veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2019-2-29-30-34veterinary-412Research ArticleБОЛЕЗНИ СВИНЕЙPORCINE DISEASESРАЗРАБОТКА И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙDEVELOPMENT AND IMPROVEMENT OF ASF SEROLOGICAL DIAGNOSTIC TECHNIQUEShttps://orcid.org/0000-0002-0999-5767ШарыповаД. В.SharypovaD. V.

Сотрудник референтной лаборатории по АЧС

Владимир

Specialist, ASF Reference Laboratory

Vladimir

sharipova@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7382-8656КапустинаО. В.KapustinaO. V.

Ведущий научный сотрудник, доктор ветеринарных наук

Москва

Leading Researcher, Doctor of Science (Veterinary Medicine)

Moscow

olgakapustina2010@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3817-2129ЖуковИ. Ю.ZhukovI. Yu.

Младший научный сотрудник, кандидат биологических наук

Владимир

Junior Researcher, Candidate of Science (Veterinary Medicine)

Vladimir

zhukov@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8707-7710ВласоваН. Н.VlasovaN. N.

Главный научный сотрудник, доктор биологических наук

Владимир

Leading Researcher, Doctor of Science (Biology)

Vladimir

vlasova_nn@arriah.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5438-8026ИголкинА. С.IgolkinA. S.

Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук

Владимир

Head of the Laboratory, Candidate of Science (Veterinary Medicine)

Vladimir

igolkin_as@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian FederationФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАНРоссияFGBSI FSC, FGBSI FNC VIEV RANRussian Federation201927062019023034Copyright © Шарыпова Д.В., Капустина О.В., Жуков И.Ю., Власова Н.Н., Иголкин А.С., 20192019Шарыпова Д.В., Капустина О.В., Жуков И.Ю., Власова Н.Н., Иголкин А.С.Sharypova D.V., Kapustina O.V., Zhukov I.Y., Vlasova N.N., Igolkin A.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/412

Ввиду отсутствия эффективных средств специфической профилактики африканской чумы свиней очевидно, что ранняя диагностика – один из важней­ших и результативных способов борьбы с данной болезнью. Однако своевременная диагностика представляет собой наиболее сложную составляющую любой эффективно действующей системы надзора. Научные достижения последних десятилетий обусловили разработку не только высокоспецифич­ных и чувствительных методов лабораторной диагностики, но и быстрых в исполнении. Тем не менее дальнейшая разработка, усовершенствование и расширение арсенала методов лабораторной диагностики африканской чумы свиней, в том числе экспресс-тестов, является актуальной задачей, требующей особого внимания. Данное исследование посвящено разработке экспресс-методов, предназначенных для быстрого обнаружения антител к вирусу африканской чумы свиней в сыворотках крови инфицированных животных, а также анализу эффективности их применения. Предложены методы иммунопероксидазного монослойного анализа на основе фиксированных тест-препаратов (пермиссивной к вирусу африканской чумы свиней линии клеток CV-1, инфицированной штаммом вируса «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1») и реакции агглютинации латекса на основе рекомбинантного белка p30 вируса африканской чумы свиней. В результате проведенной работы установлена эффективность применения указанных методов для серологической диагностики африканской чумы свиней. Реакция агглютинации латекса и иммунопероксидазный монослойный анализ дают возможность быстро и качественно получать результаты исследований (в течение 1–2 ч). Преимущество указанных методов по сравнению с иммуноферментным анали­зом состоит также в простоте их постановки и в возможности использования в условиях ограниченного технического обеспечения.  

Due to the lack of effective tools of ASF specific prevention it is evident that early diagnosis is one of the most important and resultative ways of the disease control. However, contemporary diagnosis is a complex component of any effective surveillance system. Latest scientific achievements facilitated not only highly specific and sensitive but also rapid methods of laboratory diagnosis. Nevertheless, further development, improvement and expansion of ASF diagnosis techniques including rapid tests is a topical task of a great concern. The research is devoted to development of rapid test methods for rapid detection of antibodies to ASFV in blood sera of infected animals as well as to analysis of their use effectiveness. The following methods were suggested: immunoperoxidase monolayer assay using fixed cell line (ASFV permissive CV-1 cell-line infected with the virus strain ASF/ARRIAH/CV-1) and latex agglutination test using ASFV p30 recombinant protein. The performed research demonstrated the effectiveness of the applied techniques for ASF serological diagnosis. Latex agglutination test and immunoperoxidase monolayer assay give rapid and high quality test results (within 1–2 hours). The advantage of the specified methods as compared to ELISA is their simplicity and the possibility of use in conditions of limited technical support.  

