veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2024-13-1-57-63veterinary-790Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ | БОЛЕЗНИ СВИНЕЙORIGINAL ARTICLES | PORCINE DISEASESКонструирование прокариотической системы экспрессии фрагмента гена ORF-2 цирковируса свиней 2-го типаConstruction of prokaryotic system for expression of porcine circovirus type 2 ORF-2 gene fragmenthttps://orcid.org/0000-0003-2650-6459ГалееваА. Г.GaleevaA. G.

Галеева Антонина Глебовна, канд. вет. наук, заведующий лабораторией вирусных антропозоонозов

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Antonina G. Galeeva, Cand. Sci. (Veterinary Medicine), Head of Laboratory for Viral Anthropozoonoses

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

antonina-95@yandex.ruhttps://orcid.org/0009-0006-0211-3334АхуноваА. Р.AkhunovaA. R.

Ахунова Алсу Рузалевна, младший научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Alsu R. Akhunova, Junior Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

aahunova@mail.comhttps://orcid.org/0000-0001-5279-9836УсольцевК. В.UsoltsevK. V.

Усольцев Константин Валерьевич, канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетического анализа

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Konstantin V. Usoltsev, Cand. Sci. (Biology), Leading Researcher, Laboratory for Molecular and Genetic Analysis

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

ukv3@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5669-1486ХаммадовН. И.KhammadovN. I.

Хаммадов Наиль Ильдарович, канд. биол. наук, заведующий лабораторией молекулярно-генетического анализа

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

Nail I. Khammadov, Cand. Sci. (Biology), Head of Laboratory for Molecular and Genetic Analysis

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

nikhammadov@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8786-1310ЕфимоваМ. А.EfimovaM. A.

Ефимова Марина Анатольевна, д-р биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории вирусных антропозоонозов; профессор

Научный городок-2, г. Казань, 420075, Республика Татарстан

ул. Сибирский тракт, 35, г. Казань, 420029, Республика Татарстан

Marina A. Efimova, Dr. Sci. (Biology), Leading Researcher, Laboratory for Viral Anthropozoonoses; Professor

Nauchnyi gorodok-2, Kazan 420075, Republic of Tatarstan

35 Sibirskiy tract str., Kazan 420029, Republic of Tatarstan

marina-2004r@mail.ruФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation, and Biological SafetyRussian FederationФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»); ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана»РоссияFederal Center for Toxicological, Radiation, and Biological Safety; Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N. E. BaumanRussian Federation2024150320241315763Copyright © Галеева А.Г., Ахунова А.Р., Усольцев К.В., Хаммадов Н.И., Ефимова М.А., 20242024Галеева А.Г., Ахунова А.Р., Усольцев К.В., Хаммадов Н.И., Ефимова М.А.Galeeva A.G., Akhunova A.R., Usoltsev K.V., Khammadov N.I., Efimova M.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/790

Цирковирусные болезни свиней на сегодняшний день являются одной из наиболее значимых проблем свиноводства в развитых странах. Цирковирус свиней 2-го типа (ЦВС-2) считается основным этиологическим агентом синдрома мультисистемного послеотъемного истощения поросят. Случаи массовой заболеваемости свиней цирковирусными болезнями зарегистрированы в большинстве регионов мира, что влечет за собой серьезные экономические последствия. Известно, что оптимальный профилактический эффект в отношении данных инфекций достигается за счет проведения комплекса ветеринарно-санитарных мероприятий в сочетании с вакцинацией. Учитывая высокую эволюционную изменчивость вируса, способствующую появлению новых генотипов и штаммов, вопрос разработки новых кандидатных рекомбинантных вакцин против цирковирусной инфекции, вызванной ЦВС-2, остается открытым. Целями настоящего исследования явились конструирование прокариотической системы экспрессии фрагмента гена ORF-2 ЦВС-2 и оценка ее функциональности. Генетическая вставка, сконструированная из наиболее иммуногенных типоспецифических эпитопов ЦВС-2 на основании консенсусной последовательности штаммов и изолятов генотипов 2а, 2b, 2d, клонирована в экспрессионный вектор pET-22b(+), который был реципиирован в штамм Escherichia coli Rosetta 2(DE3). Отбор трансформантов осуществляли на селективной среде по маркерному гену устойчивости к ампициллину. Индукцию экспрессии таргетного гена проводили внесением различных концентраций изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида. В результате исследований был сконструирован штамм Escherichia coli Rosetta 2(DE3)/pET-22b-ORF-2 – продуцент фрагмента капсидного белка (92–233 а. о.). Установлено, что в присутствии 1 мМ изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида уровень экспрессии растворимого укороченного rCap достигает 35–40 мг/л через 6 ч постиндукции. Специфичность продукта экспрессии оценивали в непрямом иммуноферментном анализе с сывороткой крови свиньи, гиперим­мунизированной цельновирионным ЦВС-2. Было показано, что коэффициент позитивности лизатов клеток штамма-продуцента составлял в среднем 4,34 (p < 0,005). Рекомбинантный белок rCap пригоден для целей серологической диагностики, а также представляет интерес в качестве компонента вакцины, что является целью наших дальнейших изысканий.

