veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2018-3-26-3-7veterinary-367Research ArticleБОЛЕЗНИ СВИНЕЙPORCINE DISEASESВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА p30 НА РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ IN VITROEFFECT OF p30 RECOMBINANT PROTEIN ON AFRICAN SWINE FEVER VIRUS IN VITRO REPRODUCTIONМазлумАлиMazloumAli

Аспирант, 

г. Владимир

Post-Graduate Student, 

Vladimir

ali.mazloum6@gmail.comЖуковИ. Ю.ZhukovI. Yu.

Ведущий биолог,

г. Владимир

Leading Biologist,

Vladimir

Zhukov@arriah.ruПершинА. С.PershinA. S.

Научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук, 

г. Владимир

Researcher, Candidate of Sciences (Veterinary Medicine),

Vladimir

pershin_as@arriah.ruИголкинА. С.IgolkinA. S.

Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук, 

г. Владимир

Head of the Laboratory, Candidate of Sciences (Veterinary Medicine),

Vladimir

igolkin_as@arriah.ruВласоваН. Н.VlasovaN. N.

Главный научный сотрудник, доктор биологических наук,

г. Владимир

Chief Researcher, Doctor of Sciences (Biology),

Vladimir

vlasova_nn@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation2018280920180337Copyright © Мазлум А., Жуков И.Ю., Першин А.С., Иголкин А.С., Власова Н.Н., 20182018Мазлум А., Жуков И.Ю., Першин А.С., Иголкин А.С., Власова Н.Н.Mazloum A., Zhukov I.Y., Pershin A.S., Igolkin A.S., Vlasova N.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/367

Средства специфической профилактики при африканской чуме свиней пока не разработаны. Для определения составных компонентов, которые могут быть использованы при создании надежной защиты от АЧС, необходимо изучить функцию определенного белка вируса, его роль в морфогенезе и индукции иммунного ответа. Установлено, что белки p54 и p30 участвуют в вирусном проникновении и интернализации и способны индуцировать образование протективных антител у иммунизированных свиней. Введение этих белков в инфицированную вирусом АЧС культуру клеток в разной степени воздействует на репродукцию вируса. Представлены результаты изучения влияния очищенного рекомбинантного белка р30, полученного из клона E. coli с плазмидой pET32b(+)/р30, на репродукцию вируса африканской чумы свиней in vitro. Наибольшее снижение, вплоть до полной ингибиции, репродукции вируса наблюдали при внесении 300 нг p30 в первичные культуры клеток селезенки свиньи и костного мозга свиньи, инфицированные изолятом Krasnodar 07/17 вируса африканской чумы свиней в дозе 100 ГАдЕ на матрас (~ 0,01 ГАдЕ на клетку). Отмечено, что при внесении в образец смеси p30 и p54 снижение репродукции было существеннее, чем с использованием только p30.

African swine fever specific prevention means have not been developed yet. However, it is necessary to study the function of definite viral proteins, their role in immune response morphogenesis and induction to determine the components to be included into ASF protection drugs. It was established that p54 and p30 proteins participate in virus penetration and internalization and are able to induce protective antibodies in immunized pigs. The inoculation of these proteins into ASFV-infected cell culture has an impact on virus reproduction to different extents. The results of the study of purified recombinant protein p30 effect, derived from E. coli clone, containing pET32b(+)/р30 plasmid, on ASFV in vitro reproduction are presented. The greatest decrease, including complete inhibition of virus reproduction, was observed when 300 ng of p30 were inoculated into porcine spleen and marrow primary cell cultures, infected with the ASFV Krasnodar 07/17 isolate at the dose of 100 HAU per plate (~ 0.01 HAU per cell). It was noted that if the mixture of p30 and p54 was inoculated into a sample, the virus reproduction was greater compared to the use of only p30.

