veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2023-12-1-23-28veterinary-705Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ | БИОТЕХНОЛОГИЯORIGINAL ARTICLES | BIOTECHNOLOGYИзучение культуральных свойств изолята возбудителя коронавирусного энтерита собак в различных культурах клетокStudy of cultural properties of canine enteric coronavirus isolate in different cell cultureshttps://orcid.org/0000-0002-1876-2025КомароваА. А.KomarovaA. A.

Комарова Анна Александровна, аспирант, ведущий ветеринарный врач отдела профилактики болезней мелких домашних животных

г. Владимир

Anna A. Komarova, Post-Graduate Student, Leading Veterinarian, Department for Pet Disease Prevention

Vladimir

komarova_aa@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9494-8537ГалкинаТ. С.GalkinaT. S.

Галкина Татьяна Сергеевна, кандидат ветеринарных наук, заведующий отделом профилактики болезней мелких домашних животных

г. Владимир

Tatyana S. Galkina, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Head of Department for Pet Disease Prevention

Vladimir

galkina_ts@arriah.ruФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)РоссияFGBI “Federal Centre for Animal Health” (FGBI “ARRIAH”)Russian Federation2023240320231212328Copyright © Комарова А.А., Галкина Т.С., 20232023Комарова А.А., Галкина Т.С.Komarova A.A., Galkina T.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/705

Этиология заболеваний, сопровождающихся поражением желудочно-кишечного тракта у собак, многообразна. Вторым наиболее распространенным у собак энтеропатогеном вирусной природы в мире после парвовируса является коронавирус CCoV. Обширные исследования, проведенные учеными из разных стран, доказывают повсеместное распространение коронавирусной инфекции в популяции собак. В связи с этим не теряют актуальности вопросы профилактики данного заболевания, в первую очередь изготовление эффективных иммунобиологических препаратов, обеспечивающих надежную защиту от данной инфекции. Целью настоящей работы являлось изучение культуральных свойств изолята CCoV, выбор наиболее подходящей для его репродукции клеточной системы и оптимизация параметров культивирования вируса в чувствительных клеточных линиях. В опытах использовали изолят CCoV, выделенный из патологического материала, полученного от погибшего щенка с симптомами энтерита. В ходе исследований было испытано семь перевиваемых и две первично трипсинизированные культуры клеток и установлено, что наиболее чувствительной клеточной системой для репродукции данного изолята является перевиваемая культура клеток почки кошки CRFK, в которой на 2-е сут культивирования отмечалось характерное цитопатическое действие. Титр инфекционной активности вируса в данной культуре был на уровне 3,58 ± 0,14 lg ТЦД50/см3 . Определено, что такие клеточные линии, как перевиваемая культура клеток селезенки кошки (FS) и первично трипсинизированная культура клеток селезенки котенка (СК), также чувствительны к изоляту CCoV, но в меньшей степени, чем CRFK. Также в ходе опытов изучалось влияние на накопление коронавируса таких показателей, как множественность заражения, время культивирования, способ заражения, срок предварительного контакта (адсорбции) вируса с культурой клеток и возраст клеточной системы для некоторых выбранных культур клеток. Сделан вывод, что линии клеток CRFK и FS могут быть использованы для получения вирусного материала с целью разработки средств диагностики и специфической профилактики коронавирусного энтерита собак.

The etiology of the diseases affecting gastrointestinal tractofdogs is variable. The second most important enteric viral pathogen in the world after parvovirus is coronavirus (CCoV). Vast studies by scientists from different countries evidence the ubiquitous spread of coronavirus infection in dog populations. In this regard, the prevention of this disease is still an acute problem; firstly this means the development of effective vaccines, which can provide are liable protection from the infection. The aim of this work was to study the CCoV isolate cultural properties, the selection of cell cultures most suitable for its reproduction and optimization of virus cultivation parameters in sensitive cell lines. TheCCoV isolate recovered from the pathological material of a dead puppy with enteritis symptoms was used in the study. Seven continuousandtwoprimarytrypsinizedcellculturesweretestedduringthestudyanditwasestablishedthat the most sensitive cell culture for the reproduction of this isolate was continuous Crandell-Rees Feline Kidney Cells (CRFK) in which atypical cytopathic effect was notedon Day 2 of the cultivation. Virus infectivity titer in this culture was 3.58 ± 0.14 lgTCID50/cm3 . It was established that such cell linesas fel in espleen cells (FS) and primary trypsinized kitten spleen cells (KS) are also sensitive to the CCoV isolate but less than CRFK cells. Effect of such parameters as multiplicity of infection, cultivation time, inoculation technique, adsorption period and cell lineag eon coronavirus growth rate was studiedfor some selected cell cultures. It was concluded that CRFK and FS cells can be used for the propagation of viral material to develop diagnostic tools and vaccines against canineenteric coronavirus.

