veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2025-14-1-82-89veterinary-897Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ | ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯORIGINAL ARTICLES | VETERINARY MICROBIOLOGYОтработка режима лиофилизации гипериммунной хламидийной сывороткиOptimization of freeze-drying process for anti-Chlamydia hyperimmune serumhttps://orcid.org/0000-0001-9882-3475ЕвстифеевВ. В.EvstifeevV. V.

Евстифеев Виталий Валерьевич, д-р биол. наук, доцент, главный научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов животных

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан; ул. Сибирский Тракт, 35, г. Казань, 420029, Республика Татарстан

Vitaliy V. Evstifeev, Dr. Sci. (Biology), Associate Professor, Chief Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses of Animals

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan; 35 Sibirskiy trakt str., Kazan 420029, Republic of Tatarstan

vit.evstifeev@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4944-6559ЯковлевС. И.YakovlevS. I.

Яковлев Сергей Игоревич, канд. вет. наук, научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов животных

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Sergey I. Yakovlev, Cand. Sci. (Veterinary Medicine), Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses of Animals

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

arena176@rambler.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3101-7740ХусаиновФ. М.KhusainovF. M.

Хусаинов Фидаиль Миннигалеевич, д-р вет. наук, доцент, ведущий научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов животных

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Fidail M. Khusainov, Dr. Sci. ( Veterinary Medicine), Associate Professor, Leading Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses of Animals

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

fidail63@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8587-3713АкбашевИ. Р.AkbashevI. R.

Акбашев Ильгизар Расилович, канд. вет. наук, научный сотрудник лаборатории вирусных заболеваний животных

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Ilgizar R. Akbashev, Cand. Sci. (Veterinary Medicine), Researcher, Laboratory for Animal Viral Diseases

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

akbashev92@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0004-8301-851XСадыковаС. В.SadykovaS. V.

Садыкова Светлана Васильевна, младший научный сотрудник лаборатории вирусных заболеваний животных

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Svetlana V. Sadykova, Junior Researcher, Laboratory for Animal Viral Diseases

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

ssadykova51@gmail.comФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»); ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н. Э. Баумана» (ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ)РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety; Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N. E. BaumanRussian FederationФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation and Biological SafetyRussian Federation2025220320251418289Copyright © Евстифеев В.В., Яковлев С.И., Хусаинов Ф.М., Акбашев И.Р., Садыкова С.В., 20252025Евстифеев В.В., Яковлев С.И., Хусаинов Ф.М., Акбашев И.Р., Садыкова С.В.Evstifeev V.V., Yakovlev S.I., Khusainov F.M., Akbashev I.R., Sadykova S.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/897Введение

Введение. Современный ареал хламидийной инфекции сельскохозяйственных и диких животных охватывает почти все континенты. В настоящее время для постановки первичного диагноза, проведения скрининговых исследований и отдельных этапов эпизоотологических обследований с целью выявления хламидионосителей в нашей стране применяют «Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных». При производстве средств диагностики важной задачей является обеспечение стабильности различных компонентов тест-систем в процессе их хранения и транспортировки. Одним из путей решения этой проблемы является стабилизация различных компонентов диагностических препаратов посредством лиофилизации.

Цель исследования

Цель исследования. Отработка режима лиофилизации специфической хламидийной сыворотки, оценка ее соответствия характеристикам, заявленным в технических условиях на контроль тест-системы, и испытание стабильности этого компонента.

Материалы и методы

Материалы и методы. Сыворотку получали из крови овец, иммунизированных эмульсионным вакцинным препаратом штамма «АМК-16» Chlamydia psittaci. До проведения процедуры сублимации гипериммунные сыворотки замораживали до температуры минус 60 °С. Лиофилизацию сывороток проводили на аппарате Scientz 30F (Китай) двумя способами, различающимися температурными режимами и давлением в камере. Готовые препараты сывороток крови оценивали на соответствие техническим условиям диагностического набора. Полученные сублиматы закладывали на хранение на срок 24 мес. и исследовали в реакции связывания комплемента на протяжении этого периода.

Результаты

Результаты. В ходе проведенных исследований было установлено, что наиболее эффективным оказался способ лиофилизации специфических сывороток, при котором процесс сублимации проходил при более низком давлении и наиболее высокой температуре нагрева. Оценка соответствия полученного препарата характеристикам, заявленным в технических условиях на тест-систему, показала, что качество сыворотки отвечало всем требованиям. Результаты изучения стабильности гипериммунной сыворотки продемонстрировали, что высушенный усовершенствованным способом препарат не теряет своей специфичности на протяжении 24 мес.

