<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE article PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.3 20210610//EN" "JATS-journalpublishing1-3.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.3" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xml:lang="ru"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">veterinary</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="ru">Ветеринария сегодня</journal-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Veterinary Science Today</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn pub-type="ppub">2304-196X</issn><issn pub-type="epub">2658-6959</issn><publisher><publisher-name>"Veinard"</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="doi">10.29326/2304-196X-2023-12-2-158-163</article-id><article-id custom-type="elpub" pub-id-type="custom">veterinary-731</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="heading"><subject>Research Article</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="ru"><subject>ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ | БИОТЕХНОЛОГИЯ</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="en"><subject>ORIGINAL ARTICLES | BIOTECHNOLOGY</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title>Разработка способа глубинного культивирования вакцинного штамма Mycoplasma mycoides subsp. mycoides</article-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Development of submerged cultivation method for vaccine Mycoplasma mycoides subsp. mycoides strain</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-4435-8368</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Лаптева</surname><given-names>О. Г.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Lapteva</surname><given-names>O. G.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Лаптева Оксана Георгиевна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник лаборатории «Лекарственные средства для животных»</p><p>601125, Владимирская обл., Петушинский р-н, пос. Вольгинский, ул. Академика Бакулова, стр. 1</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Oksana G. Lapteva, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Senior Researcher, Laboratory for Veterinary Medicinal Products</p><p>601125, Vladimir Oblast, Petushinsky District, Volginsky, ul. Akademika Bakulova, str. 1</p></bio><email xlink:type="simple">oksana-lapteva@rambler.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff-1"><aff xml:lang="ru"><institution>ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии» (ФГБНУ ФИЦВиМ)</institution><country>Россия</country></aff><aff xml:lang="en"><institution>Federal Research Center for Virology and Microbiology (FRCVM)</institution><country>Russian Federation</country></aff></aff-alternatives><pub-date pub-type="collection"><year>2023</year></pub-date><pub-date pub-type="epub"><day>12</day><month>06</month><year>2023</year></pub-date><volume>12</volume><issue>2</issue><fpage>158</fpage><lpage>163</lpage><permissions><copyright-statement>Copyright &amp;#x00A9; Лаптева О.Г., 2023</copyright-statement><copyright-year>2023</copyright-year><copyright-holder xml:lang="ru">Лаптева О.Г.</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="en">Lapteva O.G.</copyright-holder><license xml:lang="ru" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.</license-p></license><license xml:lang="en" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.</license-p></license></permissions><self-uri xlink:href="https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/731">https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/731</self-uri><abstract><p>Представители рода Mycоplasma широко распространены в природе (почве, воде, навозе, злаках, пищевых продуктах), среди них имеются виды, патогенные для человека, животных и птиц. К группе особо опасных инфекционных болезней отнесена контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота, возбудителем которой является Mycoplasma mycoides subsp. mycoides. В настоящее время риск заноса возбудителя инфекции на территорию России с импортным скотом и сырьем из неблагополучных регионов сохраняется. В связи с этим совершенствование технологии изготовления вакцины против контагиозной плевропневмонии является актуальной задачей. Целью данного исследования явилась разработка глубинного способа культивирования вакцинного штамма Mycoplasma mycoides subsp. mycoides. Данный метод позволяет получать за короткий промежуток биомассу в больших объемах и упрощает технологию изготовления биопрепаратов. В процессе работы изучена динамика накопления биомассы микоплазмы при безопорном методе культивирования. Наглядно продемонстрированы 4 фазы роста бактерии. В первые двое суток выращивания отмечали незначительное снижение концентрации микробных клеток, третьи – четвертые сутки характеризовались увеличением биомассы на несколько порядков от 2,5 × 108 до 4,5 × 109 клеток в единице объема, на 5-е сутки концентрация находилась в равновесном положении, и начиная с 6-х суток регистрировали наступление фазы гибели микроорганизма. Аналогичная динамика прослеживалась и при культивировании в биореакторе. При визуализации микоплазмы, полученной при выращивании глубинным способом, на твердой питательной среде наблюдали единичные колонии или их скопления, имеющие вид яичницы-глазуньи. Таким образом, используя безопорный метод культивирования и такие параметры, как засев микоплазмы в дозе 105  микробных клеток в единице объема, объем заполнения на 2/3, температура инкубирования (37 ± 0,5) °С, перемешивание при 90 об/мин, а также применение синтетической питательной среды бактерия накапливается в титре 109  клеток в единице объема.