veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"10.29326/2304-196X-2018-2-25-26-30veterinary-356Research ArticleЯЩУРFOOT-AND-MOUTH DISEASEСПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ 146S КОМПОНЕНТА ВИРУСА ЯЩУРА В СЫРЬЕ ДЛЯ ВАКЦИНЫ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИMETHOD FOR FMD VIRUS 146S COMPONENT CONCENTRATION DETERMINATION WITH REAL-TIME REVERSE TRANSCRIPTION – POLYMERASE CHAIN REACTION IN VACCINE RAW MATERIALSДоронинМ. И.DoroninM. I.

Научный сотрудник, кандидат биологических наук.

Researcher, Candidate of Science (Biology), 

Vladimir

doronin@arriah.ruТиминаА. М.TiminaA. M.

Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук.

Leading Researcher, Candidate of Science (Veterinary Mediciane), 

Vladimir

timina@arriah.ruЛозовойД. А.LozovoyD. A.

Директор, кандидат ветеринарных наук.

Director, Candidate of Science (Veterinary Medicine), 

Vladimir

ozovoy@arriah.ruСтариковВ. А.StarikovV. A.

Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук.

Leading Researcher, Candidate of Science (Veterinary Medicine),

Vladimir

starikov@arriah.ruМихалишинД. В.MikhalishinD. V.

Заведующий лабораторией, кандидат ветеринарных наук.

Head of  Laboratory, Candidate of Science (Veterinary Medicine), 

Vladimir

mihalishindv@arriah.ruМедведеваН. Н.MedvedevaN. N.

Биолог.

Biologist, 

Vladimir

medvedeva@arriah.ruБорисовА. В.BorisovA. V.

Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук.

Leading Researcher, Candidate of Science (Veterinary Medicine), 

Vladimir

borisov@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation201802072018022630Copyright © Доронин М.И., Тимина А.М., Лозовой Д.А., Стариков В.А., Михалишин Д.В., Медведева Н.Н., Борисов А.В., 20182018Доронин М.И., Тимина А.М., Лозовой Д.А., Стариков В.А., Михалишин Д.В., Медведева Н.Н., Борисов А.В.Doronin M.I., Timina A.M., Lozovoy D.A., Starikov V.A., Mikhalishin D.V., Medvedeva N.N., Borisov A.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/356

Разработан способ определения концентрации 146S компонента вируса ящура в сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Предложена отрицательная регрессионная модель вида С146S = (30,269 – Ct)/4,155, позволяющая определять значение концентрации 146S частиц вируса ящура на основании установленной величины порогового цикла амплификации (Ct). Экспериментально доказано, что количество 146S компонента, определенного методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием разработанной регрессионной модели и заложенного в прививную дозу противоящурной вакцины, позволяет защитить вакцинированных животных от генерализованной формы ящура типов А, О, Азия-1. Метод ОТ-ПЦР-РВ является высокочувствительным, позволяет быстро и с высокой степенью достоверности оценивать концентрацию 146S антигена в противоящурной вакцине. Способ определения количества 146S частиц методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием регрессионной модели является надежным и характеризуется высокой корреляцией (95,5–99,0%) с результатами реакции связывания комплемента.

Method for determination of foot-and-mouth disease (FMD) virus 146S component concentration with real-time reverse transcription – polymerase chain reaction (rtRT-PCR) in vaccine raw materials is developed. Negative regression model of  С146S = (30.269 – Ct )/4.155 type allowing determination of FMDV 146S particle concentrations based on the amplification threshold cycle values (Ct ) is proposed. It has been experimentally proven that the quantity of the 146S component determined by the real-time RT-PCR method using developed regression model and contained in the inoculation dose of FMD vaccine confers protection to the vaccinated animals against generalized FMD of A, O, Asia-1 types. rtRT-PCR method is highly sensitive and allows rapid and highly reliable estimation of the 146S antigen concentration in FMD vaccine. The method for 146S particle quantity determination by real-time RT-PCR using the regression model is reliable and demonstrates high correlation (95.5–99.0%) with the complement fixation test results.

