veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2020-3-34-170-178veterinary-495Research ArticleБОЛЕЗНИ КРСBOVINE DISEASESОптимизация параметров культивирования вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота штамма «Вологда/2019»Optimization of cultivation parameters for bovine respiratory syncytial virus strain Vologda/2019https://orcid.org/0000-0002-2494-3826КирпиченкоВ. В.KirpichenkoV. V.

Кирпиченко Владимир Владимирович, аспирант, референтная лаборатория болезней крупного рогатого скота

600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец

Vladimir V. Kirpichenko, Post-Graduate Student, Reference Laboratory for Bovine Diseases

600901, Vladimir, Yur’evets

kirpichenko@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3932-2416КононоваС. В.KononovaS. V.

Кононова Светлана Владимировна, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Svetlana V. Kononova, Candidate of Sciences (Biology), Leading Researcher, Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

kononova@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6132-5771ШумиловаИ. Н.ShumilovaI. N.

Шумилова Ирина Николаевна, кандидат ветеринарных наук, младший научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Irina N. Shumilova, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Junior Researcher, Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

shumilova@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4288-1964НестеровА. А.NesterovA. A.

Нестеров Александр Александрович, кандидат ветеринарных наук, младший научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Alexander А. Nesterov, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Junior Researcher, Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

nesterov@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6598-7593ТурковаМ. В.TurkovaM. V.

Туркова Мария Владимировна, ведущий ветеринарный врач референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Maria V. Turkova, Leading Veterinarian, Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

turkova@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2989-7793БухонЕ. А.BukhonYe. A.

Бухон Елена Александровна, ведущий биолог референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Yelena A. Bukhon, Leading Biologist, Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

buhon@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2443-1898РоменскаяД. В.RomenskayaD. V.

Роменская Диана Витальевна, кандидат ветеринарных наук, заведующий сектором отдела образования и научно-методической работы

г. Владимир

Diana V. Romenskaya, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Head of Sector, Department for Education and Science Methodology

Vladimir

romenskaya@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5982-3675СпрыгинА. В.SpryginA. V.

Спрыгин Александр Владимирович, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Alexander V. Sprygin, Candidate of Science (Biology), Senior Researcher, Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

sprygin@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5263-1491МанинБ. Л.ManinB. L.

Манин Борис Леонидович, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник сектора культуры клеток отдела инноваций

г. Владимир

Boris L. Manin, Candidate of Sciences (Biology), Leading Researcher, Sector for Cell Culture, Innovation Department

Vladimir

manin@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8326-7151БьядовскаяО. П.ByadovskayaO. P.

Бьядовская Ольга Петровна, кандидат биологических наук, заведующий референтной лабораторией болезней крупного рогатого скота

г. Владимир

Olga P. Byadovskaya, Candidate of Science (Biology), Head of Reference Laboratory for Bovine Diseases

Vladimir

bjadovskaya@arriah.ruФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)РоссияFGBI “Federal Centre for Animal Health” (FGBI “ARRIAH”)Russian Federation20201609202003170178Copyright © Кирпиченко В.В., Кононова С.В., Шумилова И.Н., Нестеров А.А., Туркова М.В., Бухон Е.А., Роменская Д.В., Спрыгин А.В., Манин Б.Л., Бьядовская О.П., 20202020Кирпиченко В.В., Кононова С.В., Шумилова И.Н., Нестеров А.А., Туркова М.В., Бухон Е.А., Роменская Д.В., Спрыгин А.В., Манин Б.Л., Бьядовская О.П.Kirpichenko V.V., Kononova S.V., Shumilova I.N., Nesterov A.A., Turkova M.V., Bukhon Y.A., Romenskaya D.V., Sprygin A.V., Manin B.L., Byadovskaya O.P.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/495