</p></abstract><trans-abstract xml:lang="en"><p>Membersof Mycоplasmagenusare widely spreadin nature (soil, water, manure, cereals, foodproducts), andthereareonespathogenic for humans, animals andbirds. Thegroupof highlydangerousdiseases includecontagiousbovinepleuropneumonia (CBPP) causedby Mycoplasma mycoides subsp. mycoides. Risk of the disease agent introduction to Russia with imported livestock and raw materials still remains. Therefore, of topical importance is the improvement of theCBPPvaccinemanufacturingtechnology. Thestudies wereaimedat thedevelopmentof themethodof thesubmergedcultivation of thevaccineMycoplasma mycoides subsp. mycoides strain. This methodallowsproduction of a large amountof thebiological material andsimplification of thebiologicalproduct manufacturingtechnology. Dynamicsof themycoplasmamassaccumulation duringthesubmergedcultivation wasexamined within thestudies. Fourphases of thebacterialgrowth wereclearlydemonstrated. Insignificantdecreaseof the microbial cell concentration was reportedin the first twodaysof cultivation; days 3 and 4 were specified by the increase of the microbial mass concentration by several orders of magnitude: from 2.5 × 108 to 4.5 × 109 cells/volume unit, on day 5 the concentration was in equilibrium and starting from day 6 the onset of the microorganism’s death phase was reported. Similar dynamics wasdemonstratedduringcultivation in thebioreactors. Singular friedegg-shapedcoloniesor their accumulations wereobservedat the visual examination of the submerged cultivated mycoplasma. Therefore, when using submerged cultivation method and such parameters as mycoplasma seeding at a dose of 105 microbial cells / volume unit; 2/3 filling volume; incubation at (37 ± 0.5) °С; agitation at 90 rpm and use of synthetic nutrient medium, the bacterium accumulatesat thetitreof 109 cell/volumeunit.</p></trans-abstract><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>Mycoplasma mycoides subsp. mycoides</kwd><kwd>контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота</kwd><kwd>культивирование</kwd><kwd>фазы роста</kwd></kwd-group><kwd-group xml:lang="en"><kwd>Mycoplasma mycoides subsp. mycoides</kwd><kwd>contagious bovine pleuropneumonia</kwd><kwd>cultivation</kwd><kwd>growth phases</kwd></kwd-group><funding-group><funding-statement xml:lang="ru">Автор выражает признательность заместителю директора по производству и качеству биопрепаратов (ФГБНУ ФИЦВиМ) А. В. Луницину.  Работа выполнена в рамках государственного задания.</funding-statement><funding-statement xml:lang="en">The author expresses gratitude to A. V. Lunitsyn, Deputy Head for Biological Product Manufacture and Quality (FGBRI FRCVM). The works  have been completed under the state assignment.</funding-statement></funding-group></article-meta></front><back><ref-list><title>References</title><ref id="cit1"><label>1</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Медведев А. П., Вербицкий А. А. Основы получения противобактериальных вакцин и сывороток: монография. Витебск: ВГАВМ; 2010. 196 с.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Medvedev А. P., Verbitsky A. A. Basics of antibacterial vaccine and serum production: monograph. Vitebsk: VSAVM; 2010. 196 p. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit2"><label>2</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Фирсова М. С., Евграфова В. А., Потехин А. В. Подбор питательной среды и оптимизация режима глубинного культивирования Avibacterium paragallinarum. Ветеринария сегодня. 2019; (2): 12–16. DOI: 10.29326/2304-196X-2019-2-29-12-16.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Firsova M. S., Yevgrafova V. A., Potekhin A. V. Nutrient medium selection and optimization of Avibacterium paragallinarum deep culture method. Veterinary Science Today. 2019; (2): 12–16. DOI: 10.29326/2304-196X-2019-2-29-12-16.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit3"><label>3</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Шепелев И. А., Волох О. А., Еремин С. А., Авдеева Н. Г., Кузнецова Е. М. Способ получения биомассы туляремийного микроба. Патент № 2451743 Российская Федерация, МПК C12N 1/20 (2006.01), C12R 1/00 (2006.01). «РосНИПЧИ «Микроб». № 2010131275/10. Заявл. 26.07.2010. Опубл. 27.05.2012. Бюл. № 15. Режим доступа: https://patentimages.storage.googleapis.com/27/d7/d2/cc31eed5004cbb/RU2451743C2.pdf.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Shepelev I. A., Volokh O. A., Eremin S. A., Avdeeva N. G., Kuznetsova E. M. Method of producing tularemic microbe biomass. Patent No. 2451743 Russian Federation, Int.  Cl.  C12N  1/20  (2006.01), C12R  1/00  (2006.01). “RosNIPChI “Mikrob”. No. 2010131275/10. Date of filing: 26.07.2010. Date of publication: 27.05.2012. Bull. No. 15. Available at: https://patentimages.storage.googleapis.com/27/d7/d2/cc31eed5004cbb/RU2451743C2.pdf. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit4"><label>4</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Лиморенко А. П. Разработка технологии глубинного способа культивирования микроорганизмов B. subtilis и B. licheniformis для производства пробиотиков: дис. … канд. биол. наук. М.; 2002. 