Porcine circovirus-associated diseases (PCVDs) are among the most significant challenges for pig farming in developed countries. Porcine circovirus type 2 (PCV-2) is considered the main etiological agent of postweaning multisystemic wasting syndrome in piglets. Mass PCVD occurrence has been reported in most regions of the world, that results in serious economic consequences. Optimal PCVD prevention is known to be achieved through a set of veterinary and sanitary measures in combination with vaccination. High evolutionary virus variability facilitating new genotype and strain emergence requires development of new candidate recombinant vaccines against PCV-2 infection. The study was aimed at construction of prokaryotic system for PCV-2 ORF-2 gene fragment expression and its functionality assessment. A genetic insert constructed from the most immunogenic type-specific PCV-2 epitopes based on genotype 2a, 2b, 2d strain and isolate consensus sequence was cloned into the expression vector pET-22b(+) that was incorporated into the Escherichia coli strain Rosetta 2(DE3). The transformants were selected based on the marker gene of ampicillin resistance on a selective medium. Target gene expression was induced by adding of isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside at different concentrations. As a result, Escherichia coli Rosetta 2(DE3)/pET-22b-ORF-2 strain, a producer of capsid protein fragment (92–233 amino acid residues), was constructed. It was found that in the presence of 1 mM isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside, the expression level of soluble truncated rCap was 35–40 mg/L 6 hours after induction. The expression product was tested for its specificity with indirect ELISA using whole-virion PCV-2-hyperimmunized porcine serum. It was shown that the positivity coefficient of producer strain cell lysates averaged to 4.34 (p < 0.005). The recombinant rCap protein is suitable for serological diagnosis and is also of interest as a vaccine component, which is the goal of our further studies.

