veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2021-3-38-216-223veterinary-574Research ArticleБОЛЕЗНИ СВИНЕЙPORCINE DISEASESВлияние условий хранения сывороток крови свиней на выявление антител к вирусу АЧС методом ИФАEffect of pig serum storage conditions on detection of anti-ASFV antibodies by ELISAhttps://orcid.org/0000-0001-9884-1841ШотинА. Р.ShotinA. R.

Шотин Андрей Романович, аспирант, ведущий биолог референтной лаборатории по африканской чуме свиней

600901, Владимир, мкр. Юрьевец

Andrey R. Shotin, Post-Graduate Student, Leading Biologist, Reference Laboratory for African Swine Fever

600901, Vladimir, Yur’evets

shotin@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3817-2129ЖуковИ. Ю.ZhukovI. Yu.

Жуков Иван Юрьевич, кандидат биологических наук, младший научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней

Владимир

Ivan Yu. Zhukov, Candidate of Science (Biology), Junior Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever

Vladimir

zhukov@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5099-3050ПершинА. С.PershinA. S.

Першин Андрей Сергеевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней

Владимир

Andrey S. Pershin, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Senior Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever

Vladimir

daredron@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-5982-8393МазлумАлиMazloumAli

Мазлум Али, кандидат биологических наук, научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней

Владимир

Ali Mazloum, Candidate of Science (Biology), Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever

Vladimir

mazlum@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6482-7814ШевченкоИ. В.ShevchenkoI. V.

Шевченко Иван Вячеславович, кандидат биологических наук, научный сотрудник референтной лаборатории по африканской чуме свиней

Владимир

Ivan V. Shevchenko, Candidate of Science (Biology), Researcher, Reference Laboratory for African Swine Fever

Vladimir

shevchenko@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5438-8026ИголкинА. С.IgolkinA. S.

Иголкин Алексей Сергеевич, кандидат ветеринарных наук, заведующий референтной лабораторией по африканской чуме свиней

Владимир

Alexey S. Igolkin, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Head of Reference Laborator y for African swine fever

Vladimir

igolkin_as@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4616-5316МануйловаО. А.ManuylovaO. A.

Мануйлова Ольга Анатольевна, биолог референтной лаборатории по африканской чуме свиней

Владимир

Olga A. Manuylova, Biologist, Reference Laboratory for African Swine Fever

Vladimir

o.manuylova@list.ruhttps://orcid.org/0000-0003-3159-1969ГруздевК. Н.GruzdevK. N.

Груздев Константин Николаевич, доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник информационно-аналитического центра

Владимир

Konstantin N. Gruzdev, Doctor of Science (Biology), Professor, Chief Researcher, Information and Analysis Centre

Vladimir

gruzdev@arriah.ruФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)РоссияFGBI “Federal Centre for Animal Health” (FGBI “ARRIAH”Russian Federation202116082021103216223Copyright © Шотин А.Р., Жуков И.Ю., Першин А.С., Мазлум А., Шевченко И.В., Иголкин А.С., Мануйлова О.А., Груздев К.Н., 20212021Шотин А.Р., Жуков И.Ю., Першин А.С., Мазлум А., Шевченко И.В., Иголкин А.С., Мануйлова О.А., Груздев К.Н.Shotin A.R., Zhukov I.Y., Pershin A.S., Mazloum A., Shevchenko I.V., Igolkin A.S., Manuylova O.A., Gruzdev K.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/574

Одной из мер борьбы с распространением и профилактики африканской чумы свиней в Российской Федерации является проведение исследований проб, отбираемых от свиней и кабанов, в том числе серологическими методами с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) для качественного определения содержания антител к вирусу. При этом в настоящее время на территории страны не существует нормативного документа, регламентирующего условия хранения проб сыворотки крови для постановки ИФА при определении содержания антител к вирусу АЧС. Также отсутствуют литературные данные о максимально допустимом сроке хранения проб сыворотки крови свиней, а влияние условий хранения на серологический статус сывороток крови домашних свиней в отношении АЧС изучено недостаточно. В статье представлены результаты эксперимента по определению влияния температурных режимов и длительности хранения серопозитивных и серонегативных в отношении вируса АЧС сывороток крови домашних свиней на их серологический статус при постановке тест-системой INgezim PPA Compac (Ingenasa, Испания) для твердофазного ИФА и вероятности получения ложных результатов. В ходе выполнения работы и анализа результатов получены новые данные, свидетельствующие об отсутствии или незначительном влиянии моделируемых режимов хранения на определение серологического статуса качественных проб сывороток крови в отношении вируса АЧС, в то время как гемолизированные пробы показали более заметное изменение, пропорциональное степени гемолиза и длительности хранения. Несмотря на то что полученные результаты по обнаружению антител к возбудителям одних болезней не применимы для других патогенов, данное исследование имеет существенное прикладное значение, позволяя установить зависимость получения достоверных результатов при серодиагностике АЧС от условий хранения проб.

