veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2018-3-26-8-12veterinary-368Research ArticleБОЛЕЗНИ СВИНЕЙPORCINE DISEASESРАЗРАБОТКА И ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НЕПРЯМОГО ВАРИАНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЭПИЗООТИЧЕСКОЙ ДИАРЕИ СВИНЕЙDEVELOPMENT AND BASIC FEATURES OF INDIRECT ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY FOR DETECTION OF ANTIBODIES AGAINST PORCINE EPIDEMIC DIARRHEAКаньшинаА. В.KanshinaA. V.

Старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук, 

г. Владимир

Senior Researcher, Candidate of Science (Veterinary Medicine),

Vladimir

vavilova@arriah.ruЯковлеваА. С.YakovlevaA. S.

Старший научный сотрудник, кандидат биологических наук,

г. Владимир

Senior Researcher, Candidate of Science (Biology),

Vladimir

yakovleva_as@arriah.ruОрловаЕ. С.OrlovaYe. S.

Старший научный сотрудник, кандидат биологических наук, 

г. Владимир

Senior Researcher, Candidate of Science (Biology),

Vladimir

orlova@arriah.ruЩербаковА. В.ScherbakovA. V.

Заведующий лабораторией, кандидат биологических наук, 

г. Владимир

Head of Laboratory, Candidate of Science (Biology),

Vladimir

ascherbakov@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation20182809201803812Copyright © Каньшина А.В., Яковлева А.С., Орлова Е.С., Щербаков А.В., 20182018Каньшина А.В., Яковлева А.С., Орлова Е.С., Щербаков А.В.Kanshina A.V., Yakovleva A.S., Orlova Y.S., Scherbakov A.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/368

Распространение эпизоотической диареи свиней и возросшая угроза свиноводству диктуют необходимость разработки современных методов диагностики болезни. Перспективным является использование в серологических тестах рекомбинантных антигенов возбудителя болезни. На основе рекомбинантного антигена разработан непрямой вариант иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу эпизоотической диареи свиней. В результате проведенных исследований были установлены все необходимые условия реакции. В процессе валидации определены основные характеристики разработанного метода. Прецизионность реакции в условиях повторяемости и воспроизводимости превышала 90%, диагностическая специфичность составляла 99,47%, чувствительность относительно коммерческого набора ID Screen PEDV Indirect (IDvet, Франция) при очень хорошей согласованности двух методов (k-критерий – 0,88) – 92%. Тест-система характеризуется высокой устойчивостью при смене ключевого компонента реакции.

Spread of porcine epidemic diarrhea and its increased threat for the pig industry necessitate development of advanced techniques for the disease diagnosis. Use of recombinant antigens of the disease agent seems prospective. The recombinant antigen-based indirect enzyme-linked immunosorbent assay has been developed for the detection of antibodies against porcine epidemic diarrhea virus. The research performed allowed for determination of all necessary test conditions. Basic features of the developed method were determined during its validation. The test precision was above 90% pursuant to its repeatability and reproducibility, diagnostic specificity of the test amounted to 99.47%, and its sensitivity as compared to commercial ID Screen PEDV Indirect (IDvet, France) was 92% with very good compatibility of the two tests (k-criterion – 0.88) – 92%. The test-system demonstrates high stability upon the change of the key test component.

