veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2026-15-1-67-73veterinary-983Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ | БОЛЕЗНИ СВИНЕЙORIGINAL ARTICLES | PORCINE DISEASESОптимизация условий транзиентной трансфекции производственных линий клеток млекопитающих для экспрессии антигена Е2 вируса классической чумы свинейOptimizing transient transfection conditions in mammalian cell production lines for expression of classical swine fever virus E2 antigenhttps://orcid.org/0000-0003-2650-6459ГалееваА. Г.GaleevaA. G.

Галеева Антонина Глебовна, канд. вет. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

ул. Сибирский Тракт, 35, г. Казань, 420029, Республика Татарстан

Antonina G. Galeeva, Cand. Sci. (Veterinary Medicine), Leading Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

ul. Sibirskiy Tract, 35, Kazan 420029, Republic of Tatarstan

ntonina-95@yandex.ruhttps://orcid.org/0009-0007-0105-7171КузнецоваЮ. А.KuznetsovaYu. A.

Кузнецова Юлия Александровна, младший научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Yulia A. Kuznetsova, Junior Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

yulia.nikolaeva111@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0006-0211-3334АхуноваА. Р.AkhunovaA. R.

Ахунова Алсу Рузалевна, младший научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Alsu R. Akhunova, Junior Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

aahunova@inbox.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5669-1486ХаммадовН. И.KhammadovN. I.

Хаммадов Наиль Ильдарович, канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник, заведующий лабораторией молекулярногенетического анализа

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

ул. Сибирский Тракт, 35, г. Казань, 420029, Республика Татарстан

Nail I. Khammadov, Cand. Sci. (Biology), Leading Researcher, Head of Laboratory for Molecular and Genetic Analysis

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

ul. Sibirskiy Tract, 35, Kazan 420029, Republic of Tatarstan

nikhammadov@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4764-560XХаертыновК. С.KhaertynovK. S.

Хаертынов Камил Саубанович, канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетического анализа

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

ул. Муштари, 11, г. Казань, 420012, Республика Татарстан

Kamil S. Khaertynov, Cand. Sci. (Biology), Leading Researcher, Laboratory for Molecular and Genetic Analysis

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

ul. Mushtari, 11, Kazan, 420012, Republic of Tatarstan

khaertkamil@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2524-9609МухаммадиевРин. С.MukhammadievRin. S.

Мухаммадиев Ринат Салаватович, канд. биол. наук, старший научный сотрудник отделения вирусологических и ультраструктурных исследований

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Rinat S. Mukhammadiev, Cand. Sci. (Biology), Senior Researcher, Department for Virological and Ultrastructural Research

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

tanirtashir@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8786-1310ЕфимоваМ. А.EfimovaM. A.

Ефимова Марина Анатольевна, д-р биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

ул. Сибирский Тракт, 35, г. Казань, 420029, Республика Татарстан

Marina A. Efimova, Dr. Sci. (Biology), Leading Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

ul. Sibirskiy Tract, 35, Kazan 420029, Republic of Tatarstan

marina-2004r@mail.ruФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»); ФГБОУ ВО «Казанский государственный аграрный университет», Институт «Казанская академия ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана»РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety; Kazan State Agricultural University, Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N. E. BaumanRussian FederationФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological SafetyRussian FederationФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»); Казанская государственная медицинская академия – филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации (КГМА – филиал ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России)РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety; Kazan State Medical Academy – Branch Campus of the Russian Medical Academy of Continuous Professional Education of the Ministry of Healthcare of the Russian FederationRussian Federation2026180320261516773Copyright © Галеева А.Г., Кузнецова Ю.А., Ахунова А.Р., Хаммадов Н.И., Хаертынов К.С., Мухаммадиев Р.С., Ефимова М.А., 20262026Галеева А.Г., Кузнецова Ю.А., Ахунова А.Р., Хаммадов Н.И., Хаертынов К.С., Мухаммадиев Р.С., Ефимова М.А.Galeeva A.G., Kuznetsova Y.A., Akhunova A.R., Khammadov N.I., Khaertynov K.S., Mukhammadiev R.S., Efimova M.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/983