One of the measures used to control and prevent African swine fever spread in the Russian Federation involves testing pig and boar sera using inter alia serological tools based on enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for anti-viral antibody detection. However, there is no unified regulatory document specifying storage conditions for sera used in the ELISA for anti-ASFV antibody detection. There are also lack of published data on the maximum admissible shelf life of the pig sera, and the effect of storage conditions on the serological status of the pig sera as for ASF is understudied. The paper demonstrates results of the experiment aimed at the determination of the effect of storage temperatures and shelf life on the serological status of ASFV seropositive and seronegative pig sera when tested by INgezim PPA Compac (Ingenasa, Spain) ELISA as well as on the possibility of false results. During the experiment and analysis of its results, the new data were obtained, and they indicated from none to non-significant effect of the simulated storage conditions on the serological status of sera used for ASFV detection, while hemolyzed sera demonstrated more significant changes proportional to hemolysis degree and storage duration. Although the results of detection of antibodies against the agents of some diseases cannot be used in case of other pathogens, this study has a substantial applied significance as it allows to specify the dependence of the valid results of ASF serodiagnosis on the storage conditions of the samples.

африканская чума свинейиммуноферментный анализсыворотка кровиусловия храненияAfrican swine feverenzyme-linked immunosorbent assayserumstorage conditionsИсследование выполнено за счет средств федерального бюджета в рамках проведения научно-исследовательских работ по теме: «Проведение прикладных научных исследований» (ГЗ No 081-00010-19-00 от 28.12.2018).The experiment was funded by the federal government as a part of the research activities “Applied Research” (SA No. 081-00010-19-00 от 28.12.2018).ReferencesРемыга С. Г., Першин А. С., Шевченко И. В., Иголкин А. С., Шевцов А. А. Клинические и патологоанатомические изменения у диких европейских кабанов и домашних свиней при заражении вирусом африканской чумы свиней. Ветеринария сегодня. 2016; 3 (18): 46–51. Режим доступа: https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/260.Remyga S. G., Pershin A. S., Shevchenko I. V., Igolkin A. S., Shevtsov A. A. Clinical and post-mortem signs in European wild boars and domestic pigs infected with African swine fever virus. Veterinary Science Today. 2016; 3 (18): 46–51. Available at: https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/260. (in Russian).Alonso C., Borca M., Dixon L., Revilla Y., Rodriguez F., Escribano J. M., ICTV Report Consortium. ICTV Virus Taxonomy Profile: Asfarviridae. J. Gen. Virol. 2018; 99 (5): 613–614. DOI: 10.1099/jgv.0.001049.Alonso C., Borca M., Dixon L., Revilla Y., Rodriguez F., Escribano J. M., ICTV Report Consortium. ICTV Virus Taxonomy Profile: Asfarviridae. J. Gen. Virol. 2018; 99 (5): 613–614. DOI: 10.1099/jgv.0.001049.Пособие по подготовке чрезвычайных планов действий на случай эпидемии африканской чумы свиней. Под ред. М.-Л. Пенрит, В. Гу- берти, К. Депнер, Х. Луборт. Руководство ФАО по здравоохранению и воспроизводству животных. № 8. Рим: ФАО; 2011. 78 с. Режим доступа: http://www.fao.org/3/i1196r/i1196r.pdf.Preparation of African swine fever contingency plans. Ed. by M.- L. Penrith, V. Guberti, K. Depner, J. Lubroth. FAO Animal Production and Health Manual. No. 8. Rome: FAO; 2009. 70 р. Available at: http://www.fao.org/3/i1196e/i1196e.pdf.World Animal Health Information and Analysis Department. African swine fever (ASF). Report Nо. 12: March 01 – March 14, 2019. Available at: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal_Health_in_the_World/docs/pdf/Disease_cards/ASF/Report_12_Current_situation_ASF.pdf.World Animal Health Information and Analysis Department. African swine fever (ASF). Report Nо. 12: March 01 – March 14, 2019. Available at: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Animal_Health_in_the_World/docs/pdf/Disease_cards/ASF/Report_12_Current_situation_ASF.pdf.Galindo I., Alonso C. African swine fever virus: A review. Viruses. 