цирковирус свиней 2-го типасиндром мультисистемного послеотъемного истощенияORF-2прокариотическая система экспрессииporcine circovirus type 2postweaning multisystemic wasting sindromeORF-2prokaryotic expression systemАвторы благодарят старшего научного сотрудника НИЛ OpenLab «Генные и клеточные технологии» ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» канд. биол. наук Р. Ф. Хайруллина за предоставление экспрессирующего штамма Escherichia coli, а также сотрудников ФКП «Щелковский биокомбинат»: д-ра биол. наук, проф. И. Н. Матвееву и канд. биол. наук Н. В. Хаустову – за предоставление гипериммунной сыворотки к цирковирусу свиней 2-го типа и плодотворную дискуссию.The authors thank senior researcher of the Laboratory “OpenLab Gene and cell technologies”, Kazan (Volga Region) Federal University, Cand. Sci. (Biology) R. F. Khairullin for providing of Escherichia coli expressing strain, as well as employees of the Shchelkovo Biocombinat, Dr. Sci. (Biology), Professor I. N. Matveeva and Cand. Sci. (Biology) N. V. Khaustova for providing PCV-2 hyperimmune serum and fruitful discussion.ReferencesBaekbo P., Kristensen C. S., Larsen L. E. Porcine circovirus diseases: a review of PMWS. Transboundary and Emerging Diseases. 2012; 59 (Suppl. 1): 60–67. https://doi.org/10.1111/j.1865-1682.2011.01288.xBaekbo P., Kristensen C. S., Larsen L. E. Porcine circovirus diseases: a review of PMWS. Transboundary and Emerging Diseases. 2012; 59 (Suppl. 1): 60–67. https://doi.org/10.1111/j.1865-1682.2011.01288.xTassis P. D., Tsakmakidis I., Papatsiros V. G., Koulialis D., Nell T., Brellou G., Tzika E. D. A randomized controlled study on the efficacy of a novel combination vaccine against enzootic pneumonia (Mycoplasma hyopneumoniae) and porcine Circovirus type 2 (PCV2) in the presence of strong maternally derived PCV2 immunity in pigs. BMC Veterinary Research. 2017; 13 (1):91. https://doi.org/10.1186/s12917-017-1014-7Tassis P. D., Tsakmakidis I., Papatsiros V. G., Koulialis D., Nell T., Brellou G., Tzika E. D. A randomized controlled study on the efficacy of a novel combination vaccine against enzootic pneumonia (Mycoplasma hyopneumoniae) and porcine Circovirus type 2 (PCV2) in the presence of strong maternally derived PCV2 immunity in pigs. BMC Veterinary Research. 2017; 13 (1):91. https://doi.org/10.1186/s12917-017-1014-7Young M. G., Cunningham G. L., Sanford S. E. Circovirus vaccination in pigs with subclinical porcine circovirus type 2 infection complicated by ileitis. Journal of Swine Health and Production. 2011; 19 (3): 175–180. https://www.aasv.org/shap/issues/v19n3/v19n3p175.pdfYoung M. G., Cunningham G. L., Sanford S. E. Circovirus vaccination in pigs with subclinical porcine circovirus type 2 infection complicated by ileitis. Journal of Swine Health and Production. 2011; 19 (3): 175–180. https://www.aasv.org/shap/issues/v19n3/v19n3p175.pdfБулгаков А. Д., Гребенникова Т. В., Южаков А. Г., Алипер Т. И., Непоклонов Е. А. Молекулярно-генетический анализ геномов вирусов респираторно-репродуктивного синдрома свиней и цирковируса второго типа, циркулирующих на территории Российской Федерации. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2014; (4): 29–33. EDN: TEOVVZBulgakov A. D., Grebennikova T. V., Yuzhakov A. G., Aliper T. I., Nepoklonov E. A. Molecular genetic analysis of genomes of porcine respiratory and reproductive syndrome viruses and porcine circovirus type 2 circulating on the territory of the Russian Federation. Molecular Genetics, Microbiology and Virology. 2014; 29 (4): 190–194. https://doi.org/10.3103/S0891416814040028Литенкова И. Ю., Богомолова О. А., Матвеева И. Н., Чумакова М. С. Эффективность вакцинации поросят инактивированной цельновирионной вакциной против цирковируса свиней второго типа. Эффективное животноводство. 2022; (2): 64–65. EDN: NEMMUBLitenkova I. Yu., Bogomolova O. A., Matveeva I. N., Chumakova M. S. Effektivnost’ vaktsinatsii porosyat inaktivirovannoi tsel’novirionnoi vaktsinoi protiv tsirkovirusa svinei vtorogo tipa = Effectiveness of vaccination of piglets with inactivated whole-virion vaccine against porcine circovirus virus type 2. Effektivnoe zhivotnovodstvo. 