вирус африканской чумы свинейклонированиерекомбинантный белок p30репродукция вируса in vitroAfrican swine fevercloningp30 recombinant proteinin vitro virus reproductionReferencesВлияние полудана на репродукцию вирусов репродуктивнореспираторного синдрома, трансмиссивного гастроэнтерита и африканской чумы свиней в первичных и перевиваемых культурах клеток / Д. В. Шарыпова, И. Ю. Жуков, Али Мазлум [и др.] // Ветеринария сегодня. – 2018. – № 1 (24). – С. 37–41.Poludanum’s influence on reproductive and respiratory syndrome, transmissible gastroenteritis and African swine fever viruses in primary and continuous cell cultures. D. V. Sharypova, I. Yu. Zhukov, Ali Mazloum [et al.]. Veterinary Science Today. 2018; 1 (24): 37–41.Казакова А. С. Конструирование продуцентов рекомбинантных белков р72, р30 и р54 вируса африканской чумы свиней: дис. … канд. биол. наук. – Покров, 2013. – 125 с.Kazakova A. S. Construction of African swine fever virus recombinant proteins р72, р30 and р54: Candidate Thesis (Biology). Pokrov; 2013 (in Russian).Клонирование генов, кодирующих трансмембранные белки и белки, ответственные за вирулентность вируса африканской чумы свиней / Али Мазлум, Н. Г. Зиняков, А. С. Иголкин, Н. Н. Власова // Ветеринария сегодня. – 2018. – № 2 (25). – С. 3–7; doi: 10.29326/2304-196X2018-2-25-3-7.Cloning of genes, coding for transmembrane proteins and proteins, responsible for African swine fever virus virulence. Ali Mazloum, N. G. Zinyakov, A. S. Igolkin, N. N. Vlasova. Veterinary Science Today. 2018; 2 (25): 3–7; doi: 10.29326/2304-196X-2018-2-25-3-7.African swine fever virus controls the host transcription and cellular machinery of protein synthesis / E. G. Sánchez, A. Quintas, M. Nogal [et al.] // Virus Res. – 2013. – Vol. 173, No. 1. – P. 58–75; doi: 10.1016/j.virusres.2012.10.025.African swine fever virus controls the host transcription and cellular machinery of protein synthesis. E. G. Sánchez, A. Quintas, M. HYPERLINK "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Nogal%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23154157" Nogal [et al.]. Virus Res. 2013; 173 (1): 58–75; doi: 10.1016/j.virusres.2012.10.025.African swine fever virus structural protein p54 is essential for the recruitment of envelope precursors to assembly sites / J. M. Rodríguez, R. García-Escudero, M. L. Salas, G. Andrés // J. Virol. – 2004. – Vol. 78, No. 8. – P. 4299–4313; doi: 10.1128/JVI.78.8.4299–4313.2004.African swine fever virus structural protein p54 is essential for the recruitment of envelope precursors to assembly sites / J. M. Rodríguez, R. García-Escudero, M. L. Salas, G. Andrés. J. Virol. 2004; 78 (8): 4299–4313; doi: 10.1128/JVI.78.8.4299–4313.2004.African swine fever virus / E. R. Tulman, G. A. Delhon, B. K. Ku, D. L. Rock // Curr. Top. Microbiol. Immunol. – 2009. – Vol. 328. – P. 43–87; doi: 10.1007/978-3-540-68618-7-2.African swine fever virus. E. R. Tulman, G. A. Delhon, B. K. Ku, D. L. Rock. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2009; 328: 43–87; doi: 10.1007/9783-540-68618-7-2.Correlation of cell surface marker expression with African swine fever virus infection / P. Lithgow, H. Takamatsu, D. Werling [et al.] // Vet. Microbiol. – 2014. – Vol. 168, No. 2–4. – P. 413–419; doi: 10.1016/j.vetmic.2013.12.001.Correlation of cell surface marker expression with African swine fever virus infection. P. Lithgow, H. Takamatsu, D. Werling [et al.]. Vet. Microbiol. 2014; 168 (2–4): 413–419; doi: 10.1016/j.vetmic.2013.12.001.Enhancing DNA immunization by targeting ASFV antigens to SLA-II bearing cells / J. M. Argilaguet, E. Pérez-Martín, C. Gallardo [et al.] // Vaccine. – 2011. – Vol. 29, No. 33. – P. 5379–5385; doi: 10.1016/j.vaccine.2011.05.084.Enhancing DNA immunization by targeting ASFV antigens to SLAII bearing cells. J. M. Argilaguet, E. HYPERLINK "https://www.ncbi.nlm.nih. gov/pubmed/?term=P%C3%A9rez-Mart%C3%ADn%20E%5BAuthor%5D &cauthor=true&cauthor_uid=21679736" Pérez-Martín, C. HYPERLINK "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Gallardo%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21679736" Gallardo [et al.]. Vaccine. 2011; 29 (33): 5379–5385; doi: 10.1016/j.vaccine.2011.05.084.Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. – 1970. – Vol. 227, No. 5259. – P. 680–685.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227 (5259): 680–685.The African swine fever virus proteins p54 and p30 are involved in two distinct steps of virus attachment and both contribute to the antibody-mediated protective immune response / P. Gómez-Puertas, F. Rodríguez, J. M. Oviedo [et al.] // Virology. – 1998. – Vol. 243, No. 2. – P. 461–471; doi.org/10.1006/viro.1998.9068.The African swine fever virus proteins p54 and p30 are involved in two distinct steps of virus attachment and both contribute to the antibodymediated protective immune response. P. Gómez-Puertas, F. Rodríguez, J. M. Oviedo [et al.]. Virology. 1998; 243 (2): 461–471; HYPERLINK "https://doi.org/10.1006/viro.1998.9068"\t"_blank"\o"Persistent link using digital object identifier" doi.org/10.1006/viro.1998.9068.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.