Манин Борис Леонидович, кандидат биологических наук
г. Владимир
Boris L. Manin, Candidate of Science (Biology)
Vladimir
Трофимова Елена Александровна, заведующий сектором отдела культуры клеток
г. Владимир
Elena A. Trofimova, Head of Sector, Cell Cultivation Unit
Vladimir
Гаврилова Вера Львовна, кандидат биологических наук, научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней
г. Владимир
Vera L. Gavrilova, Candidate of Science (Biology), Reference Laboratory for African Swine Fever
Vladimir
Пузанкова Ольга Сергеевна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней
г. Владимир
Olga S. Puzankova, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Senior Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever
Vladimir
Основным преимуществом постоянных линий клеток по сравнению с первичными является возможность наработки стабильного материала, пригодного для продолжительного использования в научно-исследовательских и практических целях. Поэтому важное прикладное значение имеет получение новых перевиваемых культур клеток из разнообразных тканей животных. В статье отражены результаты изучения биологических, цитоморфологических и кариологических особенностей постоянных линий клеток, полученных из органов домашней свиньи (Sus scrofa L.), подтверждена чувствительность данных культур к различным вирусам животных, а также описан процесс получения новой диплоидной культуры клеток из селезенки свиньи (SSs – Splеn Sus scrofa). При анализе полученных данных пришли к выводу, что полноценной иммортализации подвергаются эпителиальные клетки, полученные из почек свиньи после трипсинизации. Все постоянные линии клеток свиного происхождения имеют схожую морфологию с преобладанием эпителиоподобных форм. Некоторые из них – СПЭВ, А4 С2 , RSK – имеют тенденцию переживания сферической формы в суспензии. Такие клеточные линии, как ПСГК-30 и ППЭС, формируют частичный полислой либо для них характерно значительное уплотнение монослоя с образованием псевдосинцития. Только одна псевдодиплоидная клеточная культура СПЭВ имеет тенденцию к росту в суспензии, она также растет во вращающихся культуральных флаконах. Кариологические трансформации у разных культур стабилизировались на определенном уровне. Спонтанное увеличение количества хромосом в основной популяции постоянных линий клеток в сторону триплоидии привело к стабилизации культуральных свойств и увеличению пролиферации. Наивысший модальный класс – 64 хромосомы – имеет культура ПСГК-30. Околодиплоидные культуры (А4 С2 , RSK) характеризуются стабильными ростовыми параметрами и показывают сходство с культурой СПЭВ в отношении формирования переживающих сферических клеток в среде, качества монослоя и морфологии клеток. Наиболее пластичной клеточной линией оказалась РК-15, которая в разных условиях культивирования имеет отличительный кариотип при сохранении остальных культуральных свойств. В условиях лаборатории ФГБУ «ВНИИЗЖ» в результате длительного инкубирования, субкультивирования (свыше 80 пассажей) и отбора была получена новая постоянная диплоидная культура клеток SSs, которая при проведении дальнейших пассажей может остаться диплоидной или спонтанно стать гетероплоидной – иммортализованной. Велика вероятность того, что впоследствии гиперплоидность клеток спровоцирует увеличение теломеразной активности, что, в свою очередь, стабилизирует иммортализацию и приведет к увеличению пролиферативной активности. До настоящего времени жизнеспособность клеток поддерживается путем регулярных пересевов (коэффициент пересева – 1:2–1:3), осуществляемых 1–2 раза в неделю.
The main advantage of transformed cell lines as compared to primary ones is that they allow generation of the stable material suitable for long-term research and practical use. Therefore, development of new continuous cell cultures from various animal tissues is of great practical importance. Results of examination of transformed cell lines derived from organs of domestic pigs (Sus scrofa L.) for their biological, cytomorphological and karyological features are described in the paper. The said cell cultures are confirmed to be susceptible to various animal viruses. Also, a procedure for preparation of new diploid cell culture from porcine spleen (SSs – Splеen Sus scrofa) is described. Based on the obtained data analysis it was concluded that the epithelial cells derived from trypsinized porcine spleens could be successfully immortalized. All transformed cell lines of porcine origin have similar morphology with predominated epithelium-like forms. Some of them – SPEV, А4 С2 , RSK – tend to adopt a spherical shape in suspension. Such cell lines as PSGK-30 and PPES cell lines form partial multilayer or they are characterized by significant monolayer compaction with pseudosyncytium formation. Only pseudodiploid cell culture (SPEV cell culture) tends to grow in suspension, it also grows in rotating culture flasks. Karyological transformations in different cell cultures stabilized at certain level. Spontaneous increase in chromosome numbers in the main population of transformed cell lines towards triploidy resulted in stabilization of culture properties and increase in proliferation. PSGK-30 cell culture has the highest modal class – 64 chromosomes. Near-diploid cultures (А4 С2 , RSK) demonstrate stable growth properties and are similar to SPEV cell culture in adopting spherical cell forms in medium, monolayer character and cell morphology. PK-15 cell culture having a distinct karyotype under different cultivation conditions while retaining other culture properties is found to be the most adaptive. A new transformed diploid SSs cell culture is developed by long-term incubation, subcultivation (more than 80 passages) and selection at the FGBI “ARRIAH” laboratory; it can remain diploid or may spontaneously become heteroploid-immortalized during further passaging. The cell hyperploidy is very likely to enhance telomerase activity, which in turn stabilizes immortalization and results in proliferative activity increase The cell viability has been maintained so far by regular reseedings (split ratio – 1:2–1:3) performed 1–2 times a week.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.