Заключение

Заключение. В результате проведенной работы был отработан оптимальный режим лиофилизации специфической хламидийной сыворотки для диагностической тест-системы. Полученный препарат полностью соответствует характеристикам, заявленным в технических условиях на диагностикум. Установлено, что длительность хранения лиофилизированной сыворотки составляет не менее двух лет, в течение данного периода ее активность и физико-химические свойства не снижаются.

Introduction

Introduction. The distribution are a of Chlamydia infection in livestock and wild animals currently extends across almost all continents. At present, initial diagnosis, screening tests and certain stages of epizootiological investigations aimed at Chlamydia carrier detection are conducted in the Russian Federation using the “Antigen and Serum Kit for Serological Diagnosis of Chlamydiosis in Livestock”. It is important in theproduction of diagnostics to ensure stability of different test kit components during their storage and transportation. One way of addressing this issue is to stabilize diagnosticum components by freeze-drying.

Objective

Objective. The study was aimed at optimization of freeze-drying process for specific anti-Chlamydia serum, the serum assessment for compliance with characteristics laid down in the technical specifications for the test  kit control and testing of the serum for its stability.

Materials and methods

Materials and methods. The serum was prepared using blood from sheep immunized with emulsion vaccine based on Chlamydia psittaci AMK-16 strain. Prior tofreeze-drying, the hyperimmune sera were subjected to freezing to a  temperature of minus 60 °С. The sera were freeze-dried using a Scientz 30F freeze-dryer (China). Two freeze-drying procedures with different temperature  conditions and chamber pressures were applied. The resulting sera were tested for compliance with the technical specifications for thediagnostic test kit. The freeze-driedsera wereput intostorage for 24 months andtested with complement fixation test during this period.

Results

Results. Based on the test results, the freeze-drying procedure employing a lower pressure and the highest heating temperature was found to be the most effective for the specific sera. The serum tests for compliance with characteristics laid down in the technical specifications for the test kit showed that the serum quality met all relevant requirements. The stability test results demonstrated that the hyperimmune serum freeze-dried using the improved procedure remains specific during 24 months.

Conclusion

Conclusion. The work performed allowed for optimization of freeze-drying process for specific anti-Chlamydia serum intended for the diagnostic test kit. The resulting serum is fully compliant with characteristics laid down in thetechnical specifications for the diagnosticum. It was established that the freeze-dried serum shelf life is at least two years, during this period the serum retains its activity and physico-chemical properties.