африканская чума свинейреакция агглютинации латексаиммунопероксидазный тестперевиваемая культура клеток CV-1рекомбинантный белок p30вирусный антигенAfrican swine feverlatex agglutination testimmunoperoxidase monolayer assayCV-1 continuous cell linep30 recombinant proteinvirus antigenReferencesБровкина А. Н. Разработка метода и тест-системы выявления бактерий рода Salmonella на основе латекс-агглютинации // Научный журнал КубГАУ. – 2011. – № 72 (08). – URL: http://ej.kubagro.ru/2011/08/pdf/31.pdf.Brovkina A.N. Development of Salmonella detection method and test-system using latex agglutination [Razrabotka metoda i test-sistemy vyyavleniya bakterij roda Salmonella na osnove lateks-agglyutinacii]. Scientific Journal KubSAU. 2011; 72 (08). URL: http://ej.kubagro.ru/2011/08/ pdf/31.pdf (in Russian).Макаров В. В. Африканская чума свиней. – М.: РУДН, 2011. – 268 с.Makarov V. V. African swine fever [Afrikanskaya chuma svinej]. М.: RUDN, 2011 (in Russian).Методические указания по получению типоспецифической сыворотки крови свиней к вирусу африканской чумы свиней для постановки реакции задержки гемадсорбции: утв. Россельхознадзором в 2017 г. / МУ 07-15; ФГБУ «ВНИИЗЖ». – Владимир, 2017. – 15 с.Methodical instructions for preparation of type-specific pig blood serum to ASFV for hemadsorbtion inhibition test performance: approved by the Rosselkhoznadzor in 2017 [Metodicheskie ukazaniya po polucheniyu tipospecificheskoj syvorotki krovi svinej k virusu afrikanskoj chumy svinej dlya postanovki reakcii zaderzhki gemadsorbcii: utv. Rossel’hoznadzorom v 2017 g]. MU 07-15; FGBI “ARRIAH”. Vladimir, 2017 (in Russian).Станишевский Я. М. Полимерные дисперсные системы медикобиологического назначения: автореф. дис. … канд. биол. наук. – М., 2001. – 23 с.Stanishevsky Ya. M. Biomedical polymer disperse systems [Polimernye dispersnye sistemy mediko-biologicheskogo naznacheniya]: authors extract. dis. … candidate of science (Biology). М., 2001 (in Russian).Чайка Н. А. Реакция агглютинации латекса // Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / Ф. С. Носков, А. А. Смородинцев, Ю. М. Бродянский [и др.]; под ред. Т. В. Перадзе, П. Халонена. – М.: Медицина. – 1985. – С. 121–143.Chaika N. A. Latex agglutination test [Reakciya agglyutinacii lateksa]. Immunodiagnosis of viral infections [Immunologicheskaya diagnostika virusnyh infekcij]. F. S. Noskov, А. А. Smoroditsev, Yu. M. Brodyansky [et al]; ed. by T. V. Peradze, P. Halonen. М.: Medicine. 1985; 121–143 (in Russian).African swine fever // Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds and bees) / OIE. – 7th ed. – Paris, 2012. – Vol. 2, Chap. 2.8.1. – P. 1067–1079.African swine fever. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds and bees). OIE. 7th ed. Paris, 2012; 2 (2.8.1): 1067–1079.Development of an immunoperoxidase monolayer assay for the detection of antibodies against peste des petits ruminants virus based on BHK-21 cell line stably expressing the goat signaling lymphocyte activation molecule / J. Zhang, W. Liu, W. Chen [et al.] // PLоS ONE. – 2016. – Vol. 11 (10):e0165088; DOI: 10.1371/journal.pone.0165088.Development of an immunoperoxidase monolayer assay for the detection of antibodies against peste des petits ruminants virus based on BHK-21 cell line stably expressing the goat signaling lymphocyte activation molecule. J. Zhang, W. Liu, W. Chen [et al.]. PLоS ONE. 2016; 11 (10):e0165088; DOI: 10.1371/journal.pone.0165088.Hechemy K., Michaelson E. Latex particle assays in laboratory medicine. Part I–II // Laboratory Management. – 1984. – Vol. 27 (40). – Р. 26–34.Hechemy K., Michaelson E. Latex particle assays in laboratory medicine. Part I–II. Laboratory Management. 1984; 27 (40): 26–34.Molecular characterization of African swine fever virus isolates originating from outbreaks in the Russian Federation between 2007 and 2011 / A. Malogolovkin, A. Yelsukova, C. Gallardo [et al.] // Vet. Microbiol. – 2012. – Vol. 158 (3–4). – P. 415–419; DOI: 10.1016/j.vetmic.2012.03.002.Molecular characterization of African swine fever virus isolates originating from outbreaks in the Russian Federation between 2007 and 2011. A. Malogolovkin, A. Yelsukova, C. Gallardo [et al.]. Vet. Microbiol. 2012; 158 (3–4): 415–419; DOI: 10.1016/j.vetmic.2012.03.002.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.