Введение. Несмотря на отсутствие в Российской Федерации с 2021 г. зарегистрированных случаев классической чумы свиней, для получения стату­са зоны, свободной от данного заболевания, необходимо внедрение эффективных и безопасных вакцин, соответствующих стратегии DIVA. В качестве потенциальных инструментов для создания рекомбинантной субъединичной вакцины рассматриваются различные системы экспрессии; перспективным представляется синтез антигена Е2 в клетках млекопитающих.Цель исследования. Оптимизация условий транзиентной трансфекции производственных линий клеток млекопитающих для экспрессии антигена Е2 вируса классической чумы свиней.Материалы и методы. Нуклеотидная последовательность, кодирующая фрагмент антигена Е2 протяженностью 188 а. о., была клонирована в вектор pVAX1. Транзиентная трансфекция проводилась двумя общедоступными методами: кальций-фосфатным и катионным (при помощи разветвленного полиэтиленимина) – в отношении трех производственных клеточных линий млекопитающих: CHO-K1, PK-15, BHK-21/13. Контроль эффективности экспрессии осуществлялся методами иммунофлуоресценции, количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией, иммуноферментного анализа.Результаты. Было установлено, что все рассматриваемые клеточные линии подвергались трансфекции с эффективностью от 60 до 90%. Выживаемость клеток через 24 ч после проведения трансфекции составляла не менее 87%, наименьшие показатели регистрировались при проведении кальцийфосфатной трансфекции с первичной инкубацией 12 ч. Проведение трансфекции во всех случаях сопровождалось экспрессией специфических матричных РНК. Наибольший выход рекомбинантного белка Е2 молекулярной массой 17,3 кДа был характерен для линии СНО-K1 (до 47,4 мг/л), наименьший – для линии BHK-21/13 (до 24,1 мг/л). Коэффициент специфичности в антигенном варианте непрямого иммуноферментного анализа со специфическими антисыворотками для всех вариантов экспрессируемого белка варьировал в диапазоне 5,1–6,2 ед.Заключение. Все представленные в исследовании клеточные линии обладали удовлетворительной трансфицируемостью, что в совокупности с их свойствами (высокой скоростью пролиферации, адаптацией к бессывороточным средам) позволяет использовать их для стабильной экспрессии. И кальций-фосфатный метод, и катионный обеспечивают высокую эффективность трансфекции, относительно низкую цитотоксичность и воспроизводимость. Применение рассматриваемых методов контроля целесообразно в совокупности на этапе конструирования экспрессионных систем, однако в производственных условиях основным критерием их функциональности является тотальный выход специфического рекомбинантного белка, регистрируемый при помощи антигенного иммуноферментного анализа.

Introduction. Despite no cases of classical swine fever (CSF) have been recorded in the Russian Federation since 2021, gaining official recognition, as a disease-free zone, will require adoption of effective, safe vaccines compatible with the DIVA strategy. A range of expression systems is being evaluated as potential platforms for a recombinant subunit vaccine; synthesizing the E2 antigen in mammalian cells appears to be a particularly promising approach.Objective. Optimizing transient transfection conditions in mammalian cell production lines for expression of classical swine fever virus (CSFV) E2 antigen.Materials and methods. The nucleotide sequence encoding a 188-amino acid fragment of the E2 antigen was cloned into the pVAX1 vector. Transient transfection was performed using two common methods – calcium-phosphate and cationic (employing branched polyethylenimine, PEI) – on three established mammalian production cell lines: CHO-K1, PK-15, and BHK-21/13. Expression efficiency was controlled using immunofluorescence, quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, and enzyme-linked immunosorbent assay.Results. It was determined that all the cell lines evaluated underwent transfection with an efficiency ranging from 60 to 90%. Cellular viability 24 hours post-transfection was at least 87%, with the lowest rates observed following calcium-phosphate transfection using an initial 12-hour incubation period. In all cases, transfection was accompanied by expression of specific messenger RNAs. The highest yield of the 17.3 kDa recombinant E2 protein was achieved in the CHO-K1 cell line (up to 47.4 mg/L), while the lowest yield was observed in the BHK-21/13 line (up to 24.1 mg/L). The specificity ratio in the antigen variant of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay using specific antisera ranged from 5.1 to 6.2 units for all the expressed protein variants.Conclusion. All the cell lines presented in the study demonstrated satisfactory transfection efficiency. Combined with their properties – such as high proliferation rates and adaptation to serum-free media – this makes them suitable for stable expression. Both the calcium-phosphate and cationic methods provide high transfection efficiency, relatively low cytotoxicity, and good reproducibility. The combined use of these control methods is advisable during the design phase of expression systems. In a production setting, however, the primary metric of their functionality is the overall yield of the specific recombinant protein, as determined by antigen-specific enzyme-linked immunosorbent assay.