коронавирус собак (CCoV)коронавирусный энтерит собаккишечные инфекции собаккультивирование вирусовперевиваемые культуры клетокпервично трипсинизированные культуры клетокcanine coronavirus (CCoV)canine enteric coronaviruscanine intestinal infectionsvirus culturecontinuous cell linesprimary trypsinized cellsReferencesAlves C. D. B. T., Granados O. F. O., Budaszewski R. D. F., Streck A. F., Weber M. N., Cibulski S. P., et al. Identification of enteric viruses circulating in a dog population with low vaccine coverage. Braz. J. Microbiol. 2018; 49 (4): 790–794. DOI: 10.1016/j.bjm.2018.02.006.Alves C. D. B. T., Granados O. F. O., Budaszewski R. D. F., Streck A. F., Weber M. N., Cibulski S. P., et al. Identification of enteric viruses circulating in a dog population with low vaccine coverage. Braz. J. Microbiol. 2018; 49 (4): 790–794. DOI: 10.1016/j.bjm.2018.02.006.McElligott S., Collins P. J., Sleator R. D., Martella V., Decaro N., Buonavoglia C., O’Shea H. Detection and genetic characterization of canine parvoviruses and coronaviruses in southern Ireland. Arch. Virol. 2011; 156 (3): 495–503. DOI: 10.1007/s00705-010-0861-3.McElligott S., Collins P. J., Sleator R. D., Martella V., Decaro N., Buonavoglia C., O’Shea H. Detection and genetic characterization of canine parvoviruses and coronaviruses in southern Ireland. Arch. Virol. 2011; 156 (3): 495–503. DOI: 10.1007/s00705-010-0861-3.Decaro N., Desario C., Billi M., Mari V., Elia G., Cavalli A., et al. Western European epidemiologicalsurvey for parvovirus and coronavirusinfections in dogs. Vet. J. 2011; 187 (2): 195–199. DOI: 10.1016/j.tvjl.2009.10.027.Decaro N., Desario C., Billi M., Mari V., Elia G., Cavalli A., et al. Western European epidemiologicalsurvey for parvovirus and coronavirusinfections in dogs. Vet. J. 2011; 187 (2): 195–199. DOI: 10.1016/j.tvjl.2009.10.027.Decaro N., Buonavoglia C. An update on canine coronaviruses: viral evolution and pathobiology. Vet. Microbiol. 2008; 132 (3–4): 221–234. DOI: 10.1016/j.vetmic.2008.06.007.Decaro N., Buonavoglia C. An update on canine coronaviruses: viral evolution and pathobiology. Vet. Microbiol. 2008; 132 (3–4): 221–234. DOI: 10.1016/j.vetmic.2008.06.007.MaG. G., Lu C. P. Two genotypes of canine coronavirussimultaneously detected in the fecalsamples of healthy foxes and raccoon dogs. Wei Sheng Wu Xue Bao. 2005; 45 (2): 305–308. PMID: 15989282. (in Chinese)MaG. G., Lu C. P. Two genotypes of canine coronavirussimultaneously detected in the fecalsamples of healthy foxes and raccoon dogs. Wei Sheng Wu Xue Bao. 2005; 45 (2): 305–308. PMID: 15989282. (in Chinese)Rosa G. M., Santos N., Grøndahl-Rosado R., Fonseca F. P., Tavares L., Neto I., et al. Unveiling patterns of viral pathogen infection in free-ranging carnivores of northern Portugal using a complementary methodological approach. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2020; 69:101432. DOI: 10.1016/j.cimid.2020.101432.Rosa G. M., Santos N., Grøndahl-Rosado R., Fonseca F. P., Tavares L., Neto I., et al. Unveiling patterns of viral pathogen infection in free-ranging carnivores of northern Portugal using a complementary methodological approach. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2020; 69:101432. DOI: 10.1016/j.cimid.2020.101432.Zarnke R. L., Evermann J., Ver Hoef J. M., McNay M. E., Boertje R. D., Gardner C. L., et al. Serologic survey for canine coronavirus in wolves from Alaska. J. Wildl. Dis. 2001; 37 (4): 740–745. DOI: 10.7589/0090-3558-37.4.740.Zarnke R. L., Evermann J., Ver Hoef J. M., McNay M. E., Boertje R. D., Gardner C. L., et al. Serologic survey for canine coronavirus in wolves from Alaska. J. Wildl. Dis. 2001; 37 (4): 740–745. DOI: 10.7589/0090-3558-37.4.740.Sanchez-Morgado J. M., Poynter S., Morris T. H. Molecular characterization of a virulent canine coronavirus BGF strain. Virus Res. 2004; 104 (1): 27–31. DOI: 10.1016/j.virusres.2004.02.038.Sanchez-Morgado J. M., Poynter S., Morris T. H. Molecular characterization of a virulent canine coronavirus BGF strain. Virus Res. 2004; 104 (1): 27–31. DOI: 10.1016/j.virusres.2004.02.038.Evermann J. F., Abbott J. R., Han S. Canine coronavirus-associated puppy mortality without evidence of concurrent canine parvovirus infection. J. Vet. Diagn. Invest. 