хламидиозChlamydia psittaciсублимациялиофилизациясыворотка кровитест-системаchlamydiosisChlamydia psittacisublimationfreeze-drying (lyophilization)serumtestkitРабота выполнена за счет средств ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в рамках научно-исследовательской работы по теме «Разработка диагностических наборов для диагностики вирусных и бактериальных инфекций сельскохозяйственных животных».The study was funded by the Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety within research activities on the topic “Development of test kits for diagnosis of viral and bacterial infections in livestock”.ReferencesФедорова В. А., Ляпина А. М., Хижнякова М. А., Зайцев С. С., Салтыков Ю. В., Субботина И. А. и др. Хламидиозы животных и человека. М.: Наука; 2019. 135 с. https://doi.org/10.7868/9785020402492Feodorova V. A., Lyapina A. M., Khizhnyakova M. A., Zaitsev S. S., Saltykov Yu. V., Subbotina I. A., et al. Chlamydioses in animals and humans. Moscow: Nauka; 2019. 135 p. https://doi.org/10.7868/9785020402492 (in Russ.)Равилов Р. Х. Клинико-эпизоотологические особенности хламидиоза у сельскохозяйственных животных. Труды ВИЭВ. 2021; 82 (1): 174–177. https://elibrary.ru/qmaazoRavilov R. Kh. Kliniko-ehpizootologicheskie osobennosti khlamidioza u sel’skokhozyaistvennykh zhivotnykh = Clinical and epizootiological features of chlamydiosis in livestock. Proceedings of the VIEV. 2021; 82 (1): 174–177. https://elibrary.ru/qmaazo (in Russ.)Красочко П. А., Максимович В. В., Синица Н. В., Красочко П. П., Конотоп Д. С., Яромчик Я. П. и др. Хламидиоз сельскохозяйственных животных: учебно-методическое пособие. Витебск: ВГАВМ; 2020. 44 с. https://repo.vsavm.by/handle/123456789/14804Krasochko P. A., Maksimovich V. V., Sinitsa N. V., Krasochko P. P., Konotop D. S., Yaromchik Ya. P., et al. Chlamydiosis in livestock: a study guide. Vitebsk: Vitebsk the Order of “the Badge of Honor” State Academy of Veterinary Medicine; 2020. 44 p. https://repo.vsavm.by/handle/123456789/14804 (in Russ.)Cheong H. C., Lee C. Y. Q., Cheok Y. Y., Tan G. M. Y., Looi C. Y., Wong W. F. Chlamydiaceae: diseases in primary hosts and zoonosis. Microorganisms. 2019; 7 (5):146. https://doi.org/10.3390/microorganisms7050146Cheong H. C., Lee C. Y. Q., Cheok Y. Y., Tan G. M. Y., Looi C. Y., Wong W. F. Chlamydiaceae: diseases in primary hosts and zoonosis. Microorganisms. 2019; 7 (5):146. https://doi.org/10.3390/microorganisms7050146Мустафаева Н. А., Сафарова С. А., Джумшудова Ф. А., Бабанлы Л. Т., Мамедова М. A. Хламидиоз сельскохозяйственных животных. Прикаспийский вестник ветеринарии. 2023; (1): 24–28. https://elibrary.ru/lvvhsyMustafayeva N. A., Safarova S. A., Dzhumshudova F. A., Babanly L. T., Mammadova M. A. Chlamidiosis of agricultural animals. Prikaspijskij vestnik veterinarii. 2023; (1): 24–28. https://elibrary.ru/lvvhsy (in Russ.)Borel N., Sachse K. Zoonotic transmission of Chlamydia spp.: Known for 140 years, but still underestimated. In: Zoonoses: Infections Affecting Humans and Animals. Еd. by A. Sing. Cham: Springer; 2023; 1–28. https://doi.org/10.1007/978-3-030-85877-3_53-1Borel N., Sachse K. Zoonotic transmission of Chlamydia spp.: Known for 140 years, but still underestimated. In: Zoonoses: Infections Affecting Humans and Animals. Еd. by A. Sing. Cham: Springer; 2023; 1–28. https://doi.org/10.1007/978-3-030-85877-3_53-1Caspe S. G., HillH. Chlamydiosisin animals. Animals. 2024; 14 (21):3130. https://doi.org/10.3390/ani14213130Caspe S. G., HillH. Chlamydiosisin animals. Animals. 2024; 14 (21):3130. https://doi.org/10.3390/ani14213130Равилов А. З., Гаффаров Х. З., Равилов Р. Х. Хламидиоз животных. Казань: Фэн АН РТ; 2004. 368 с.Ravilov A. Z., Gaffarov H. Z., Ravilov R. H. Chlamydiosis in animals. Kazan: Feng Publishing House of the Academy of Sciences of the Republic of Tatarstan; 2004. 368 p. (in Russ.)Marti H., Jelocnik M. Animal Chlamydiae: A concern for human and veterinary medicine. Pathogens. 2022; 11 (3):364. https://doi.org/10.3390/pathogens11030364Marti H., Jelocnik M. Animal Chlamydiae: A concern for human and veterinary medicine. Pathogens. 