Першин Андрей Сергеевич - кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
Владимир.
Andrey S. Pershin - Candidate of Science (Veterinary Medicine), Senior Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
Vladimir.
Шевченко Иван Вячеславович - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
Владимир.
Ivan V. Shevchenko - Candidate of Science (Biology), Senior Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
Vladimir.
Комова Татьяна Николаевна - аспирант, сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
Владимир.
Tatiana N. Komova - Post-Graduate Student, Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
Vladimir.
Мазлум Али - кандидат биологических наук, научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
Владимир.
Ali Mazloum - Candidate of Science (Biology), Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
Vladimir.
Власова Наталья Никифоровна - доктор биологических наук, главный научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
Владимир.
Natalia N. Vlasova - Doctor of Science (Biology), Chief Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
Vladimir.
Морозова Елизавета Олеговна - аспирант, сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
Владимир.
Elizaveta O. Morozova - Post-Graduate Student, Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
Vladimir.
Иголкин Алексей Сергеевич - кандидат ветеринарных наук, заведующий референтной лабораторией по африканской чуме свиней ВНИИЗЖ.
600901, Владимир, мкр. Юрьевец.
Alexey S. Igolkin - Candidate of Science (Veterinary Medicine), Head of Reference Laboratory for African Swine Fever, ARRIAH.
600901, Vladimir, Yur’evets.
Груздев Константин Николаевич - доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник информационно-аналитического центра ВНИИЗЖ.
Владимир.
Konstantin N. Gruzdev - Doctor of Science (Biology), Professor, Chief Researcher, Information and Analysis Centre, ARRIAH.
Vladimir.
Панзоотия африканской чумы свиней продолжает свое распространение, а число пораженных стран и материальные потери увеличиваются. Так, в 2020–2021 гг. к перечню неблагополучных по африканской чуме свиней стран добавились Индия, Папуа – Новая Гвинея, Малайзия, Греция и Бутан. Борьбу с заболеванием затрудняет отсутствие коммерчески доступных и эффективных вакцин, что, в свою очередь, обуславливается недостатком знаний о патогенезе и иммунной защите при африканской чуме свиней. Детальное изучение факторов, влияющих на вирулентность вируса африканской чумы свиней и вызываемого им иммунного ответа, становится возможным при использовании его аттенуированных вариантов. Для этого применяют как естественно аттенуированные варианты вируса, так и варианты, аттенуированные в ходе длительного пассирования вируса на культурах клеток. Однако гетерогенность по признаку вирулентности, свойственная популяции вируса африканской чумы свиней, требует проведения дополнительного отбора инфицированных клеток с целью клонирования вируса. Классические культуральные методы клонирования вирусных частиц достаточно длительны и трудоемки, поэтому для отбора и клонирования инфицированных вирусом клеток с целью получения гомологичных вирусных линий целесообразно использовать сортировку клеток методом проточной цитометрии. В данной работе показаны результаты сортировки зараженных вирусом африканской чумы свиней клеток почки африканской зеленой мартышки CV-1 и костного мозга свиньи с помощью клеточного сортера MoFlo Astrios EQ в 96-луночные культуральные планшеты с целью получения популяции вируса, происходящего из одной зараженной клетки. После проведения сортировки инфицированных культур клеток по одной клетке в лунки 96-луночных планшетов частота обнаружения положительных на африканскую чуму свиней клеток в лунках составила 30% для клеток костного мозга свиньи и 20% – для CV-1.
The African swine fever panzootic is continuing to spread, and the number of affected countries and material losses are increasing. In particular, India, Papua New Guinea, Malaysia, Greece and Bhutan joined the list of ASF infected countries in 2020–2021. The disease control is hindered by the lack of commercially available and effective vaccines, which, in its turn, is attributable to the insufficient knowledge of ASF pathogenesis and immune defense against the disease. The use of attenuated virus variants enables a thorough investigation of the factors influencing the virulence of African swine fever virus and the immune response to it. This involves the use of naturally attenuated virus variants, as well as of the variants attenuated by a long-term passaging of the virus in cell cultures. However, virulence heterogeneity characteristic of the ASF virus population, necessitates the additional selection of infected cells for the virus cloning. Conventional culture-based techniques for virus particle cloning are rather time- and labour-consuming; it is therefore appropriate to use flow cytometry cell sorting for the selection and cloning of virus infected cells with a view of selecting homologous virus lineages. The paper presents the results of sorting of African green monkey kidney cells (CV-1) and porcine bone marrow cells infected with African swine fever virus; the cells were sorted into the 96-well culture plates using a MoFlo Astrios EQ cell sorter in order to isolate a population of the virus originating from one infected cell. After the single cell sorting of the infected cell cultures into the 96-well plates, ASF positive cell detection rates in the plate wells were 30% for porcine bone marrow cells and 20% for CV-1.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.