классическая чума свинейклетки млекопитающихтранзиентная экспрессия геноврекомбинантный антигениммунофлуоресценцияматричные РНКиммуноферментный анализclassical swine fevermammalian cellstransient gene expressionrecombinant antigenimmunofluorescencemessenger RNAsenzyme-linked immunosorbent assayРабота выполнена за счет гранта, предоставленного Академией наук Республики Татарстан образовательным организациям высшего образования, научным и иным организациям на поддержку планов развития кадрового потенциала в части стимулирования их научных и научно-педагогических работников к защите докторских диссертаций и выполнению научно-исследовательских работ (соглашение № 4/2025-ПД-ВНИВИ).The work was carried out using a grant provided by the Academy of Sciences of the Republic of Tatarstan to higher education institutions, scientific and other organizations to support plans for the development of human resources in terms of stimulating their scientific and scientific-pedagogical staff to defend doctoral dissertations and carry out research work (agreement No. 4/2025-PD-VNIVI).ReferencesMahadevaswamy R., Muruganantham V., Ramesh V., Mambully S., Suresh K. P., Hiremath J., et al. Global population dynamics and evolutionary selection in classical swine fever virus complete genomes: insights from Bayesian coalescent analysis. Virus Genes. 2025; 61 (4): 464–473. https://doi.org/10.1007/s11262-025-02154-2Mahadevaswamy R., Muruganantham V., Ramesh V., Mambully S., Suresh K. P., Hiremath J., et al. Global population dynamics and evolutionary selection in classical swine fever virus complete genomes: insights from Bayesian coalescent analysis. Virus Genes. 2025; 61 (4): 464–473. https://doi.org/10.1007/s11262-025-02154-2Huang Y.-C., Deng M.-C., Huang Y.-L., Tsai K.-J., Liu H.-M., Liu I.-L., et al. Classical swine fever virus genotype 2.1 triggers stronger inflammatory and immune responses in porcine alveolar macrophages than genotype 3.4. Developmental and Comparative Immunology. 2025; 172:105496. https://doi.org/10.1016/j.dci.2025.105496Huang Y.-C., Deng M.-C., Huang Y.-L., Tsai K.-J., Liu H.-M., Liu I.-L., et al. Classical swine fever virus genotype 2.1 triggers stronger inflammatory and immune responses in porcine alveolar macrophages than genotype 3.4. Developmental and Comparative Immunology. 2025; 172:105496. https://doi.org/10.1016/j.dci.2025.105496Blome S., Staubach C., Henke J., Carlson J., Beer M. Classical swine fever – an updated review. Viruses. 2017; 9 (4):86. https://doi.org/10.3390/v9040086Blome S., Staubach C., Henke J., Carlson J., Beer M. Classical swine fever – an updated review. Viruses. 2017; 9 (4):86. https://doi.org/10.3390/v9040086Yamashita M., Iwamoto S., Ochiai M., Yamamoto A., Sudo K., Narushima R., et al. Pathogenicity of genotype 2.1 classical swine fever virus isola­ ted from Japan in 2019 in pigs. Microbiology and Immunology. 2024; 68 (8): 267–280. https://doi.org/10.1111/1348-0421.13160Yamashita M., Iwamoto S., Ochiai M., Yamamoto A., Sudo K., Narushima R., et al. Pathogenicity of genotype 2.1 classical swine fever virus isola­ ted from Japan in 2019 in pigs. Microbiology and Immunology. 2024; 68 (8): 267–280. https://doi.org/10.1111/1348-0421.13160Ganges L., Núñez J. I., Sobrino F., Borrego B., Fernández-Borges N., Frías-Lepoureau M. T., Rodríguez F. Recent advances in the development of recombinant vaccines against classical swine fever virus: cellular responses also play a role in protection. The Veterinary Journal. 2008; 177 (2): 169–177. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2007.01.030Ganges L., Núñez J. I., Sobrino F., Borrego B., Fernández-Borges N., Frías-Lepoureau M. T., Rodríguez F. Recent advances in the development of recombinant vaccines against classical swine fever virus: cellular responses also play a role in protection. The Veterinary Journal. 2008; 177 (2): 169–177. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2007.01.030Алексеев К. П., Забережный А. Д., Верховский О. А., Мусиенко М. И., Шемельков Е. В., Южаков А. Г., Алипер Т. И. Вакцина субъединичная маркированная против классической чумы свиней, способ ее полу­ чения и применения. Патент № 2808703 Российская Федерация, МПК А61К 39/187, C12N 7/00. ООО «Ветбиохим». № 2023105741. Заявл. 13.03.2023. Опубл. 01.12.2023. Бюл. № 34.Alekseev K. P., Zaberezhnyj A. D., Verkhovskij O. A., Musienko M. I., Shemelkov E. V., Yuzhakov A. G., Aliper T. I. Labeled subunit vaccine against classical swine fever, method of its preparation and use. Patent No. 2808703 Russian Federation, Int. Cl. A61K 39/187, C12N 7/00. ООО “Vetbiokhim”. No. 2023105741. Date of filing: 13.03.2023. Date of publication: 01.12.2023. Bull. No. 34. (in Russ.)Галеева А. Г., Ахунова А. Р., Хаммадов Н. И., Яруллина Г. М., Ефимова М. А. Гетерологичная экспрессия рекомбинантных антигенов вируса классической чумы свиней и цирковируса свиней 2-го типа. Ветеринария. 2024; (10): 25–31. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2024.27.10.25-31Galeeva A. G., Akhunova A. R., Khammadov N. I., Yarullina G. M., Efimova M. A. Heterologous expression of recombinant classical swine fever virus and porcine circovirus type 2 antigens. Veterinariya. 2024; (10): 25–31. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2024.27.10.25-31 (in Russ.)Hopkins R. F., Wall V. E., Esposito D. Optimizing transient recombinant protein expression in mammalian cells. In: Protein Expression in Mammalian Cells. Methods in Molecular Biology. Ed. by J. L. Hartley. Vol. 801. Frederick: Humana Press; 2012; Chapter 16: 251–268. https://doi.org/10.1007/978-1-61779-352-3_16Hopkins R. F., Wall V. E., Esposito D. Optimizing transient recombinant protein expression in mammalian cells. In: Protein Expression in Mammalian Cells. Methods in Molecular Biology. Ed. by J. L. Hartley. Vol. 801. Frederick: Humana Press; 2012; Chapter 16: 251–268. https://doi.org/10.1007/978-1-61779-352-3_16Ахунова А. Р., Насыров Ш. М., Галеева А. Г., Арутюнян Г. С., Ефимова М. А., Гулюкин М. И. Применение прямой реакции иммунофлуоресценции в технологическом контроле матричных расплодок вируса классической чумы свиней. Ветеринарный врач. 2024; (3): 27–33. https://elibrary.ru/mnswgmAhunova A. A., Nasyrov Sh. M., Galeeva A. G., Arutyunyan G. S., E­fimov­a M. A., Gulyukin M. I. Application of direct fluorescent antibodies test in process control of classical swine fever virus master seeds. Veterinarian. 2024; (3): 27–33. https://elibrary.ru/mnswgm (in Russ.)Насыров Ш. М., Ахунова А. Р., Галеева А. Г., Яруллина Г. М., Самерханов И. И., Андреева А. В. Твердофазная иммуноферментная тест-система для производственного контроля специфичности рекомбинантного антигена вируса КЧС. Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2024; (3): 228–335. https://doi.org/10.37670/2073-0853-2024-107-3-228-235Nasyrov Sh. M., Akhunova A. R., Galeeva A. G., Yarullina G. M., ­Samerkhanov I. I., Andreeva A. V. Enzyme-linked immunosorbent assay for in-process control of the specificity of the CSF virus recombinant antigen. ­I­zvestia Orenburg State Agrarian University. 2024; (3): 228–335. https://doi.org/10.37670/2073-0853-2024-107-3-228-235 (in Russ.)Gebauer F., Hentze M. W. Molecular mechanisms of translational control. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2004; 5 (10): 827–835. https://doi.org/10.1038/nrm1488Gebauer F., Hentze M. W. Molecular mechanisms of translational control. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2004; 5 (10): 827–835. https://doi.org/10.1038/nrm1488De Sousa Abreu R., Penalva L. O., Marcotte E. M., Vogel C. Global signatures of protein and mRNA expression levels. Molecular BioSystems. 2009; 5 (12): 1512–1526. https://doi.org/10.1039/b908315dDe Sousa Abreu R., Penalva L. O., Marcotte E. M., Vogel C. Global signatures of protein and mRNA expression levels. Molecular BioSystems. 2009; 5 (12): 1512–1526. https://doi.org/10.1039/b908315dGreenbaum D., Colangelo C., Williams K., Gerstein M. Comparing protein abundance and mRNA expression levels on a genomic scale. Genome Biology. 