Микоплазмы – бактерии, лишенные ригидной клеточной стенки, поэтому крайне неустойчивы in vitro. Чаще всего их выявляют в ассоциации с другими возбудителями, среди которых есть те, что способны образовывать L-форму под действием антибиотических препаратов. Микоплазменные колонии, так же как и колонии L-форм, имеют вид «яичницы-глазуньи», поэтому для точного диагноза и выбора направления лечения необходимо провести их дифференциацию. В статье приведены данные о диагностике микоплазменной инфекции у крупного рогатого скота и результаты дифференциации выделенных колоний микоплазм и колоний L-форм бактерий методом многократных пассажей и с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Для выполнения поставленных задач были отобраны 177 образцов от животных, имеющих клинические признаки микоплазмоза, из них 45 исследованы молекулярно-генетическим методом, 132 – бактериологическим. При этом ДНК микоплазмы была выявлена в 71,1% проб, специфичные колонии – в 3,8% образцов. Такие тесты биохимической идентификации микоплазм, как гидролиз аргинина, разжижение сыворотки крови, образование пленки и пятен, посев на среду с Твином-80, гемадсорбция и гемолиз эритроцитов, не дают объективную оценку видовой принад­лежности микоплазм, но, согласно полученным результатам, изолированный вид с наибольшей вероятностью относится к Mycoplasma dispar, являющейся патогенной для крупного рогатого скота. Несомненно, полимеразная цепная реакция в режиме реального времени – наиболее точный и быстрый метод диагностики микоплазмоза, но предварительный диагноз можно установить и бактериологически в течение 2–7 сут. Кроме того, при проведении микробиологических тестов возможно провести оценку антибиотикорезистентности изолированных микоплазм, тем самым разработать оптимальную и качественную схему лечения и профилактики заболевания.