2022; 11 (3):364. https://doi.org/10.3390/pathogens11030364Евстифеев В. В., Хусаинов Ф. М., Хусаинова Г. И., Акбашев И. Р., Яковлев С. И. Оценка эффективности различных специфических хламидийных антигенов для серологической диагностики. Инновационные решения актуальных вопросов безопасности: сборник материалов международной научно-практической конференции (Казань, 11–12 ноября 2021 г.). Казань: ФЦТРБ-ВНИВИ; 2021; 47–51. https://elibrary.ru/cbsurgEvstifeev V. V., Khusainov F. M., Khusainova G. I., Akbashev I. R., Yakovlev S. I. Otsenka effektivnosti razlichnykh spetsificheskikh khlamidiinykh antigenov dlya serologicheskoi diagnostiki = Evaluation of various specific Chlamydia antigens intended for serological diagnosis for their effectiveness. Innovatsionnye resheniya aktual’nykh voprosov bezopasnosti: sbornik materialov mezhdunarodnoi nauchno-prakticheskoi konferentsii (Kazan, 11–12 noyabrya 2021 g.) = Innovative solutionsto topicalsafety issues: proceedings of the International Research-to-Practice Conference (Kazan, 11–12 November 2021). Kazan: Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety; 2021; 47–51. https://elibrary.ru/ikekgw (in Russ.)Евстифеев В. В., Хусаинов Ф. М., Хусаинова Г. И., Акбашев И. Р., Яковлев С. И., Хамидуллина Р. З. Изучение активности компонентов набора для диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животных после лиофилизации и длительного хранения. Молодежная наука – развитию агропромышленного комплекса: материалы Всероссийской (национальной) научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Курск, 3–4 декабря 2020 г.). Часть 2. Курск: Курская ГСА имени И. И. Иванова; 2020; 476–480. https://elibrary.ru/psgqhbEvstifeev V. V., Khusainov F. M., Khusainova G. I., Akbashev I. R., Yakovlev S. I., Khamidullina R. Z. Activity and specificity of lyophilized antigens and sera for serological diagnosis of Chlamydia. Molodezhnaya nauka – razvitiyu agropromyshlennogo kompleksa: materialy Vserossiiskoi (natsional’noi) nauchno-prakticheskoi konferentsii studentov, aspirantov i molodykh uchenykh (Kursk, 3–4 dekabrya 2020 g.). Chast’ 2 = Early career researchers – for the development of agroindustry: proceedings of the All-Russia (National) Research-to-Practice Conference of Students, Postgraduate Students and Early Career Researchers (Kursk, 3–4 December 2020). Part 2. Kursk: Kursk State Agricultural Academy; 2020; 476–480. https://elibrary.ru/psgqhb (in Russ.)Жданова Е. В., Русанова Д. В., Семирчева А. А., Геогджаян А. С., Жарникова И. В. Контроль стабильности диагностикума эритроцитарного бруцеллезного антигенного жидкого в процессе хранения. Инфекционные болезни в современном мире: эволюция, текущие и будущие угрозы: материалы ХIII Ежегодного всероссийского конгресса по инфекционным болезням имени академика В. И. Покровского (Москва, 24–26 мая 2021 г.). М.: Медицинское маркетинговое агентство; 2021; 189. https://elibrary.ru/kxkaxjZhdanova E. V., Rusanova D. V., Semircheva A. A., Geogdjayan A. S., Zharnikova I. V. Kontrol’ stabil’nosti diagnostikuma eritrotsitarnogo brutselleznogo antigennogo zhidkogo v protsesse khraneniya = Storage stability tests of liquid erythrocyte brucellosis diagnosticum. Infektsionnye bolezni v sovremennom mire: evolyutsiya, tekushchie i budushchie ugrozy: materialy XIII Ezhegodnogo vserossiiskogo kongressa po infektsionnym boleznyam imeni akademika V. I. Pokrovskogo (Moskva, 24–26 maya 2021 g.) = Infectious diseases in the world today: evolution, current and future threats: proceedings of the ХIII Annual All-Russia Congress on Infectious Diseases named after Academician V. I. Pokrovsky (Moscow, 24–26 May 2021). Moscow: Meditsinskoe marketingovoe agentstvo; 2021; 189. https://elibrary.ru/kxkaxj (in Russ.)Комиссаров А. В., Бибиков Д. Н., Бадарин С. А., Синицына Н. В., Костылева Н. И., Овчинникова М. В. и др. Разработка расчетной зависимости для оценки величины потери массы при лиофилизации диагностических препаратов. Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2020; 10 (3): 506–514. https://doi.org/10.21285/2227-2925-2020-10-3-506-514Komissarov A. V., Bibikov D. N., Badarin S. A., Sinitsyna N. V., KostylevaN. I., Ovchinnikova M. V., et al. Calculation of dependencesfor estimating the amount of weight loss during lyophilization of diagnostic preparations. Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2020; 10 (3): 506–514. https://doi.org/10.21285/2227-2925-2020-10-3-506-514 (in Russ.)Комиссаров А. В., Бадарин С. А., Бибиков Д. Н., Синицына Н. В., Костылева Н. И., Глазкова Е. А. и др. Совершенствование сублимационной сушки холерных диагностических сывороток в ампулах. Бактериология. 2023; 8 (2): 34–41. https://elibrary.ru/hzodwcKomissarov A. V., Badarin S. A., Bibikov D. N., Sinitsyna N. V., Kostyleva N. I., Glazkova E. A., et al. Improvement freeze-drying of diagnostic cholera sera in ampoules. Bacteriology. 2023; 8 (2): 34–41. https://elibrary.ru/hzodwc (in Russ.)