149 с.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Limorenko А. P. Development of B. subtilis and B. licheniformis submerged cultivation technique for production of probiotics: Author’s Thesis for degree of Candidate of Science (Biology). Moscow; 2002. 149 p. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit5"><label>5</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Панкратова Н. А., Табакова Д. А., Гусева Е. В. Исследование процесса культивирования Е. coli в реакторе периодического действия. Успехи в химии и химической технологии. 2017; 31 (9): 32–33. EDN: ZTMGJD.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Pankratova N. A., Tabakova D. A., Guseva E. V. Investigation of E. coli cultivation in batch bioreactor. Advances in Chemistry and Chemical Technology. 2017; 31 (9): 32–33. EDN: ZTMGJD. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit6"><label>6</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Bonnet M., Lagier J. C., Raoult D., Khelaifia S. Bacterial culture through selective and non-selective conditions: the evolution of culture media in clinical microbiology. New Microbes New Infect. 2019; 34:100622. DOI: 10.1016/j.nmni.2019.100622.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Bonnet  M., Lagier  J.  C., Raoult  D., Khelaifia  S. Bacterial culture through selective and non-selective conditions: the evolution of culture media in clinical microbiology. New Microbes New Infect. 2019; 34:100622. DOI: 10.1016/j.nmni.2019.100622.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit7"><label>7</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">March J. B., Clark J., Brodlie M. Characterization of strains of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides small colony type isolated from recent outbreaks of contagious bovine pleuropneumonia in Botswana and Tanzania: evidence for a new biotype. J. Clin. Microbiol. 2000; 38 (4): 1419–1425. DOI: 10.1128/JCM.38.4.1419-1425.2000.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">March J. B., Clark J., Brodlie M. Characterization of strains of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides small colony type isolated from recent outbreaks of contagious bovine pleuropneumonia in Botswana and Tanzania: evidence for a new biotype. J.  Clin. Microbiol. 2000; 38 (4): 1419–1425. DOI: 10.1128/JCM.38.4.1419-1425.2000.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit8"><label>8</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Козлов Д. А., Волков М. С., Черняева Т. Ю., Сорокина М. И., Ирза В. Н. Влияние сыворотки крови крупного рогатого скота на ростовые свойства питательной среды для культивирования Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae. Ветеринария сегодня. 2022; 11 (2): 156–162. DOI: 10.29326/2304-196X-2022-11-2-156-162.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Kozlov D. A., Volkov M. S., Chernyayeva T. Yu., Sorokina M. I., Irza V. N. Influence of bovine blood serum on growth properties of nutrient media for Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae cultivation. Veterinary Science Today. 2022; 11 (2): 156–162. DOI: 10.29326/2304-196X-2022-11-2-156-162.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit9"><label>9</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Орлова С. Т., Сидорчук А. А., Гребенникова Т. В. Культивирование микоплазм – ретроспектива и перспективы. Российский ветеринарный журнал. 2018; (5): 6–13. DOI: 10.32416/article_5d1caf6645a4b1.87344381.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Orlova S. T., Sidorchuk A. A., Grebennikova T. V. Cultivation of mycoplasmas – a retrospective and prospects. Russian veterinary journal. 2018; (5): 6–13. DOI: 10.32416/article_5d1caf6645a4b1.87344381. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit10"><label>10</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Суханова С. М., Бердникова З. Е., Тихонова А. С. Совершенствование методики оценки качества питательной среды для выявления микоплазм. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2019; 19 (3): 161–168. DOI: 10.30895/2221-996X-2019-19-3-161-168.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Sukhanova  S.  M., Berdnikova  Z.  E., Tikhonova  A.  S. Ways to improve quality control of culture medium used for Mycoplasma detection. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2019; 19 (3): 161–168. DOI: 10.30895/2221-996X-2019-19-3-161-168. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit11"><label>11</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Бессарабов Б. Ф., Вашутин А. А., Воронин Е. С. и др. Инфекционные болезни животных. Под ред. А. А. Сидорчука. М.: КолосC; 2007. 671 с.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Bessarabov B. F., Vashutin A. A., Voronin Ye. S., et al. Infectious animal diseases. Ed. by A. A. Sidorchuk. Мoscow: KolosS; 2007. 671 p. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit12"><label>12</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Amanfu W. Contagious bovine pleuropneumonia (lungsickness) in Africa. Onderstepoort J. Vet. Res. 2009; 76 (1): 13–17. DOI: 10.4102/ojvr.v76i1.55.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Amanfu W. Contagious bovine pleuropneumonia (lung sickness) in Africa. Onderstepoort J. Vet. Res. 2009; 76 (1): 13–17. DOI: 10.4102/ojvr.v76i1.55.