veterinaryВетеринария сегодняVeterinary Science Today2304-196X2658-6959"Veinard"veterinary-335Research ArticleОБЩИЕ ВОПРОСЫGENERAL ISSUESРАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ КОНКУРЕНТНОГО ВАРИАНТА ИФА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К РОТАВИРУСУ ГРУППЫ А В СЫВОРОТКАХ КРОВИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХDEVELOPMENT AND USE OF THE COMPETITIVE ELISA-BASED TEST SYSTEM FOR DETECTION OF ANTIBODIES TO GROUP A ROTAVIRUS IN LIVESTOCK SERAБьядовскаяО. П.BjadovskayaO. P.bjadovskaya@arriah.ruБухонЕ. А.BukhonYe. A.budoragina@arriah.ruНестеровА. А.NesterovA. A.nesterov@arriah.ruФГБУ «ВНИИЗЖ», г. ВладимирРоссияFGBI "ARRIAH", VladimirRussian Federation201702042018046366Copyright © Бьядовская О.П., Бухон Е.А., Нестеров А.А., 20182018Бьядовская О.П., Бухон Е.А., Нестеров А.А.Bjadovskaya O.P., Bukhon Y.A., Nesterov A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://veterinary.arriah.ru/jour/article/view/335

Разработана тест-система на основе конкурентного варианта иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антител к ротавирусу группы А в сыворотках крови, полученных от разных видов сельскохозяйственных животных (КРС, свиньи). В качестве антигена для ИФА был выбран штамм TE87 серогруппы А ротавируса КРС, адаптированный к перевиваемой культуре клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ) с титром инфекционной активности 7,0-7,5 lg ТЦД50/см3, обладающий группоспецифичностью и наиболее технологичный для наработки производственного антигена. Специфичность полученных компонентов - ротавирусного антигена и гипериммунной сыворотки кролика - подтверждали методом ПЦР-РВ и иммуноблота. Разработка тест-системы на основе конкурентного варианта ИФА включала в себя выбор оптимального состава блокирующего буфера, разведения антигена, специфической гипериммунной сыворотки и антивидового конъюгата. Определены допустимые значения оптической плотности контрольных сывороток, установлены значения позитивно-негативного порога реакции. Оценку специфичности и чувствительности метода относительно коммерческого набора Ingenasa (Испания) проводили при параллельном тестировании 203 проб сыворотки крови КРС. В результате проведенных исследований разработан чувствительный (92%) и специфичный (94%) конкурентный вариант ИФА, позволяющий с точностью 92,6% выявлять антитела к ротавирусу группы А в сыворотках крови КРС и свиней. С использованием разработанной тест-системы проведено исследование 2259 образцов сывороток крови КРС и свиней, поступивших в 2016-2017 гг. из 48 хозяйств различных регионов Российской Федерации. Средний процент серопозитивных к ротавирусу группы А животных у КРС составил 42%, а у свиней - 84%.

Test-system based on competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibodies to Group A rotavirus in sera collected from livestock of various species (cattle, pigs) was developed. Bovine rotavirus TE87 strain of serogroup A adapted to continuous porcine embryo kidney cell culture was selected as an antigen for ELISA. The said strain has the infectivity titre of 7.0-7.5 lg TCID50/cm3. It is group-specific and the most technologically suitable for production antigen scaling-up. Specificity of prepared components, rotavirus antigen and hyperimmune rabbit serum, was confirmed by real-time PCR and immunoblotting. The development of competitive ELISA-based test-system included selection of optimal blocking buffer composition as well as optimal antigen dilution, specific hyperimmune serum and anti-species conjugate. Admissible optical density values of control sera and cut-off values were determined. The test-system was examined for its specificity and sensitivity as compared to those ones of INGENASA test-kit (Spain) by parallel testing of 203 cattle sera. Performed studies resulted in the development of sensitive (92%) and specific (94%) competitive ELISA enabling detection of antibodies against Group A rotavirus in cattle and porcine sera with 92.6% accuracy. A total of 2,259 cattle and porcine sera submitted from 48 farms located in various Russian Federation regions in 2016-2017 were tested with the developed test-system. Average proportion of Group A rotavirus-positive cattle and pigs was 42% and 84%, respectively.

