Тарасова Алена Сергеевна, аспирант референтной лаборатории по болезням аквакультуры
Владимир
Alyona S. Tarasova, Post-Graduate Student of the Reference Laboratory for Aquaculture Diseases
Vladimir
Перчун Алексей Валерьевич, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник референтной лаборатории по болезням аквакультуры
600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец
Alexey V. Perchun, Candidate of Science (Biology), Senior Researcher at the Reference Laboratory for Aquaculture Diseases
600901, Vladimir, Yur’evets
Мельников Владимир Петрович, кандидат ветеринарных наук, заведующий референтной лабораторией по болезням аквакультуры
Владимир
Vladimir P. Melnikov, Candidate of Science (Veterinary Medicine), Head of the Reference Laboratory for Aquaculture Diseases
Vladimir
В настоящее время основной ущерб мировой аквакультуре наносят вирусные болезни рыб. Возбудители болезней часто проникают из одних рыбоводных хозяйств в другие при перевозках инфицированных рыб из неблагополучных хозяйств в благополучные. Поэтому завоз рыбопосадочного материала в Россию из стран с различной эпизоотологической ситуацией требует мониторинга и прогнозирования на основе возможных рисков. Ведущее место в комплексе мероприятий по предотвращению распространения вирусных инфекций рыб занимает диагностика. На сегодняшний день лабораторная диагностика болезней рыб вирусной природы основана на выделении возбудителя и его идентификации серологическими методами, которые требуют больших затрат времени и выполняются только в крупных научно-исследовательских институтах, имеющих профильные лаборатории. Более чувствительными и высокопроизводительными являются молекулярные методы диагностики. В статье представлены результаты применения полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией по выявлению ряда особо опасных вирусных болезней рыб семейства лососевых. В результате проделанной работы были подобраны праймеры и оптимизированы температурно-временные условия проведения реакции для идентификации инфекционного некроза гемопоэтической ткани, вирусной геморрагической септицемии и инфекционной анемии лососевых. Результаты, полученные в ходе исследований, позволили установить, что данный диагностический метод является высокоспецифичным с аналитической чувствительностью для вируса инфекционной анемии лососевых – 2,5 lg ТЦД50/см3, инфекционного некроза гемопоэтической ткани – 2,9 lg ТЦД50/см3 и вирусной геморрагической септицемии – 4,2 lg ТЦД50/см3. С помощью описанного метода была проведена идентификация референтных и полевых штаммов, имеющихся в референтной лаборатории по болезням аквакультуры ФГБУ «ВНИИЗЖ» и выделенных в разные годы в рыбоводческих хозяйствах на территории Российской Федерации. Данные, полученные в ходе исследований, коррелировали с результатами вирусовыделения на культуре клеток и иммуноферментного анализа с использованием коммерческих наборов. Предложенная методика проведения полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией позволяет обнаружить возбудителей болезней у рыб как с явными клиническими признаками, так и со скрытым вирусоносительством.
Today viral fish diseases cause major losses in the world aquaculture. Pathogen spread often occurs during the transportation of fish from infected farms to the disease-free ones. Therefore, the import of fish stocking material to Russia from countries with a different epidemic situation requires risk-based monitoring and forecasting. Diagnostics is of primary importance in the complex of measures to prevent the spread of viral infections in fish. To date, laboratory diagnostics of viral fish diseases is based on pathogen isolation and its identification using serological methods which require a lot of time and are performed only in large research institutes with specialized laboratories. Molecular diagnostic methods are more sensitive and high-performance. The article presents the results of using reverse transcription polymerase chain reaction to detect a number of highly dangerous viral diseases of fish (Salmonidae). As a result of this work, primers were selected and the temperature and time conditions of the reaction were optimized for the identification of infectious hematopoietic necrosis, viral hemorrhagic septicemia and infectious salmon anemia. The results obtained during the research allowed us to establish that this diagnostic method is highly specific with analytical sensitivity to infectious salmon anemia virus of 2.5 lg TCD50/сm3, to infectious hematopoietic necrosis – 2.9 lg TCD50/сm3 and to viral hemorrhagic septicemia – 4.2 lg TCD50/ сm3. The described method was used to identify reference and field strains available at the FGBI ARRIAH Reference Laboratory for Aquaculture Diseases and isolated in different years in fish farms in the territory of the Russian Federation. The research data correlated with the results obtained from virus neutralization in cell culture and ELISA performed using commercial kits. The proposed method of RT-PCR allows to detect pathogens both in fish with pronounced clinical signs and in latent virus carriers.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.