В настоящее время в изучении респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота есть множество спорных вопросов. В связи с этим актуальным является изучение биологических свойств вируса, оптимизация методов его культивирования и подбор наиболее технологичных приемов конструирования средств диагностики и профилактики данного заболевания. Целью настоящей работы являлись выбор чувствительных клеточных систем и оптимизация параметров культивирования в подобранных культурах клеток. В опытах использовали штамм «Вологда/2019» вируса респираторносинцитиальной инфекции крупного рогатого скота, выделенный из биологического материала, полученного от теленка с признаками респираторной патологии. Штамм адаптирован к перевиваемой культуре клеток слизистой носовых перегородок крупного рогатого скота (BT) и депонирован в Государственную коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ». Установлено, что перевиваемые линии клеток трахеи эмбриона крупного рогатого скота (FBT) и почки теленка (RBT) являются наиболее чувствительными клеточными системами для репродукции респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота штамма «Вологда/2019», в данных культурах клеток отмечалось максимальное накопление вируса. Цитопатическая активность вируса в культуре клеток FBT на 4–5 сут культивирования составила от 4,78 ± 0,18 до 5,50 ± 0,16 lg ТЦД50/см3, а в клеточной системе RBT – от 4,00 ± 0,23 до 4,75 ± 0,20 lg ТЦД50/см3. Определено, что при множественности заражения культур клеток FBT и RBT вирусом в 0,1 lg ТЦД50/кл, использовании в составе поддерживающей питательной среды 2% глютамина, а также 2% сыворотки крови лошади либо крупного рогатого скота удается получить вирусный материал с высокой цитопатической активностью.

There are currently many controversial issues in the study of bovine respiratory syncytial infection. In this regard, it is relevant to study the biological properties of the virus, optimize the methods of its cultivation and select the most technologically advanced methods of designing diagnostic and prevention tools for this disease. The aim of this work was to select sensitive cell systems and to optimize the cultivation parameters in selected cell cultures. The Vologda/2019 strain of the bovine respiratory syncytial infection virus isolated from biological material obtained from a calf with respiratory symptoms was used in the experiment. The strain was adapted to the continuous cell culture derived from bovine turbinate tissue (BT) and deposited in the State collection of microorganism strains at FGBI “ARRIAH”. It was established that the continuous cell lines of fetal bovine trachea (FBT) and calf kidney (RBT) are the most sensitive cell systems for the reproduction of the bovine respiratory syncytial virus strain Vologda/2019, the maximum accumulation of the virus was observed in these cell cultures. The cytopathic activity of the virus in the FBT cell culture ranged from 4.78 ± 0.18 to 5.50 ± 0.16 lg TCID50/cm3, and in the RBT cell culture – from 4.00 ± 0.23 to 4.75 ± 0.20 lg TCID50/cm3 at days 4–5 of cultivation. It was determined that in case of multiplicity of inoculation of FBT and RBT cell cultures with the virus at 0.1 lg TCD50/cell and the use of 2% glutamine in the maintenance nutrient medium, as well as 2% horse or cattle blood serum, it is possible to obtain virus material with high cytopathic activity.

респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скоташтамм «Вологда/2019»культивированиецитопатическая активностьтитр вирусаbovine respiratory syncytial virusVologda/2019 straincultivationcytopathic activityvirus titerРабота выполнена за счет средств ФГБУ «ВНИИЗЖ» в рамках тематики научно-исследовательских работ «Ветеринарное благополучие».The experiment was carried out at the expense of the FGBI “ARRIAH” in the framework of the research topic “Animal Welfare”.ReferencesКочиш Т. Ю. Разработка набора реагентов для определения уровня антител к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота в иммуноферментном анализе: автореф. дис. … канд. биол. наук. Щелково; 2004. 23 с.Kochish Т. Yu. Development of a set of reagents for determining the level of antibodies to bovine respiratory syncytial virus using ELISA [Razrabotka nabora reagentov dlya opredeleniya urovnya antitel k respiratorno-sincitial’nomu virusu krupnogo rogatogo skota v immunofermentnom analize]: author’s abstract … Candidate of Science (Biology). Shchyolko vo; 2004. 23 p. (in Russian)Баженов К. С. Распространение вирусов парагриппа-3 и респираторно-синцитиальной инфекции среди телят на откорме в осеннезимний период. Бюллетень ВИЭВ. 1983; 50: 6–8.Bazhenov K. S. Spread of parainfluenza-3 and respiratory syncytial viruses in fattening calves in autumn-winter season [Rasprostranenie virusov paragrippa-3 i respiratorno-sincitial’noj infekcii sredi telyat na otkorme v osenne-zimnij period]. Bulletin of the All-Russia Institute for Experimental Veterinary Medicine (VIEV). 1983; 50: 6–8. (in Russian)Гуненков В. В., Халенев Г. А., Сюрин В. Н. Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция Животноводство и ветеринария. 1975; 8: 70–76.Gunenkov V. V., Khalenev G. A., Syurin V. N. Respiratory syncytial virus infection [Respiratorno-sincitial’naya virusnaya infekciya]. Zhivotnovodstvo i Veterinariya. 1975; 8: 70–76. (in Russian)Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота: рекомендации. Сост.: А. Г. Глотов, Т. И. Глотова, С. В. Котенева, А. В. Нефедченко, К. В. Войтова, О. В. Кунгурцева, И. Я. Строганова. Новосибирск: Сибирское отделение Россельхозакадемии; ГНУ ИЭВСиДВ; 2010. 26 с. eLIBRARY ID: 19518328.Bovine respiratory syncytial infection [Respiratorno-sincitial’naya infekciya krupnogo rogatogo skota]: recommendations. Compiled by: A. G. Glotov, T. I. Glotova, S. V. Koteneva, A. V. Nefedchenko, K. V. Voytova, O. V. Kungurtseva, I. Ya. Stroganova. Novosibirsk: Siberian Branch of the Russian Agricultural Academy; Institute of Experimental Veterinary Medicine for Siberia and Far East); 2010. 26 р. eLIBRARY ID: 19518328. (in Russian)Глотов А. Г., Петрова О. Г., Глотова Т. И., Нефедченко А. В., Татарчук А. Т., Кушнир Н. И. и др. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота. Ветеринария. 2002; 3: 17–21. eLIBRARY ID: 22435011.Glotov А. G., Petrova О. G., Glotova Т. I., Nefedchenko А. V., Tatarchuk А. T., Kushnir N. I., et al. Spread of bovine viral respiratory diseases [Rasprostranenie virusnyh respiratornyh boleznej krupnogo rogatogo skota]. Veterinariya. 2002; 3: 17–21. eLIBRARY ID: 22435011. (in Russian)Сюрин В. Н., Самуйленко А. Я., Соловьев Б. В., Фомина Н. В. Вирусные болезни животных. М.: ВНИТИБП; 1998. 928 с.Syurin V. N., Samuylenko А. Ya., Solovyov B. V., Fomina N. V. Animal viral diseases [Virusnye bolezni zhivotnyh]. М.: All-Russian Scientific Research and Technological Institute of Biological Industry; 1998. 928 p. (in Russian)Строганова И. Я., Войтова К. В. Методы обнаружения и идентификации респираторно-синцитиального вируса крупного ро гатого скота в культуре клеток. Вестник КрасГАУ. 