2005; 17 (6): 610–614. DOI: 10.1177/1040638705 01700618.Evermann J. F., Abbott J. R., Han S. Canine coronavirus-associated puppy mortality without evidence of concurrent canine parvovirus infection. J. Vet. Diagn. Invest. 2005; 17 (6): 610–614. DOI: 10.1177/1040638705 01700618.Escutenaire S., Isaksson M., Renström L. H., Klingeborn B., Buonavoglia C., Berg M., et al. Characterization of divergent and atypical canine coronaviruses from Sweden. Arch. Virol. 2007; 152 (8): 1507–1514. DOI: 10.1007/s00705-007-0986-1.Escutenaire S., Isaksson M., Renström L. H., Klingeborn B., Buonavoglia C., Berg M., et al. Characterization of divergent and atypical canine coronaviruses from Sweden. Arch. Virol. 2007; 152 (8): 1507–1514. DOI: 10.1007/s00705-007-0986-1.Buonavoglia C., Decaro N., Martella V., Elia G., Campolo M., Desario C., et al. Canine coronavirus highly pathogenic for dogs. Emerg. Infect. Dis. 2006; 12 (3): 492–494. DOI: 10.3201/eid1203.050839.Buonavoglia C., Decaro N., Martella V., Elia G., Campolo M., Desario C., et al. Canine coronavirus highly pathogenic for dogs. Emerg. Infect. Dis. 2006; 12 (3): 492–494. DOI: 10.3201/eid1203.050839.Zicola A., Jolly S., Mathijs E., Ziant D., Decaro N., Mari V., Thiry E. Fatal outbreaks in dogs associated with pantropic canine coronavirus in France and Belgium. J. SmallAnim. Pract. 2012; 53 (5): 297–300. DOI: 10.1111/j.1748- 5827.2011.01178.x.Zicola A., Jolly S., Mathijs E., Ziant D., Decaro N., Mari V., Thiry E. Fatal outbreaks in dogs associated with pantropic canine coronavirus in France and Belgium. J. SmallAnim. Pract. 2012; 53 (5): 297–300. DOI: 10.1111/j.1748- 5827.2011.01178.x.Ntafis V., Mari V., Danika S., Fragkiadaki E., Buonavoglia C. An outbreak of canine coronavirusin puppiesin aGreek kennel. J. Vet. Diagn. Invest. 2010; 22 (2): 320–323. DOI: 10.1177/104063871002200231.Ntafis V., Mari V., Danika S., Fragkiadaki E., Buonavoglia C. An outbreak of canine coronavirusin puppiesin aGreek kennel. J. Vet. Diagn. Invest. 2010; 22 (2): 320–323. DOI: 10.1177/104063871002200231.Radford A. D., Singleton D. A., Jewell C., Appleton C., Rowlingson B., Hale A. C., et al. Outbreak of severe vomiting in dogs associated with a canine enteric coronavirus, United Kingdom. Emerg. Infect. Dis. 2021; 27 (2): 517–528. DOI: 10.3201/eid2702.202452.Radford A. D., Singleton D. A., Jewell C., Appleton C., Rowlingson B., Hale A. C., et al. Outbreak of severe vomiting in dogs associated with a canine enteric coronavirus, United Kingdom. Emerg. Infect. Dis. 2021; 27 (2): 517–528. DOI: 10.3201/eid2702.202452.Collins M., Singleton D. A., Noble P. J. M., Pinchbeck G. L., Smith S., Brant B., et al. Small animal disease surveillance 2020/21: SARS-CoV-2, syndromic surveillance and an outbreak of acute vomiting in UK dogs. Vet. Rec. 2021; 188 (8):304. DOI: 10.1002/vetr.427.Collins M., Singleton D. A., Noble P. J. M., Pinchbeck G. L., Smith S., Brant B., et al. Small animal disease surveillance 2020/21: SARS-CoV-2, syndromic surveillance and an outbreak of acute vomiting in UK dogs. Vet. Rec. 2021; 188 (8):304. DOI: 10.1002/vetr.427.Pratelli A., Elia G., Martella V., Tinelli A., Decaro N., Marsilio F., et al. M gene evolution of canine coronavirusin naturally infected dogs. Vet. Rec. 2002; 151 (25): 758–761. PMID: 12521247.Pratelli A., Elia G., Martella V., Tinelli A., Decaro N., Marsilio F., et al. M gene evolution of canine coronavirusin naturally infected dogs. Vet. Rec. 2002; 151 (25): 758–761. PMID: 12521247.Wang X., Li C., Guo D., Wang X., Wei S., Geng Y., et al. Co-circulation of canine coronavirusI and IIa/b with high prevalence and genetic diversity inHeilongjiang Province, Northeast China. PLoSOne. 2016; 11 (1):e0146975. DOI: 10.1371/journal.pone.0146975.Wang X., Li C., Guo D., Wang X., Wei S., Geng Y., et al. Co-circulation of canine coronavirusI and IIa/b with high prevalence and genetic diversity inHeilongjiang Province, Northeast China. PLoSOne. 2016; 11 (1):e0146975. DOI: 10.1371/journal.pone.0146975.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.