2003; 4 (9):117. https://doi.org/10.1186/gb-2003-4-9-117Greenbaum D., Colangelo C., Williams K., Gerstein M. Comparing protein abundance and mRNA expression levels on a genomic scale. Genome Biology. 2003; 4 (9):117. https://doi.org/10.1186/gb-2003-4-9-117Kim T. K., Eberwine J. H. Mammalian cell transfection: the present and the future. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2010; 397 (8): 3173–3178. https://doi.org/10.1007/s00216-010-3821-6Kim T. K., Eberwine J. H. Mammalian cell transfection: the present and the future. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2010; 397 (8): 3173–3178. https://doi.org/10.1007/s00216-010-3821-6Hua R.-H., Huo H., Li Y.-N., Xue Y., Wang X.-L., Guo L.-P., et al. Generation and efficacy evaluation of recombinant classical swine fever virus E2 glycoprotein expressed in stable transgenic mammalian cell line. PLoS ONE. 2014; 9 (9):e106891. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0106891Hua R.-H., Huo H., Li Y.-N., Xue Y., Wang X.-L., Guo L.-P., et al. Generation and efficacy evaluation of recombinant classical swine fever virus E2 glycoprotein expressed in stable transgenic mammalian cell line. PLoS ONE. 2014; 9 (9):e106891. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0106891Tian H., Liu X., Wu J., Shang Y., Jiang T., Zheng H., Xie Q. Expression of major antigen domains of E2 gene of CSFV and analysis of its immunological activity. Virologica Sinica. 2008; 23 (4): 247–254. https://doi.org/10.1007/s12250-008-2956-5Tian H., Liu X., Wu J., Shang Y., Jiang T., Zheng H., Xie Q. Expression of major antigen domains of E2 gene of CSFV and analysis of its immunological activity. Virologica Sinica. 2008; 23 (4): 247–254. https://doi.org/10.1007/s12250-008-2956-5Feng L., Chen L., Yun J., Cao X. Expression of recombinant classical swine fever virus E2 glycoprotein by endogenous Txnip promoter in stabl­e transgenic CHO cells. Engineering in Life Sciences. 2020; 20 (8): 320–330. https://doi.org/10.1002/elsc.201900147Feng L., Chen L., Yun J., Cao X. Expression of recombinant classical swine fever virus E2 glycoprotein by endogenous Txnip promoter in stabl­e transgenic CHO cells. Engineering in Life Sciences. 2020; 20 (8): 320–330. https://doi.org/10.1002/elsc.201900147Reinhart D., Damjanovic L., Kaisermayer C., Sommeregger W., Gili A., Gasselhuber B., et al. Bioprocessing of recombinant CHO-K1, CHO-DG44, and CHO-S: CHO expression hosts favor either mAb production or biomass synthesis. Biotechnology Journal. 2019; 14 (3):e1700686. https://doi.org/10.1002/biot.201700686Reinhart D., Damjanovic L., Kaisermayer C., Sommeregger W., Gili A., Gasselhuber B., et al. Bioprocessing of recombinant CHO-K1, CHO-DG44, and CHO-S: CHO expression hosts favor either mAb production or biomass synthesis. Biotechnology Journal. 2019; 14 (3):e1700686. https://doi.org/10.1002/biot.201700686Opefi C. A., Tranter D., Smith S. O., Reeves P. J. Construction of stable mammalian cell lines for inducible expression of G protein-coupled receptors. Methods in Enzymology. 2015; 556: 283–305. https://doi.org/10.1016/bs.mie.2014.12.020Opefi C. A., Tranter D., Smith S. O., Reeves P. J. Construction of stable mammalian cell lines for inducible expression of G protein-coupled receptors. Methods in Enzymology. 2015; 556: 283–305. https://doi.org/10.1016/bs.mie.2014.12.020Tossolini I., López-Díaz F. J., Kratje R., Prieto C. C. Characterization of cellular states of CHO-K1 suspension cell culture through cell cycle and RNA-sequencing profiling. Journal of Biotechnology. 2018; 286: 56–67. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2018.09.007Tossolini I., López-Díaz F. J., Kratje R., Prieto C. C. Characterization of cellular states of CHO-K1 suspension cell culture through cell cycle and RNA-sequencing profiling. Journal of Biotechnology. 2018; 286: 56–67. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2018.09.007

The authors declare that there are no conflicts of interest present.