2022; (2): 64–65. EDN: NEMMUB (in Russ.)Раев С. А., Южаков А. Г., Алексеев К. П., Аноятбеков М., Верховский О. А., Алипер Т. И. Мониторинг цирковирусных болезней свиней в условиях промышленных свинокомплексов. Аграрная наука. 2019; 11–12: 30–32. https://doi.org/10.32634/0869-8155-2019-333-10-30-32Raev S. A., Yushakov A. G., Alekseev K. P., Anoyatbekov M., Verhovskij O. A., Aliper T. I. Porcine circovirus associated diseases diagnosis at industrial pig farm conditions. Agrarian Science. 2019; (11–12): 30–32. https://doi.org/10.32634/0869-8155-2019-333-10-30-32 (in Russ.)Карпова О. О., Матвеева И. Н. Культивирование клеток: сравнительный анализ традиционных и инновационных технологий. Ветеринарный врач. 2022; (5): 14–18. EDN: RRYWMMKarpova O. O., Matveeva I. N. Cell cultivation: a comparative analysis of traditional and innovative technologies. Veterinarian. 2022; (5): 14–18. EDN: RRYWMM (in Russ.)Lv Q.-Z., Guo K.-K., Zhang Y.-M. Current understanding of genomic DNA of porcine circovirus type 2. Virus Genes. 2014; 49 (1): 1–10. https://doi.org/10.1007/s11262-014-1099-zLv Q.-Z., Guo K.-K., Zhang Y.-M. Current understanding of genomic DNA of porcine circovirus type 2. Virus Genes. 2014; 49 (1): 1–10. https://doi.org/10.1007/s11262-014-1099-zZhou J., Wang Y., Zhou L., Qiu Y., Zhao J., Dai B., et al. Interaction network of porcine circovirus type 3 and 4 capsids with host proteins. Viruses. 2022; 14 (5):939. https://doi.org/10.3390/v14050939Zhou J., Wang Y., Zhou L., Qiu Y., Zhao J., Dai B., et al. Interaction network of porcine circovirus type 3 and 4 capsids with host proteins. Viruses. 2022; 14 (5):939. https://doi.org/10.3390/v14050939Parthiban S., Ramesh A., Karuppannan A. K., Dhinakar Raj G., Hemalatha S., Kirubaharan J. J., et al. Molecular prevalence of porcine circovirus 2 infection: foremost report in southern states of India. Exploratory Animal and Medical Research. 2022; 12 (1): 99–108. https://doi.org/10.52635/eamr/12.1.99-108Parthiban S., Ramesh A., Karuppannan A. K., Dhinakar Raj G., Hemalatha S., Kirubaharan J. J., et al. Molecular prevalence of porcine circovirus 2 infection: foremost report in southern states of India. Exploratory Animal and Medical Research. 2022; 12 (1): 99–108. https://doi.org/10.52635/eamr/12.1.99-108He J., Cao J., Zhou N., Jin Y., Wu J., Zhou J. Identification and functional analysis of the novel ORF4 protein encoded by porcine circovirus type 2. Journal of Virology. 2013; 87 (3): 1420–1429. https://journals.asm.org/doi/abs/10.1128/jvi.01443-12He J., Cao J., Zhou N., Jin Y., Wu J., Zhou J. Identification and functional analysis of the novel ORF4 protein encoded by porcine circovirus type 2. Journal of Virology. 2013; 87 (3): 1420–1429. https://journals.asm.org/doi/abs/10.1128/jvi.01443-12Truong C., Mahe D., Blanchard P., Le Dimna M., Madec F., Jestin A., Albina E. Identification of an immunorelevant ORF2 epitope from porcine circovirus type 2 as a serological marker for experimental and natural infection. Archives of Virology. 2001; 146 (6): 1197–1211. https://doi.org/10.1007/s007050170115Truong C., Mahe D., Blanchard P., Le Dimna M., Madec F., Jestin A., Albina E. Identification of an immunorelevant ORF2 epitope from porcine circovirus type 2 as a serological marker for experimental and natural infection. Archives of Virology. 2001; 146 (6): 1197–1211. https://doi.org/10.1007/s007050170115Davies B., Wang X., Dvorak C. M. T., Marthaler D., Murtaugh M. P. Diagnostic phylogenetics reveals a new porcine circovirus 2 cluster. Virus Research. 2016; 217: 32–37. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2016.02.010Davies B., Wang X., Dvorak C. M. T., Marthaler D., Murtaugh M. P. Diagnostic phylogenetics reveals a new Porcine circovirus 2 cluster. Virus Research. 2016; 217: 32–37. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2016.02.010Раев С. А. Специфическая профилактика цирковирусных болезней свиней: современное состояние и перспективы. Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2014; (1): 26–29. EDN: SAHYWNRaev S. A. Vaccination against porcine circovirus diseases: the present state and future prospects. Russian Veterinary Journal. Productive animals. 2014; (1): 26–29. EDN: SAHYWN (in Russ.)Correa-Fiz F., Franzo G., Llorens A., Segalés J., Kekarainen T. Porcine circovirus 2 (PCV-2) genetic variability under natural infection scenario reveals a complex network of viral quasispecies. Scientific Reports. 2018; 8 (1):15469. https://doi.org/10.1038/s41598-018-33849-2Correa-Fiz F., Franzo G., Llorens A., Segalés J., Kekarainen T. Porcine circovirus 2 (PCV-2) genetic variability under natural infection scenario reveals a complex network of viral quasispecies. Scientific Reports. 2018; 8 (1):15469. https://doi.org/10.1038/s41598-018-33849-2Wu P.-C., Chen T.-Y., Chi J.-N., Chien M.-S., Huang C. Efficient expression and purification of porcine circovirus type 2 virus-like particles in Escherichia coli. Journal of Biotechnology. 2016; 220: 78–85. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.01.017Wu P.-C., Chen T.-Y., Chi J.-N., Chien M.-S., Huang C. Efficient expression and purification of porcine circovirus type 2 virus-like particles in Escherichia coli. Journal of Biotechnology. 2016; 220: 78–85. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.01.017Bradford M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 1976; 72 (1–2): 248–254. https://doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3Bradford M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 1976; 72 (1–2): 248–254. https://doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3Page M., Thorpe R. Purification of IgG using DEAE-sepharose chromatography. In: The Protein Protocols Handbook. Ed. by J. M. Walker. Totowa: Humana Press; 2002; 987–988. https://doi.org/10.1385/1-59259-169-8:987Page M., Thorpe R. Purification of IgG using DEAE-sepharose chromatography. In: The Protein Protocols Handbook. Ed. by J. M. Walker. Totowa: Humana Press; 2002; 987–988. https://doi.org/10.1385/1-59259-169-8:987Мухамеджанова А. Г., Ахмадеев Р. М., Мифтахов Н. Р., Насыров Ш. М., Алеева З. З., Яруллина Г. М., Арутюнян Г. С. Оптимизация схем гипериммунизации лабораторных животных высокоочищенным антигеном вируса бешенства. Ветеринария. 2020; (10): 25–29. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2020.23.10.25-29Mukhamedzhanova A. G., Akhmadeev R. M., Miftakhov N. R., Nasyrov Sh. M., Aleeva Z. Z., Yarullina G. M., Arutyunjan G. S. Optimization of laboratory animals hyperimmunization schemes with a highly purified rabies virus antigen. Veterinariya. 2020; (10): 25–29. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2020.23.10.25-29 (in Russ.)Guo L., Lu Y., Huang L., Wei Y., Liu C. Identification of a new antigen epitope in the nuclear localization signal region of porcine circovirus type 2 capsid protein. Intervirology. 2011; 54 (3): 156–163. https://doi.org/10.1159/000319838Guo L., Lu Y., Huang L., Wei Y., Liu C. Identification of a new antigen epitope in the nuclear localization signal region of porcine circovirus type 2 capsid protein. Intervirology. 2011; 54 (3): 156–163. https://doi.org/10.1159/000319838Hung L.-C. Carboxyl-terminal decoy epitopes in the capsid protein of porcine circovirus type 2 are immunogenicity-enhancers that elicit predominantly specific antibodies in non-vaccinated pigs. Viruses. 2022; 14 (11):2373. https://doi.org/10.3390/v14112373Hung L.-C. Carboxyl-terminal decoy epitopes in the capsid protein of porcine circovirus type 2 are immunogenicity-enhancers that elicit predominantly specific antibodies in non-vaccinated pigs. Viruses. 2022; 14 (11):2373. https://doi.org/10.3390/v14112373Mo X., Li X., Yin B., Deng J., Tian K., Yuan A. Structural roles of PCV2 capsid protein N-terminus in PCV2 particle assembly and identification of PCV2 type-specific neutralizing epitope. PLoS Pathogens. 