вирус ящураконцентрация 146S компонентаОТ-ПЦР-РВпороговый цикл амплификацииfoot-and-mouth disease (FMD) virusconcentration of 146S componentrtRT-PCRamplification threshold cycleReferencesБондаренко А. Ф. Качественный и количественный иммунохимический анализ вирусных белков. – Суздаль, 1994. – 92 с.Bondarenko A. F. Qualitative and quantitative immunochemical assay of virus proteins [Kachestvennyj I kolichestvennyj immunohimicheskij analiz virusnyh belkov]. Suzdal, 1994 (in Russian).Методические указания по постановке реакции нейтрализации для определения иммунного статуса животных при ящуре: утв. МСХ СССР 26.12.1983.Methodical instructions on neutralization test procedure for determination of immune status of animals with regard to FMD [Metodicheskie ukazanija po postanovke reakcii nejtralizacii dlja opredelenija immunnogo statusa zhivotnyh pri jashhure]: approved by USSR Ministry of Agriculture on 26.12.1983 (in Russian).Пономарев А. П., Узюмов В. Л., Груздев К. Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. – Владимир: Фолиант, 2006. – 250 с.Ponomaryov A. P., Uzyumov V. L., Gruzdev K. N. Foot-andmouth disease virus: structure, biological and physical and chemical properties [Virus jashhura: struktura, biologicheskie i fizikohimicheskie svojstva]. Vladimir: Foliant, 2006 (in Russian).Применение ОТ-ПЦР-РВ для определения концентрации 146S компонента вируса ящура типов О/Саудовская Аравия и Asia-1/Shamir в полуфабрикате вакцины / Д. А. Лозовой, А. А. Шишкова, Д. В. Михалишин [и др.] // Ветеринария. – 2017. – № 6. – С. 57–61.Lozovoy D. A. , Shishkova A. A. , Mikhalishin D. V. et al. Realtime RT-PCR for determination of concentration of 146S component of FMD virus types O/Saudi Arabia and Asia-1/Shamir in semi-finished vaccine [Primenenie OT-PCR-RV dlya opredeleniya koncentracii 146S komponenta virusa yashchura tipov O/ Saudovskaya Araviya i Asia-1/Shamir v polufabrikate vakciny]. Veterinariya. 2017; 6: 57–61 (in Russian).Статистические методы анализа в клинической практике / П. О. Румянцев, В. А. Саенко, У. В. Румянцева, С. Ю. Чекин. – Обнинск: ГУ РМНЦ РАМН. – 46 с. – URL: http://www.kantiana.ru/medicinal/help/StatMethodsInClinics.pdf.Rumyantzev P. O., Sayenko V. А., Rumyantzeva U. V., Chekin S. Yu. Statistical analysis methods in clinical practice [Statisticheskie metody analiza v klinicheskoj praktike]. Obninsk: GU MRRC RAMS. URL: http://www.kantiana.ru/medicinal/help/StatMethodsInClinics.pdf (in Russian).Annual OIE/FAO FMD Reference Laboratory Network Report. – Pirbright, 2007. – URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm.Annual OIE/FAO FMD Reference Laboratory Network Report. Pirbright, 2007. URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm.Enhanced laboratory diagnosis of foot and mouth disease by real-time polymerase chain reaction / A. E. Shaw, S. M. Reid, D. P. King [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. – 2004. – Vol. 23, No. 3. – P. 1003–1009.Shaw A. E., Reid S. M., King D. P. et al. Enhanced laboratory diagnosis of foot and mouth disease by real-time polymerase chain reaction. Rev. Sci. Tech. OIE. 2004; 23 (3): 1003–1009.Сartwright B., Chapman W. G., Brown F. Serological and immunological relationships between the 146S and 12S particles of foot-and-mouth disease virus // J. Gen. Virol. – 1980. – Vol. 50, No. 2. – P. 369–375.Gartwright B., Brown F. Chapman W. G. Serological and immunological relationships between the 146S and 12S particles of foot-and-mouth disease virus. J. Gen. Virol. 1980; 50: 369–375.Implementation of a one-step real-time RT-PCR protocol for diagnosis of foot-and-mouth disease / A. E. Shaw, S. M. Reid, K. Ebert [et al.] // J. Virol. Methods. – 2007. – Vol. 143, No. 1. – P. 81– 85. – URL: https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2007.02.009.Shaw A., Reid S. M., Ebert K. et al. Implementation of a onestep real-time RT-PCR protocol for diagnosis of foot-and-mouth disease. J. Virol. Methods. 2007; 143(1): 81–85. https://doi. org/10.1016/j.jviromet.2007.02.009.Lubroth J., Rodriguez L., Dekker A. Vesicular diseases // Diseases of Swine / ed. B. E. Straw, J. J. Zimmerman, S. D’Allaire, D. J. Taylor. – 9th ed. – Ames, Iowa, 2006. – P. 517–536.Lubroth J., Rodriguez L., Dekker A. Vesicular diseases. Diseases of Swine. ed. B. E. Straw, J. J. Zimmerman, S. D’Allaire, D. J. Taylor. 9th ed. Ames, Iowa; 2006: 517–536.Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals / OIE. – 7th еd. – Paris, France, 2012. – Vol. 1, Chap. 2.1.5. – P. 166–169.Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals.Vol. 1. 7th еd. Paris, France: OIE; 2012; Chapter 2.1.5: 166–169.The pathogenesis and diagnosis of foot-and-mouth disease / S. Alexandersen, Z. Zhang, A. I. Donaldson, A. J. M. Garland // J. Comp. Pathol. – 2003. – Vol. 129, No. 1 – P. 1–36.Alexandersen S., Zhang Z., Donaldson A. I., Garland A. J. M. The pathogenesis and diagnosis of foot-and-mouth disease. J. Comp. Path. 2003; 129: 1–36. DOI: 10.1016/S0021- 9975(03)00041-0.Wernike K., Beer M., Hoffmann B. Rapid detection of footand-mouth disease virus, influenza A virus and classical swine fever virus by high-speed real-time RT-PCR // J. Virol. Methods. – 2013. – Vol. 193, No. 1. – Р. 50–54. – DOI: 10.1016/j.jviromet.2013.05.005.Wernike K., Beer M., Hoffmann B. Rapid detection of footand-mouth disease virus, influenza A virus and classical swine fever virus by high-speed real-time RT-PCR. J. Virol. Methods. 2013: 193(1): 50–54. DOI: 10.1016/j.jviromet.2013.05.005.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.