2011; 3: 128–133. eLIBRARY ID: 16445217.Stroganova I. Ya., Voitova K. V. The techniques for revealing and identification of the respiratory and syncytial virus of cattle in cell culture. Bulletin of KSAU. 2011; 3: 128–133. eLIBRARY ID: 16445217. (in Russian)Глотов А. Г., Глотова Т. И. Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота. Ветеринария. 2009; 11: 18–23. eLIBRARY ID: 12968708.Glotov A. G., Glotova T. I. Respiratory syncytial virus (BRSV). Veterinariya. 2009; 11: 18–23. eLIBRARY ID: 12968708. (in Russian)Журавлева Е. А. Нозоареал респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота. Ветеринария. 2018; 12: 3–8. DOI: 10.30896/0042-4846.2018.21.12.03-08.Zhuravleva E. A. Nosoarea of bovine respiratory syncytial virus infection. Veterinariya. 2018; 12: 3–8. DOI: 10.30896/0042-4846.2018.21.12.03-08. (in Russian)Кононова С. В., Нестеров А. А., Думова В. В., Манин Б. Л., Кононов А. В., Бабин Ю. Ю., Губенко О. Г. Адаптация вируса болезни Шмалленберга к перевиваемым клеточным культурам. Ветеринария сегодня. 2015; 2 (13): 17–21. eLIBRARY ID: 24345887.Kononova S. V., Nesterov A. A., Dumova V. V., Manin B. L., Kononov A. V., Babin Yu. Yu., Gubenko O. G. Adaptation of Schmallenberg virus to continuous cell cultures. Veterinary Science Today. 2015; 2 (13): 17–21. eLIBRARY ID: 24345887. (in Russian)Манин Б. Л., Коропова Н. В., Кузнецова Е. Г., Лабзова М. Н., Хлебопашникова С. В. Линия клеток почки теленка Bos taurus RBT (Rene Bos taurus) для репродукции вирусов животных. Патент № 2488631 Российская Федерация, МПК C12N 5/07 (2010.01), A61K 39/12 (2006.01). ФГБУ «ВНИИЗЖ». № 2012126700/10. Заявл. 26.06.2012. Опубл. 27.07.2013. Бюл. № 21. Режим доступа: https://patents.s3.yandex.net/RU2488631C1_20130727.pdf.Manin B. L., Koropova N. V., Kuznetsova Ye. G., Labzova М. N., Khlebopashnikova S. V. Bovine calf kidney cell line Bos taurus RBT (Rene Bos taurus) for animal viruse reproduction [Liniya kletok pochki telenka Bos taurus RBT (Rene Bos taurus) dlya reprodukcii virusov zhivotnyh]. Patent No. 2488631 Russian Federation, IPC C12N 5/07 (2010.01), A61K 39/12 (2006.01). FGBI “ARRIAH”. No. 2012126700/10. Submitted on 26.06.2012. Published on 27.07.2013. Bulletin No. 21. Available at: https://patents.s3.yandex.net/RU2488631C1_20130727.pdf. (in Russian)Murray G. M., More S. J., Sammin D., Casey M. J., McElroy M. C., O’Neill R. G., et al. Pathogens, patterns of pneumonia, and epidemiologic risk factors associated with respiratory disease in recently weaned cattle in Ireland. J. Vet. Diagn. Invest. 2017; 29 (1): 20–34. DOI: 10.1177/1040638716674757.Murray G. M., More S. J., Sammin D., Casey M. J., McElroy M. C., O’Neill R. G., et al. Pathogens, patterns of pneumonia, and epidemiologic risk factors associated with respiratory disease in recently weaned cattle in Ireland. J. Vet. Diagn. Invest. 2017; 29 (1): 20–34. DOI: 10.1177/1040638716674757.Valarcher J.-F., Taylor G. Bovine respiratory syncytial virus infection. Vet. Res. 2007; 38 (2): 153–180. DOI: 10.1051/vetres:2006053.Valarcher J.-F., Taylor G. Bovine respiratory syncytial virus infection. Vet. Res. 2007; 38 (2): 153–180. DOI: 10.1051/vetres:2006053.Пономарев А. П., Манин Б. Л., Коган М. М. Культивирование клеточных линий человека и животных с использованием сыворотки крови, очищенной лантаноидами. Ветеринарная патология. 2019; 4: 61–70. eLIBRARY ID: 41560805.Ponomarev A. P., Manin B. L., Kogan M. M. Cultivation of human and animal cell lines using blood serum purified by lantanoids. Veterinarnaya patologiya. 2019; 4: 61–70. eLIBRARY ID: 41560805. (in Russian)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.