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit13"><label>13</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Di Teodoro G., Marruchella G., Di Provvido A., D’Angelo A. R., Orsini G., Di Giuseppe P., et al. Contagious bovine pleuropneumonia: a comprehensive overview. Vet. Pathol. 2020; 57 (4): 476–489. DOI: 10.1177/0300985820921818.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Di  Teodoro  G., Marruchella  G., Di  Provvido  A., D’Angelo  A.  R., Orsini  G., Di  Giuseppe  P.,  et  al. Contagious bovine pleuropneumonia: a comprehensive overview. Vet. Pathol. 2020; 57  (4):  476–489. DOI: 10.1177/0300985820921818.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit14"><label>14</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Karimuribo E. D., Kambarage D. M., Lema B., Kazwala R. R., Mtambo M. M. A., Kusiluka L. J. M. Factors influencing the effective control of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP) in Tanzania. Tanzania Veterinary Journal. 1997; 17 (3): 195–206.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Karimuribo E. D., Kambarage D. M., Lema B., Kazwala R. R., Mtambo M. M. A., Kusiluka L. J. M. Factors influencing the effective control of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP) in Tanzania. Tanzania Veterinary Journal. 1997; 17 (3): 195–206.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit15"><label>15</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Tambi N. E., Maina W. O., Ndi C. L. An estimation of the economic impact of contagious bovine pleuropneumonia in Africa. Rev. Sci. Tech. 2006; 25 (3): 999–1011. DOI: 10.20506/rst.25.3.1710.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Tambi N. E., Maina W. O., Ndi C. An estimation of the economic impact of contagious bovine pleuropneumonia in Africa. Rev. Sci. Tech. 2006; 25 (3): 999–1011. DOI: 10.20506/rst.25.3.1710.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit16"><label>16</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Alhaji N. B., Ankeli P. I., Ikpa L. T., Babalobi O. O. Contagious bovine pleuropneumonia: challenges and prospects regarding diagnosis and controlstrategiesin Africa. VeterinaryMedicine: Research and Reports. 2020; 11: 71–85. DOI: 10.2147/VMRR.S180025.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Alhaji N. B., Ankeli P. I., Ikpa L. T., Babalobi O. O. Contagious bovine pleuropneumonia: challenges and prospects regarding diagnosis and control strategies in Africa. Vet. Med (Auckl.). 2020; 11: 71–85. DOI: 10.2147/VMRR.S180025.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit17"><label>17</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Пискунов А. В., Кононов А. В., Мищенко А. В. Проблема контагиозной плевропневмонии крупного рогатого скота. Ветеринария сегодня. 2016; (3): 27–36.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Piskunov A. V., Kononov A. V., Mischenko A. V. Problem of contagious bovine pleuropneumonia. Veterinary Science Today. 2016; (3): 27–36. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit18"><label>18</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">WOAH. Infection with Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC (contagious bovine pleuropneumonia). Chapter 11.5. Режим доступа: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals/terrestrial-code-online-access/?id=169&amp;L=1&amp;htmfile=chapitre_mycoplasma_mycoides.htm.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">WOAH. Infection with Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC (contagious bovine pleuropneumonia). Chapter 11.5. Available at: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals/terrestrial-code-online-access/?id=169&amp;L=1&amp;htmfile=chapitre_mycoplasma_mycoides.htm.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit19"><label>19</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Сергеев В. А. Репродукция и выращивание вирусов животных. М.: Колос; 1976. 303 с.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Sergeev V. А. Reproduction and cultivation of animal viruses. Moscow: Kolos; 1976. 303 p. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit20"><label>20</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Медведев А. П., Вербицкий А. А., Асташонок Ю. О., Огурцова К. А. Динамика накопления бакмассы сальмонелл при их глубинном культивировании. Ветеринарный журнал Беларуси. 2018; 1 (8): 9–11. Режим доступа: https://repo.vsavm.by/bitstream/123456789/5113/1/j-2018-1-9-11.pdf.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Medvedev A. P., Viarbitski A. A., Astaschonok Y. O., Ogurchova K. A. The dynamics of Salmonella accumulation during in-depth cultivation. Veterinarnyi zhurnal Belarusi. 2018; 1 (8): 9–11. Available at: https://repo.vsavm.by/bitstream/123456789/5113/1/j-2018-1-9-11.pdf. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit21"><label>21</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Самуйленко А. Я., Рубан Е. А. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов: в 2 т. М.: ВНИТИБП; 2000. 782 с</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Samuylenko A. Ya., Ruban E. A. Basics of veterinary biologicals production technology: in 2 vol. Moscow: VNITIBP; 2000. 782 р. (in Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list><fn-group><fn fn-type="conflict"><p>The authors declare that there are no conflicts of interest present.</p></fn></fn-group></back></article>