2017; 9 (5):103. DOI: 10.3390/v9050103.Galindo I., Alonso C. African swine fever virus: A review. Viruses. 2017; 9 (5):103. DOI: 10.3390/v9050103.Груздев К. Н., Караулов А. К., Иголкин А. С. Опыт борьбы с африканской чумой свиней в Российской Федерации и его значение для дру- гих стран. Ветеринария сегодня. 2020; 1 (32): 38–43. DOI: 10.29326/2304-196X-2020-1-32-38-43.Gruzdev K. N., Karaulov A. K., Igolkin A. S. Experience in African swine fever control in the Russian Federation and its value for the other countries. Veterinary Science Today. 2020; 1 (32): 38–43. DOI: 10.29326/2304-196X-2020-1-32-38-43.Шевцов А. А., Петрова О. Н., Ремыга С. Г., Першин А. С., Груздев К. Н., Иголкин А. С. Анализ проведения лабораторных исследований по ряду вирусных болезней свиней на территории России в 2011–2017 гг. Ветеринария сегодня. 2018;1 (24): 42–48. DOI: 10.29326/2304-196X-2018-1-24-42-48.Shevtsov A. A., Petrova O. N., Remyga S. G., Pershin A. S., Gruzdev K. N., Igolkin A. S. Analysis of laboratory tests for several viral swine diseases in Russia in 2011–2017. Veterinary Science Today. 2018; 1 (24): 42–48. DOI: 10.29326/2304-196X-2018-1-24-42-48.Pershin A., Shevchenko I., Igolkin A., Zhukov I., Mazloum A., Aronova E., et al. A long-term study of the biological properties of ASF virus isolates originating from various regions of the Russian Federation in 2013–2018. Vet. Sci. 2019; 6 (4):99. DOI: 10.3390/vetsci6040099.Pershin A., Shevchenko I., Igolkin A., Zhukov I., Mazloum A., Aronova E., et al. A long-term study of the biological properties of ASF virus isolates originating from various regions of the Russian Federation in 2013– 2018. Vet. Sci. 2019; 6 (4):99. DOI: 10.3390/vetsci6040099.Першин А. С., Шевченко И. В., Иголкин А. С., Жуков И. Ю., Власова Н. Н., Мануйлова О. А. Динамика антителообразования при экспериментальном заражении вирусом африканской чумы свиней. Ветеринария Кубани. 2019; 4: 3–7. DOI: 10.33861/2071-8020-2019-4-3-7.Pershin A. S., Shevchenko I. V., Igolkin А. S., Zhukov I. Yu., Vlasova N. N., Manuylova O. A. Dynamics ofantibodies production after experimental challenge with ASF virus. Veterinaria Kubani. 2019; 4: 3–7. DOI: 10.33861/2071-8020-2019-4-3-7. (in Russian).Bergeron H. C., Glas P. S., Schumann K. R. Diagnostic specificity of the African swine fever virus antibody detection enzyme-linked immunosorbent assay in feral and domestic pigs in the United States. Transbound. Emerg. Dis. 2017; 64 (6): 1665–1668. DOI: 10.1111/tbed.12717.Bergeron H. C., Glas P. S., Schumann K. R. Diagnostic specificity of the African swine fever virus antibody detection enzyme-linked immunosorbent assay in feral and domestic pigs in the United States. Transbound. Emerg. Dis. 2017; 64 (6): 1665–1668. DOI: 10.1111/tbed.12717.Бельтран Алькрудо Д., Ариас М., Гайардо К., Крамер С., Пен- рит М. Л. Африканская чума свиней: обнаружение и диагностика. Руководство для ветеринаров. Руководство ФАО по здравоохранению и воспроизводству животных. № 19. Рим: ФАО; 2017. 93 с. Режим до- ступа: http://www.fao.org/3/i7228r/i7228r.pdf.Beltrán-Alcrudo D., Arias M., Gallardo C., Kramer S., Penrith M. L. 2017. African swine fever: detection and diagnosis – A manual for veterinarians. FAO Animal Production and Health Manual. No. 19. Rome: FAO; 2017. 88 р. Available at: http://www.fao.org/3/i7228e/i7228e.pdf.Mur L., Boadella M., Martínez‐López B., Gallardo C., Gortazar C., Sánchez‐Vizcaíno J. M. Monitoring of African swine fever in the wild boar population of the most recent endemic area of Spain. Transbound. Emerg. Dis. 2012; 59 (6): 526–531. DOI: 10.1111/j.1865-1682.2012.01308.x.Mur L., Boadella M., Martínez‐López B., Gallardo C., Gortazar C., Sánchez‐Vizcaíno J. M. Monitoring of African swine fever in the wild boar population of the most recent endemic area of Spain. Transbound. Emerg. Dis. 2012; 59 (6): 526–531. DOI: 10.1111/j.1865-1682.2012.01308.x.