veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2018-4-27-39-43veterinary-390Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИЯBIOTECHNOLOGYИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ ДИНАМИКИ ТРАНСФОРМАЦИИ ДНК В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК ВНК-21/2-17 ПРИ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ЯЩУРАSTUDY OF DNA TRANSFORMATION DYNAMICS IN ВНК-21/2-17 CELL CULTURE USING FLOW CYTOMETRY DURING FMD VIRUS REPRODUCTIONГусеваМ. Н.GusevaM. N.

Старший научный сотрудник, кандидат биологических наук

Владимир

Senior Researcher, Candidate of Sciences (Biology)

Vladimir

guseva_mn@arriah.ruШевченкоМ. А.ShevchenkoM. A.

Ведущий ветеринарный врач

Владимир

Leading Veterinarian

Vladimir

shevchenko_ma@arriah.ruМихалишинД. В.MikhalishinD. V.

Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук

Владимир

Head of Laboratory, Candidate of Sciences (Veterinary Medicine)

Vladimir

mihalishin_dv@arriah.ruМихалишинВ. В.MikhalishinV. V.

Главный эксперт, доктор ветеринарных наук, профессор

Владимир

Chief Expert, Doctor of Sciences (Veterinary Medicine)

Vladimir

mihalishin@arriah.ruМанинБ. Л.ManinB. L.

Ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук

Владимир

Leading Researcher, Candidate of Sciences (Biology)

Vladimir

manin_bl@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation201826012019043943Copyright © Гусева М.Н., Шевченко М.А., Михалишин Д.В., Михалишин В.В., Манин Б.Л., 20192019Гусева М.Н., Шевченко М.А., Михалишин Д.В., Михалишин В.В., Манин Б.Л.Guseva M.N., Shevchenko M.A., Mikhalishin D.V., Mikhalishin V.V., Manin B.L.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/390

В задачу исследований входило изучение динамики трансформации ДНК клеток ВНК-21/2-17 при репродукции в них вируса ящура. Отмечено, что разрушение основной популяции клеток совпадало по времени с увеличением апоптических клеток и количеством детрита. Через 3 ч после инфицирования культуры клеток наблюдалось увеличение апоптоза и дебриса, уменьшение на 17–21% G1-фазы, увеличение в 2,3 раза многоядерных клеток. Через 7 ч резко увеличивалась гибель клеток. Выявлено, что на всех этапах культивирования вируса ящура в суспензионной линии клеток ВНК-21/2-17 преобладала диплоидная форма клеток – G1(2n), которая являлась основой при репродукции вируса. Клетки, находившиеся в синтетической (S), G2и M-фазах, были менее подвержены действию вируса. Проточная цитометрия позволила определить количественные параметры фаз клеточного цикла при репродукции в клетках вируса ящура. Также удалось провести сравнение между этими фазами, жизнеспособностью культуры клеток и динамикой репродукции вируса. Проведенные исследования цитопатического действия вируса ящура в клетках ВНК-21/2-17 показали, что одним из направлений оптимизации производства культуральных вакцин может быть применение фактора торможения пролиферации на определенной фазе клеточного цикла.

The research tasks covered the study of ВНК-21/2-17 cell DNA transformation dynamics during FMDV reproduction process. It was noted that the destruction of major cell population coincided with the increase in apoptotic cell number and detritus amount. Three hours post cell culture infection increase in apoptosis and detritus was observed, G 1-phase decreased by 17–21% and polynuclear cells grew by 2.3 times. In seven hours, the drastic rise in cell death was noted. It was established that at all stages of FMDV culture in ВНК-21/2-17 suspension cell line, diploid cells G1(2n) were predominant, being basic cells for the virus reproduction. Cells in synthetic (S) and G2and M-phases were less susceptible to virus. Using flow cytometry technique made it possible to quantify cell cycle phases during reproduction in FMDV cells. We also succeeded in comparing between these phases, virus livability and virus reproduction dynamics. The study of FMDV cytopathic effect in ВНК-21/2-17 cells demonstrated that one of the optimization trends in culture vaccine production include proliferation inhibitory factor use at a certain cell cycle phase.