ротавирускультура клетокиммуноферментный анализсыворотки кровикрупный рогатый скотсвиньиrotaviruscell cultureenzyme-linked immunosorbent assayseralivestockpigsReferencesАшмарин И. П., Васильев Н. Н., Амбросов В. А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. - 76 с.Ашмарин И. П., Васильев Н. Н., Амбросов В. А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. - 76 с.Вирусные гастроэнтериты смешанной этиологии и их профилактика / А. И. Собко, Ф. С. Вабишевич, В. Н. Ткацкая [и др.] // Вопросы вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы науч. конф. - Покров, 1992. - Ч. 1. - С. 154-155.Вирусные гастроэнтериты смешанной этиологии и их профилактика / А. И. Собко, Ф. С. Вабишевич, В. Н. Ткацкая [и др.] // Вопросы вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: материалы науч. конф. - Покров, 1992. - Ч. 1. - С. 154-155.Львов Д. К. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. - М.: МИА, 2013. -С. 520-522.Львов Д. К. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. - М.: МИА, 2013. -С. 520-522.Мникова Л. А., Гоголев М. М., Ишкова Т. А. Иммунофер-ментная тест-система для идентификации рота- и коронави-русного антигена, антигена диареи крупного рогатого скота // С.-х. биология. - 2000. - № 6. - С. 117-119.Мникова Л. А., Гоголев М. М., Ишкова Т. А. Иммунофер-ментная тест-система для идентификации рота- и коронави-русного антигена, антигена диареи крупного рогатого скота // С.-х. биология. - 2000. - № 6. - С. 117-119.Сергеев В. А., Непоклонов Е. А., Алипер Т. И. Ротавирусы. Вирусы и вирусные инфекции. - М.: Библионика, 2007. -С. 365-369.Сергеев В. А., Непоклонов Е. А., Алипер Т. И. Ротавирусы. Вирусы и вирусные инфекции. - М.: Библионика, 2007. -С. 365-369.Agrawal D. K., Singh N. P., Chauhan R. S. Colostral antibodies against rotavirus infection in neonatal calves // J. Immunol. Immunopathol. - 2002. - Vol. 4. - P. 107-109.Agrawal D. K., Singh N. P., Chauhan R. S. Colostral antibodies against rotavirus infection in neonatal calves // J. Immunol. Immunopathol. - 2002. - Vol. 4. - P. 107-109.Almeida J. D., Craig C. R., Hall T. E. Multiple viruses present in the faeces of a scouring calf // Vet. Rec. - 1978. - Vol. 102, No. 8. -P. 170-171.Almeida J. D., Craig C. R., Hall T. E. Multiple viruses present in the faeces of a scouring calf // Vet. Rec. - 1978. - Vol. 102, No. 8. -P. 170-171.Beards G. M. Polymorphism of genomic RNAs within rotavirus serotypes and subgroups // Arch. Virol. - 1982. - Vol. 74, No. 1 - P. 65-70.Beards G. M. Polymorphism of genomic RNAs within rotavirus serotypes and subgroups // Arch. Virol. - 1982. - Vol. 74, No. 1 - P. 65-70.Characterization of virus-like particles produced by the expression of rotavirus capsid proteins in insect cells / S. E. Crawford, M. Labbé, J. Cohen [et al.] // J. Virol. - 1994. - Vol. 68, No. 9. -P. 5945-5952.Characterization of virus-like particles produced by the expression of rotavirus capsid proteins in insect cells / S. E. Crawford, M. Labbé, J. Cohen [et al.] // J. Virol. - 1994. - Vol. 68, No. 9. -P. 5945-5952.Development, characterization, and diagnostic applications of monoclonal antibodies against bovine rotavirus / Y. Al-Yousif, F. Al-Majhdi, C. Chard-Bergstrom [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2000. - Vol. 7, No. 2. - P. 288-292.Development, characterization, and diagnostic applications of monoclonal antibodies against bovine rotavirus / Y. Al-Yousif, F. Al-Majhdi, C. Chard-Bergstrom [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2000. - Vol. 7, No. 2. - P. 288-292.Diversity in Indian equine rotaviruses: identification of genotype G10, P6[1] and G1 strains and a new VP7 genotype (G16) strain in specimens from diarrheic foals in India / B. R. Gulati, R. Deepa, B. K. Singh [et al.] // J. Clinical Microbiol. - 2007. - Vol. 45, No. 3. - P. 972-978.Diversity in Indian equine rotaviruses: identification of genotype G10, P6[1] and G1 strains and a new VP7 genotype (G16) strain in specimens from diarrheic foals in India / B. R. Gulati, R. Deepa, B. K. Singh [et al.] // J. Clinical Microbiol. - 2007. - Vol. 45, No. 3. - P. 972-978.Estes M. K. Rotaviruses and their replication // Fields Virology / ed. D. M. Knipe, P. M. Howley [et al.]. - 4th еd. - Philadelphia, 2001. - P. 1747-1785.Estes M. K. Rotaviruses and their replication // Fields Virology / ed. D. M. Knipe, P. M. Howley [et al.]. - 4th еd. - Philadelphia, 2001. - P. 1747-1785.Group A rotavirus in calves in Minas Gerais State, Brazil / E. F. Barbosa, H. C. P. Figueiredo, A. M. Garcia [et al.] // Ciencia Rural. - 1998. - Vol. 28. - P. 435-439.Group A rotavirus in calves in Minas Gerais State, Brazil / E. F. Barbosa, H. C. P. Figueiredo, A. M. Garcia [et al.] // Ciencia Rural. - 1998. - Vol. 28. - P. 435-439.Prevalence of bovine group A rotavirus shedding among dairy calves in Ohio / A. Lucchelli [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1992. -Vol. 53, No. 2. - P. 169-174.Prevalence of bovine group A rotavirus shedding among dairy calves in Ohio / A. Lucchelli [et al.] // Am. J. Vet. Res. - 1992. -Vol. 53, No. 2. - P. 169-174.Tsunemitsu H., Jiang B., Saif L. J. Detection of group C rotavirus antigens and antibodies in animals and humans by enzyme-linked immunosorbent assays // J. Clin. Microbiol. - 1992. - Vol. 30, No. 8. - P. 2129-2134.Tsunemitsu H., Jiang B., Saif L. J. Detection of group C rotavirus antigens and antibodies in animals and humans by enzyme-linked immunosorbent assays // J. Clin. Microbiol. - 1992. - Vol. 30, No. 8. - P. 2129-2134.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.