ГОСТ 28573-90 Свиньи. Методы лабораторной диагностики африканской чумы. М.: Стандартинформ; 2005. 9 с. Режим доступа: https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4294826/4294826183.pdf.GOST 28573-90 Pigs. Methods of laboratory diagnostics of african plague. М.: Standartinform; 2005. 9 p. Available at: https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4294826/4294826183.pdf. (in Russian).Изучение популяционного иммунитета к гриппу у населения Российской Федерации: методические указания (МУ 3.1.3490-17). М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребите- лей и благополучия человека; 2018. 34 с. Режим доступа: https://www. meganorm.ru/Data2/1/4293738/4293738228.pdf.Examination of the population immunity against influenza in people in the Russian Federation [Izuchenie populyacionnogo immuniteta k grippu u naseleniya Rossijskoj Federacii]: Methodical Guidelines (МG 3.1.3490-17). М.: Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing; 2018. 34 р. Available at: https://www.meganorm.ru/Data2/1/4293738/4293738228.pdf. (in Russian).Ветеринарно-санитарные правила отбора проб для контроля содержания вредных веществ и их остатков в живых животных и продуктах животного происхождения: Постановление Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь от 23.09.2010 № 57. Режим доступа: https://mshp.gov.by/print/documents/technicalacts/e13f0df74187a8fa.html.Rules of veterinary and sanitary sampling for the control of harmful substances and their residues in live animals and products of animal origin [Veterinarno-sanitarnye pravila otbora prob dlya kontrolya soderzhaniya vrednyh veshchestv i ih ostatkov v zhivyh zhivotnyh i produktah zhivotnogo proiskhozhdeniya]: Regulation of the Ministry of Agriculture of the Republic of Belarus as of 23.09.2010 No. 57. Available at: https://mshp.gov.by/print/documents/technical-acts/e13f0df74187a8fa.html. (in Russian).Правила взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования: утв. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 24.06.1971. Режим доступа: https://docs.cntd.ru/document/1200109238.Rules of sampling pathological materials, blood, feed and their delivery for laboratory testing [Pravila vzyatiya patologicheskogo materiala, krovi, kormov i peresylki ih dlya laboratornogo issledovaniya]: approved by the Main Veterinary Department of the USSR Ministry of Agriculture on 24.06.1971. Available at: https://docs.cntd.ru/document/1200109238. (in Russian).ГОСТ 34105-2017 Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Серологические методы. М.: Стандартинформ; 2017. 23 с. Режим доступа: http://docs.cntd.ru/document/1200145963.GOST 34105-2017 Animals. Laboratory diagnostics of brucellosis. Serological methods. М.: Standartinform; 2017. 23 p. Available at: http://docs.cntd.ru/document/1200145963. (in Russian).ГОСТ Р 53079.4-2008 Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных ис- следований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа. М.: Стандартинформ; 2009. 65 с. Режим доступа: http://docs.cntd.ru/document/1200072566.GOST R 53079.4-2008 Clinical laboratory technologies. Quality assurance of clinical laboratory tests. Part 4. Rules for conducting of preanalytical stage. М.: Standartinform; 2009. 65 p. Available at: http://docs.cntd.ru/document/1200072566. (in Russian).Boadella M., Gortázar C. Effect of haemolysis and repeated freeze-thawing cycles on wild boar serum antibody testing by ELISA. BMC Res. Notes. 2011; 4:498. DOI: 10.1186/1756-0500-4-498.Boadella M., Gortázar C. Effect of haemolysis and repeated freeze-thawing cycles on wild boar serum antibody testing by ELISA. BMC Res. Notes. 2011; 4:498. DOI: 10.1186/1756-0500-4-498.Neumann E. J., Bonistalli K. N. Effect of blood sample handling post-collection on Erysipelothrix rhusiopathiae antibody titres. Vet. J. 2009; 180 (3): 325–329. DOI: 10.1016/j.tvjl.2008.07.020.Neumann E. J., Bonistalli K. N. Effect of blood sample handling post-collection on Erysipelothrix rhusiopathiae antibody titres. Vet. J. 2009; 180 (3): 325–329. DOI: 10.1016/j.tvjl.2008.07.020.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.