2019; 15 (3):e1007562. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007562Mo X., Li X., Yin B., Deng J., Tian K., Yuan A. Structural roles of PCV2 capsid protein N-terminus in PCV2 particle assembly and identification of PCV2 type-specific neutralizing epitope. PLoS Pathogens. 2019; 15 (3):e1007562. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007562Shang S.-B., Jin Y.-L., Jiang X.-T., Zhou J.-Y., Zhang X., Xing G., et al. Fine mapping of antigenic epitopes on capsid proteins of porcine circovirus, and antigenic phenotype of porcine circovirus type 2. Molecular Immunology. 2009; 46 (3): 327–334. https://doi.org/10.1016/j.molimm.2008.10.028Shang S.-B., Jin Y.-L., Jiang X.-T., Zhou J.-Y., Zhang X., Xing G., et al. Fine mapping of antigenic epitopes on capsid proteins of porcine circovirus, and antigenic phenotype of porcine circovirus type 2. Molecular Immunology. 2009; 46 (3): 327–334. https://doi.org/10.1016/j.molimm.2008.10.028Trible B. R., Kerrigan M., Crossland N., Potter M., Faaberg K., Hesse R., Rowland R. R. R. Antibody recognition of porcine circovirus type 2 capsid protein epitopes after vaccination, infection, and disease. Clinical and Vaccine Immunology. 2011; 18 (5): 749–757. https://journals.asm.org/doi/10.1128/cvi.00418-10Trible B. R., Kerrigan M., Crossland N., Potter M., Faaberg K., Hesse R., Rowland R. R. R. Antibody recognition of porcine circovirus type 2 capsid protein epitopes after vaccination, infection, and disease. Clinical and Vaccine Immunology. 2011; 18 (5): 749–757. https://journals.asm.org/doi/10.1128/cvi.00418-10Khayat R., Brunn N., Speir J. A., Hardham J. M., Ankenbauer R. G., Schneemann A., Johnson J. E. The 2.3-angstrom structure of porcine circovirus 2. Journal of Virology. 2011; 85 (15): 7856–7862. https://journals.asm.org/doi/abs/10.1128/jvi.00737-11Khayat R., Brunn N., Speir J. A., Hardham J. M., Ankenbauer R. G., Schneemann A., Johnson J. E. The 2.3-angstrom structure of porcine circovirus 2. Journal of Virology. 2011; 85 (15): 7856–7862. https://journals.asm.org/doi/abs/10.1128/jvi.00737-11Xi X., Mo X., Xiao Y., Yin B., Lv C., Wang Y., et al. Production of Escherichia coli-based virus-like particle vaccine against porcine circovirus type 2 challenge in piglets: Structure characterization and protective efficacy validation. Journal of Biotechnology. 2016; 223: 8–12. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.02.025Xi X., Mo X., Xiao Y., Yin B., Lv C., Wang Y., et al. Production of Escherichia coli-based virus-like particle vaccine against porcine circovirus type 2 challenge in piglets: Structure characterization and protective efficacy validation. Journal of Biotechnology. 2016; 223: 8–12. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.02.025Zhang C., Zhu S., Wei L., Yan X., Wang J., Quan R., et al. Recombinant flagellin-porcine circovirus type 2 cap fusion protein promotes protective immune responses in mice. PLoS ONE. 2015; 10 (6):e0129617. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0129617Zhang C., Zhu S., Wei L., Yan X., Wang J., Quan R., et al. Recombinant flagellin-porcine circovirus type 2 cap fusion protein promotes protective immune responses in mice. PLoS ONE. 2015; 10 (6):e0129617. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0129617Rai V., Upmanyu V., Mohd G., Kumar R., Koppad S., Ansari A., et al. Comparing the efficiency of different Escherichia coli strains in producing recombinant capsid protein of porcine circovirus type 2. Molecular and Cellular Probes. 2020; 52:101556. https://doi.org/10.1016/j.mcp.2020.101556Rai V., Upmanyu V., Mohd G., Kumar R., Koppad S., Ansari A., et al. Comparing the efficiency of different Escherichia coli strains in producing recombinant capsid protein of porcine circovirus type 2. Molecular and Cellular Probes. 2020; 52:101556. https://doi.org/10.1016/j.mcp.2020.101556

The authors declare that there are no conflicts of interest present.