanberry. Academic Press; 2009; Chapter 43: 831–843. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-369408-9.00043-3Inglis T. J. J., Merritt A. J. Burkholderia pseudomallei and Burkholderia mallei. In: Molecular Medical Microbiology. Ed. by Y.-W. Tang, M. Sussman, D. Liu, I. Poxton, J. Schwartzman. 2nd ed. Academic Press; 2015; Chapter 42: 769–791. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-397169-2.00042-1Inglis T. J. J., Merritt A. J. Burkholderia pseudomallei and Burkholderia mallei. In: Molecular Medical Microbiology. Ed. by Y.-W. Tang, M. Sussman, D. Liu, I. Poxton, J. Schwartzman. 2nd ed. Academic Press; 2015; Chapter 42: 769–791. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-397169-2.00042-1Ряпис Л. А., Илюхин В. И., Сенина Т. В., Шубникова Е. В., Будченко А. А., Куликова А. С. Сравнительная характеристика буркхолдерий группы pseudomallei. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2013; 90 (1): 3–8. EDN: QAYELTRyapis L. A., Ilyukhin V. I., Senina T. V., Shubnikova E. V., Budchenko A. A., Kulikova A. S. Comparative characteristic of Burkholderiae pseudomallei group. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2013; 90 (1): 3–8. EDN: QAYELT (in Russ.)Молчанова Е. В., Агеева Н. П. Научно-методические аспекты совершенствования деятельности коллекции патогенных микроорганизмов Волгоградского научно-исследовательского противочумного института. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018; 95 (3): 117–126. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-3-117-126Molchanova E. V., Ageeva N. P. Scientific and methodological support for development of pathogenic microorganism collection of Volgograd Research Institute for Plague Control. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2018; 95 (3): 117–126. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-3-117-126 (in Russ.)Ветчинин С. С., Щит И. Ю., Шевяков А. Г., Бикетов С. Ф. Возможность выявления штаммов возбудителей сапа и мелиоидоза при сочетании методов иммуноблоттинга и амплификации ДНК. Инфекция и иммунитет. 2019; 9 (2): 404–408. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-2-404-408Vetchinin S. S., Shchit I. Y., Shevyakov A. G., Biketov S. F. The possibility of identifying individual strains of glanders and melioidosis pathogens with a combination of immunoblotting and DNA amplification methods. Russian Journal of Infection and Immunity. 2019; 9 (2): 404–408. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-2-404-408 (in Russ.)Букова Н. К., Скляров О. Д., Юров К. П., Мельникова Л. А. Неспецифические реакции при диагностике сапа лошадей. Ветеринария. 2009; 9: 21–24. EDN: KXURCRBukova N. K., Scljarov O. D., Yurov K. P., Melnikova L. A. The problem of nonspecific reactions in diagnostic of glanders in horses. Veterinariya. 2009; 9: 21–24. EDN: KXURCR (in Russ.)Erdemsurakh O., Ochirbat K., Gombosuren U., Tserendorj B., Purevdorj B., Vanaabaatar B., et al. Seroprevalence of equine glanders in horses in the central and eastern parts of Mongolia. Journal of Veterinary Medical Science. 2020; 82 (9): 1247–1252. https://doi.org/10.1292/jvms.20-0219Erdemsurakh O., Ochirbat K., Gombosuren U., Tserendorj B., Purevdorj B., Vanaabaatar B., et al. Seroprevalence of equine glanders in horses in the central and eastern parts of Mongolia. Journal of Veterinary Medical Science. 2020; 82 (9): 1247–1252. https://doi.org/10.1292/jvms.20-0219Захарова И. Б., Топорков А. В., Викторов Д. В. Мелиоидоз и сап: современное состояние проблемы и актуальные вопросы эпидемиологического надзора. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018; 95 (6): 103–109. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-6-103-109Zakharova I. B., Toporkov A. V., Viktorov D. V. Melioidosis and glanders: current state and actual issues of epidemiological surveillance. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2018; 95 (6): 103–109. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-6-103-109 (in Russ.)Khan I., Wieler L. H., Melzer F., Elschner M. C., Muhammad G., Ali S., et al. Glanders in animals: a review on epidemiology, clinical presentation, diagnosis and countermeasures. Transboundary and Emerging Diseases. 