проточная цитометрияфазы клеточного цикласуспензия клеток ВНК-21/2-17вирус ящураflow cytometrycell cycle phasesВНК-21/2-17 cell suspensionfoot-and-mouth disease virusReferencesВойткова В. В. Изучение апоптоза методом проточной цитофлуометрии (обзор литературы) // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2010. – № 6 (76), ч. 1. – С. 220–225.Voitkova V. V. Apoptosis study using flow cytofluorometry (review) [Izuchenie apoptoza metodom protochnoj citofluometrii (obzor literatury)]. Acta Biomedica Scientifca. 2010; 6 (1): 220–225 (in Russian).Исследование клеточного цикла линии ВНК-21/2-17 методом проточной цитометрии / М. А. Шевченко, М. Н. Гусева, Д. В. Михалишин [и др.] // Ветеринария сегодня. – 2017. – № 4. – С. 58–62.Study of ВНК-21/2-17 cell line cycle using flow cytometry technique [Issledovanie kletochnogo cikla linii VNK-21/2-17 metodom protochnoj citometrii]. М. А. Shevchenko, М. N. Guseva, D. V. Mikhalishin [et.al.]. Veterinary Science Today. 2017; 4: 58–62 (in Russian).Клетки / под ред. Б. Льюин [и др.]. – М.: БИНОМ, Лаборатория знаний, 2011. – 951 с.Cells [Kletki]. ed. by B. Lewin [et al.]. М.: BINOM, Laboratoria znanii, 2011 (in Russian).Основные этапы разработки и применения метода проточной цитометрии в ФГУ РНЦРХТ / А. С. Ягунов, А. В. Карташев, С. В. Токалов, Л. Н. Киселева // Вопросы онкологии. – 2008. – Т. 54, № 4. – С. 494–497.Basic stages of flow cytometry technique development and use in the FGI RRCRST [Osnovnye etapy razrabotki i primeneniya metoda protochnoj citometrii v FGU RNCRHT]. А. S. Yagunov, А. V. Kartashev, S. V. Tokalov, L. N. Kiseleva. Problems in Oncology [Voprosi onkologii]. 2008; 54 (4): 494–497 (in Russian).Пономарев А. П., Узюмов В. Л., Груздев К. Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. – Владимир: Фолиант, 2006. – 250 с.Ponomarev A. P., Uzyumov V. L., Gruzdev K. N. Foot-and-mouth virus: structure, biological, physical and chemical properties [Virus yashchura: struktura, biologicheskie i fziko-himicheskie svojstva] Vladimir: Foliant, 2006 (in Russian).Эффективность метода проточной цитометрии в изучении механизмов репарации клеток ВНК-21 в процессе культивирования и криоконсервирования / Б. Л. Манин, В. Т. Ночевный, С. В. Хайдуков, В. Н. Ласкавый // Ветеринарна медицина: мiжвiд. тем. наук. зб. – Харкiв, 2011. – Вип. 95. – С. 66–70.Efcacy of flow cytometry in ВНК-21 cell restoration mechanism study during culture and cryopreservation processes [Effektivnost’ metoda protochnoj citometrii v izuchenii mekhanizmov reparacii kletok VNK-21 v processe kul’tivirovaniya i kriokonservirovaniya]. B. L. Manin, V. T. Nochevny, S. V. Haidukov, V. N. Laskavy. Veterinarna medicina: mizhvid. tem. nauk. zb. Kharkiv, 2011; 95: 66–70 (in Russian).Ящур: монография / А. Н. Бурдов, А. И. Дудников, П. В. Малярец [и др.]; под ред. А. Н. Бурдова. – М.: Агропромиздат, 1990. – 320 с.Foot and mouth disease: monography [Yashchur: monografya]. А. N. Burdov, A. I. Dudnikov, P. V. Malyarets [et al.]; ed. A. N. Burdov. М.: Agropromizdat, 1990 (in Russian).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.