Аденовирусная инфекция собак, вызванная аденовирусом 2-го серотипа, является преимущественно респираторным заболеванием, которое классически проявляется поражением органов дыхательной системы. Заболеваемость собак инфекционным ларинготрахеитом наиболее часто регистрируется в центральной части Российской Федерации и имеет тенденцию к росту. В связи с этим сохраняется актуальность профилактической иммунизации против данного заболевания. В первую очередь для формирования длительного и напряженного иммунитета у животных при изготовлении вакцины необходимо использовать штаммы вируса, распространенные на конкретной территории и актуальные на данный отрезок времени. Целью данного исследования являлось выделение возбудителя аденовироза собак 2-го типа из биологического материала от животных с признаками аденовирусной инфекции, обладающего устойчивостью на протяжении пяти и более пассажей, а также определение параметров его культивирования. В результате эксперимента было выделено пять изолятов вируса, один из которых обладал оптимальными свойствами для использования при производстве вакцинных препаратов. При проведении сравнительного анализа чувствительности к выделенному вирусу перевиваемых культур клеток Vero, MDCK линий NBL-2 и NBL-9, а также первично трипсинизированных культур клеток (почка щенка, селезенка щенка, почка котенка, селезенка котенка) было установлено, что наиболее чувствительной является клеточная культура MDCK линии NBL-2. Следующим этапом было определение параметров культивирования вируса в данной культуре клеток. В результате установлены оптимальные условия, при которых происходит накопление вируса в максимальных титрах: возраст монослоя культуры клеток для заражения – 48 ч, множественность заражения – 0,01 ТЦД50/кл, время предварительного контакта – 60 мин, температура – (37,0 ± 0,5) °С, срок культивирования – 120 ч.