Невская Л. В., Воропаев А. А., Фадейкина О. В., Петрова Н. Э., Капитанова В. К., Трегубова В. Е. и др. Способ получения лиофилизированной формы стандартного образца сыворотки, содержащего аллергенспецифический иммуноглобулин Е (варианты). Патент № 2802333 С1 Российская Федерация, МПК А61К 39/395 (2006.01), А61К 9/19 (2006.01), А61К 38/00 (2006.01). ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения. № 2022132754. Заявл. 14.12.2022. Опубл. 24.08.2023. Бюл. № 24.Nevskaia L. V., Voropaev A. A., FadeikinaO. V., Petrova N. E., KapitanovaV. K., TregubovaV. E., et al. Method of obtaining lyophilized form ofserum reference sample containing allergen-specific immunoglobulin E (versions). Patent No. 2802333 C1 Russian Federation, Int. Cl. А61К 39/395 (2006.01), А61К 9/19 (2006.01), А61К 38/00 (2006.01). Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products’ of the Ministry of Health of the Russian Federation. No. 2022132754. Date of filing: 14.12.2022. Date of publication: 24.08.2023. Bull. No. 24. (in Russ.)Иванова С. В., Мельникова Л. А., Родионов А. П., Евстифеев В. В. Способ получения и хранения гипериммунной сибиреязвенной сыворотки. Ветеринария сегодня. 2023; 12 (3): 215–221. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2023-12-3-215-221Ivanova S. V., Melnikova L. A., Rodionov A. P., Evstifeev V. V. Method of obtaining and storing hyperimmune anthrax serum. Veterinary Science Today. 2023; 12 (3): 215–221. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2023-12-3-215-221Яковлев С. И. Усовершенствование средств специфической профилактики хламидиоза животных: дис. … канд. вет. наук. М.; 2022; 87–88.Yakovlev S. I. Improvement of tools for specific prevention of chlamydiosis in animals: Author’s thesis for degree of Cand. Sci. (Veterinary Medicine). Moscow; 2022; 87–88. (in Russ.)Евстифеев В. В. Разработка и усовершенствование биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики хламидиоза животных: дис. … д-ра биол. наук. Казань; 2015. 417 с.Evstifeev V. V. Development and improvement of biologicals for diagnosis and specific prevention of chlamydiosisin animals: Author’sthesis for degree of Dr. Sci. (Biology). Kazan; 2015. 417 p. (in Russ.)ГОСТ 24061-2012 Средства лекарственные биологические лиофилизированные для ветеринарного применения. Метод определения массовой доли влаги. https://docs.cntd.ru/document/1200103299GOST 24061-2012 Medicine remedies biological lyophilized for veterinary use. Method for determination mass moisture. https://docs.cntd.ru/document/1200103299 (in Russ.)Fissore D., McCoy T. Editorial: Freeze-drying and process analytical technology for pharmaceuticals. Frontiers in Chemistry. 2018; 6:622. https://doi.org/10.3389/fchem.2018.00622Fissore D., McCoy T. Editorial: Freeze-drying and process analytical technology for pharmaceuticals. Frontiers in Chemistry. 2018; 6:622. https://doi.org/10.3389/fchem.2018.00622Комиссаров А. В., Овчинникова М. В., Бадарин С. А., Бибиков Д. Н., Синицына Н. В., Костылева Н. И., Плотников И. А. Экспериментальное обоснование новой формы выпуска холерных диагностических сывороток. Проблемы особо опасных инфекций. 2017; (4): 38–40. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2017-4-38-40Komissarov A. V., Ovchinnikova M. V., Badarin S. A., Bibikov D. N., Sinitsyna N. V., Kostyleva N. I., Plotnikov I. A. Experimental substantiation of new presentation form of cholera diagnostic sera. Problems of Particularly DangerousInfections. 2017; (4): 38–40. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2017-4-38-40 (in Russ.)Кочкалова Н. Н., Абрамова Е. Г., Никифоров А. К., Киреев М. Н., Лобовикова О. А., Савицкая Л. В. и др. Оптимизация формы выпуска и потребительской тары иммуноглобулина антирабического из сыворотки крови лошади. Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2012; (5-1): 236–238. https://elibrary.ru/piwdvzKochkalova N. N., Abramova E. G., Nikiforov A. K., Kireyev M. N., Lobovikova O. A., Savitskaya L. V., et al. Optimization of presentation and consumer container of anti-rabies immunoglobulin obtained from horse serum. Bulletin ofthe East Siberian ScientificCenter oftheAcademy ofMedical Sciences. 2012; (5-1): 236–238. https://elibrary.ru/piwdvz (in Russ.)Алексеев К. В., Блынская Е. В., Тишков С. В. Теоретические и практические основы лиофилизации лекарственных препаратов: монография. М.: Типография «Миттель пресс»; 2019. 219 с.Alekseev K. V., Blynskaya E. V., Tishkov S. V. Theory and practice of medicinal product freeze-drying: a monograph. Moscow: Printing House “Mittel Press”; 2019. 219 p.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.