2013; 60 (3): 204–221. https://doi.org/10.1111/j.1865-1682.2012.01342.xKhan I., Wieler L. H., Melzer F., Elschner M. C., Muhammad G., Ali S., et al. Glanders in animals: a review on epidemiology, clinical presentation, diagnosis and countermeasures. Transboundary and Emerging Diseases. 2013; 60 (3): 204–221. https://doi.org/10.1111/j.1865-1682.2012.01342.xFalcão M. V. D., Silveira P. P. M., Santana V. L. A., da Rocha L. O., Chaves K. P., Mota R. A. First record of Burkholderia mallei Turkey 10 strain originating from glanderous horses from Brazil. Brazilian Journal of Microbiology. 2019; 50 (4): 1125–1127. https://doi.org/10.1007/s42770-019-00113-2Falcão M. V. D., Silveira P. P. M., Santana V. L. A., da Rocha L. O., Chaves K. P., Mota R. A. First record of Burkholderia mallei Turkey 10 strain originating from glanderous horses from Brazil. Brazilian Journal of Microbiology. 2019; 50 (4): 1125–1127. https://doi.org/10.1007/s42770-019-00113-2Shakibamehr N., Mosavari N., Harzandi N., Mojgani N. Designing of Western blot technique for glanders diagnosing in Iran. Journal of Equine Veterinary Science. 2021; 99:103403. https://doi.org/10.1016/j.jevs.2021.103403Shakibamehr N., Mosavari N., Harzandi N., Mojgani N. Designing of Western blot technique for glanders diagnosing in Iran. Journal of Equine Veterinary Science. 2021; 99:103403. https://doi.org/10.1016/j.jevs.2021.103403Singha H., Elschner M. C., Malik P., Saini S., Tripathi B. N., Mertens-Scholz K., et al. Molecular typing of Burkholderia mallei isolates from equids with glanders, India. Emerging Infectious Diseases. 2021; 27 (6): 1745–1748. https://doi.org/10.3201/eid2706.203232Singha H., Elschner M. C., Malik P., Saini S., Tripathi B. N., Mertens-Scholz K., et al. Molecular typing of Burkholderia mallei isolates from equids with glanders, India. Emerging Infectious Diseases. 2021; 27 (6): 1745–1748. https://doi.org/10.3201/eid2706.203232Похиленко В. Д., Баранов А. М., Детушев К. В. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития. Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. 2009; 4: 99–121.EDN: LAKPFXPohilenko V. D., Baranov A. M., Detushev K. V. Methods for long-term storage of collection cultures of microorganisms and trends of the development. University Proceedings. Volga Region. Medical Sciences. 2009; 4: 99–121. EDN: LAKPFX (in Russ.)Утепешева А. А. Влияние условий хранения на выживаемость коллекционных бактериальных штаммов. ЭкоБиоТех 2019: материалы VI Всероссийской конференции с международным участием (Уфа, 1–4 октября 2019 г.). Уфа: Уфимский институт биологии; 2019; 318–322. EDN: LIYOZCUtepesheva A. A. Influence of storage conditions on survivability of collectible bacterial strains. EcoBioTech 2019: Proceedings of the VIth All-Russian Conference with international participation (Ufa, October 1–4, 2019). Ufa: Ufa Institute of Biology; 2019; 318–322. EDN: LIYOZC (in Russ.)Охапкина В. Ю. Методы поддержания микробных культур. Часть 2. Лиофилизация. Теоретическая и прикладная экология. 2009; 4: 21–32. EDN: KZTIIJOkhapkina V. Yu. Methods of microbe cultures maintenance. Part 2. Liophylisation. Theoretical and Applied Ecology. 2009; 4: 21–32. EDN: KZTIIJ (in Russ.)Мельникова Л., Иванова С., Галиуллин А., Макаев Х. Определение жизнеспособности и сохранность биологических свойств штаммов возбудителя сапа при длительном хранении. Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2019; 2: 60–63. EDN: EOHRGGMelnikova L., Ivanova S., Galiullin А., Makaev Kh. The determination of the viability and safety of biological properties of strains of the glanders agent during long-term storage. Veterinariya sel’skokhozyaistvennykh zhivotnykh. 2019; 2: 60–63. EDN: EOHRGG (in Russ.)Дятлов И. А. Коллекции патогенных микроорганизмов – значение и проблемы. Бактериология. 2018; 3 (1): 5–6. EDN: XZFBULDyatlov I. A. Problems of pathogenic microorganisms collections. Bacteriology. 2018; 3 (1): 5–6. EDN: XZFBUL (in Russ.)Грачева И. В., Осин А. В., Кутырев В. В. Принципы формирования коллекционных фондов штаммов микроорганизмов. Проблемы особо опасных инфекций. 2021; (2): 16–23. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2021-2-16-23Gracheva I. V., Osin A. V., Kutyrev V. V. Principles of formation of collection funds of microorganism strains. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2021; (2): 16–23. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2021-2-16-23 (in Russ.)Smith D. Culture collections. In: Advances in Applied Microbiology. Ed. by S. Sariaslani, G. M. Gadd. 2012; 79 (Chapter 4): 73–118. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-394318-7.00004-8Smith D. Culture collections. In: Advances in Applied Microbiology. Ed. by S. Sariaslani, G. M. Gadd. 2012; 79 (Chapter 4): 73–118. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-394318-7.00004-8Букова Н. К. Сап: разработка, изготовление, контроль и стандартизация диагностикумов: автореф. дис. … д-ра биол. наук. М.; 1999. 40 с.Bukova N. K. Glanders: development, production, control and standardization of diagnostic agents: Author’s abstract of Thesis for degree of Dr. Sci. (Biology). Moscow; 1999. 40 p. (in Russ.)Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М. О. Биргера. М.: Медицина; 1982. 464 с.Manual for microbiological and virological test methods. Ed. by M. O. Birger. Moscow: Meditsina; 1982. 464 p. (in Russ.)Старовойтова С. A., Скроцкая О. И. Пробиотики на основе трансгенных микроорганизмов. Biotechnologia Acta. 2013; 6 (1): 34–45. EDN: PZMRKZStarovoitova S. А., Skrotska O. I. Probiotics based on transgenic microorganisms. Biotechnologia Acta. 2013; 6 (1): 34–45. EDN: PZMRKZ (in Russ.)Антонов В. А., Илюхин В. И. Молекулярно-биологические подходы к диагностике и внутривидовому типированию возбудителей сапа и мелиоидоза. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2005; (2): 3–9. EDN: GYFPKIAntonov V. A., Iliukhin V. I. Molecular-genetic approaches to diagnosis and intraspecific typing of causative agents of glanders and melioidosis. Molecular Genetics, Microbiology and Virology. 2005; (2): 3–9. PMID: 15954468 (in Russ.)Артемьева Е. А., Мельникова Л. А., Родионов А. П. Особенности подготовки и выдачи производственного штамма 5584 Burkholderia mallei в соответствии с требованиями биологической безопасности. Ветеринария сегодня. 2021; 10 (3): 243–247. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2021-3-38-243-247Artemeva E. A., Melnikova L. A., Rodionov A. P. Preparation and transfer of Burkholderia mallei production strain 5584 in accordance with the biosafety requirements. Veterinary Science Today. 2021; 10 (3): 243–247. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2021-3-38-243-247Охапкина В. Ю., Пяткова Н. В., Барамзина Г. В., Фоменков О. О., Федотов А. К. Опыт длительного хранения штаммов возбудителя туляремии. Проблемы особо опасных инфекций. 2018; (4): 69–74. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2018-4-69-74Okhapkina V. Yu., Pyatkova N. V., Baramzina G. V., Fomenkov O. O., Fedotov A. K. Long-term storage of tularemia agent strains. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2018; (4): 69–74. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2018-4-69-74 (in Russ.)Инструкция по лиофильному высушиванию возбудителей инфекционных заболеваний I–IV групп на коллекторном аппарате системы К. Е. Долинова от 21 марта 1979 г. МЗ СССР, 1979.Instructions on freeze-drying of I–IV Class infectious agents using collector-type machine of K. E. Dolinov system, developed on March 21, 1979, USSR Ministry of Health, 1979. (in Russ.)Червякова Н. С., Валова Т. В., Осин А. В. Использование лиофильных аппаратов камерного типа в коллекциях патогенных микроорганизмов. Проблемы особо опасных инфекций. 2014; (3): 65–68. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2014-3-65-68Chervyakova N. S., Valova T. V., Osin A. V. Application of freeze-dryers of chamber type in the collections of pathogenic microorganisms. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2014; (3): 65–68. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2014-3-65-68 (in Russ.)Мельникова Л. А., Иванова С. В., Макаев Х. Н., Букова Н. К. Влияние сред высушивания на устойчивость возбудителя сапа в процессе лиофилизации и дальнейшем хранении. Ветеринарный врач. 2017; 3: 17–20. EDN: YRWHILMelnikova L. A., Ivanova S. V., Makaev Kh. N., Bukova N. K. The influence of media on dryng stability of the causative agent of glanders in the process of lyophilization and subsequent storage. Veterinarian. 2017; 3: 17–20. EDN: YRWHIL (in Russ.)
The authors declare that there are no conflicts of interest present.