эпизоотическая диарея свинейантителаиммуноферментный анализporcine epidemic diarrheaantibodiesenzyme-linked immunozorbent assayReferencesВирусные болезни животных / В. Н. Сюрин, А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьев, Н. В. Фомина. – М.: ВНИТИБП, 2001. – 928 с.Viral animal diseases [Virusnye bolezni zhivotnyh]. V. N. Syurin, A. Ya. Samuylenko, B. V. Solovyev, N. V. Fomina. М.: VNITIBP; 2001 (in Russian).Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х. З. Гафаров, А. В. Иванов, Е. А. Непоклонов, А. З. Равилов. – Казань: Фен, 2002. – 592 с.Monoinfection and co-infection diarrheas in newborn calves and piglets [Mono- i smeshannye infekcionnye diarei novorozhdennyh teljat i porosjat]. H. Z. Gafarov, A. V. Ivanov, Ye. A. Nepoklonov, A. Z. Ravilov. Kazan: Fen; 2002 (in Russian).Пейсак З. Болезни свиней. – Брест: Брестская типография, 2008. – 424 с.Pejsak Z. Porcine diseases. Brest: Brest printing Office; 2008.Яковлева А. С., Щербаков А. В. Получение рекомбинантного нуклеокапсидного белка вируса эпизоотической диареи свиней // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. – 2015. – Т. 13. – С. 89–95.Yakovleva А. S., Scherbakov A. V. Recovery of recombinant nucleocapsid protein of porcine epidemic diarrhea. Proceedings of the Federal Centre for Animal Health. 2015; 13: 89–95 (in Russian).Comparison of an enzyme-linked immunosorbent assay with serum neutralization test for serodiagnosis of porcine epidemic diarrhea virus infection / J. S. Oh, D. S. Song, J. S. Yang [et al.] // J. Vet. Sci. – 2005. – Vol. 6, No. 4. – P. 349–352.Comparison of an enzyme-linked immunosorbent assay with serum neutralization test for serodiagnosis of porcine epidemic diarrhea virus infection. J. S. Oh, D. S. Song, J. S. Yang [et al.]. J. Vet. Sci. 2005; 6 (4): 349–352.Development and optimization of antibody detection assays // OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (Mammals, Birds, and Bees). – 2014. – Chap. 3.6.1. – URL: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.6.01_ANTIBODY_DETECT.pdf.Development and optimization of antibody detection assays. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (Mammals, Birds, and Bees). 2014; Chap. 3.6.1. URL: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.6.01_ANTIBODY_DETECT.pdf.Hofmann M., Wyler R. Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of porcine epidemic diarrhea coronavirus antibodies in swine sera // Vet. Microbiol. – 1990. – Vol. 21, No. 3. – P. 263–273. – URL: https://doi.org/10.1016/0378-1135(90)90037-V.Hofmann M., Wyler R. Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of porcine epidemic diarrhea coronavirus antibodies in swine sera. Vet. Microbiol. 1990; 21 (3): 263–273. URL: https://doi. org/10.1016/0378-1135(90)90037-V.Hou X. L., Yu L. Y., Liu J. Development and evaluation of enzymelinked immunosorbent assay based on recombinant nucleocapsid protein for detection of porcine epidemic diarrhea (PEDV) antibodies // Vet. Microbiol. – 2007. – Vol. 123, No. 1–3. – P. 86–92. URL: https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2007.02.014.Hou X. L., Yu L. Y., Liu J. Development and evaluation of enzymelinked immunosorbent assay based on recombinant nucleocapsid protein for detection of porcine epidemic diarrhea (PEDV) antibodies. Vet. Microbiol. 2007; 123 (1–3): 86–92. URL: https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2007.02.014.Immunohistochemical detection of porcine epidemic diarrhea virus compared to other methods / F. Guscetti, C. Bernasconi, K. Tobler [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 1998. – Vol. 5, No. 3. – P. 412–414.Immunohistochemical detection of porcine epidemic diarrhea virus compared to other methods. F. Guscetti, C. Bernasconi, K. Tobler [et al.]. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1998; 5 (3): 412–414.Jacobson R. H. Validation of serological assays for diagnosis of infectious disease // Rev. Sci. Tech. OIE. – 1998. – Vol. 17, No. 2. – Р. 469–486.Jacobson R. H. Validation of serological assays for diagnosis of infectious disease. Rev. Sci. Tech. OIE. 1998; 17 (2): 469–486.Lee C. Porcine epidemic diarrhea virus: An emerging and reemerging epizootic swine virus // Virol. J. – 2015. – Vol. 12:193; DOI: 10.1186/s12985-015-0421-2.Lee C. Porcine epidemic diarrhea virus: An emerging and re-emerging epizootic swine virus. Virol. J. 2015; 12: 193; DOI: 10.1186/s12985-015-0421-2.Ren X., Suo S., Jang Y.-S. Development of a porcine epidemic diarrhea virus M protein-based ELISA for virus detection // Biotechnol. Lett. – 2011. – Vol. 33, No. 2. – P. 215–220. – URL: https://doi.org/10.1007/s10529010-0420-8.Ren X., Suo S., Jang Y.-S. Development of a porcine epidemic diarrhea virus M protein-based ELISA for virus detection. Biotechnol. Lett. 2011; 33 (2): 215–220. URL: https://doi.org/10.1007/s10529-010-0420-8.Song D., Park B. Porcine epidemic diarrhoea virus: a comprehensive review of molecular epidemiology, diagnosis, and vaccines // Virus Genes. – 2012. – Vol. 44, No. 2. – P. 167–175; DOI: 10.1007/s11262-012-0713-1.Song D., Park B. Porcine epidemic diarrhoea virus: a comprehensive review of molecular epidemiology, diagnosis, and vaccines. Virus Genes. 2012; 44 (2): 167–175; DOI: 10.1007/s11262-012-0713-1.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.