Ионина Светлана Владимировна, канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории туберкулеза сельскохозяйственных животных
р. п. Краснообск, 630501, Новосибирская область
Svetlana V. Ionina, Cand. Sci. (Biology), Leading Researcher, Laboratory of Tuberculosis of Farm Animals, Siberian Federal Scientific Centre of Agro-BioTechnologies
Krasnoobsk 630501, Novosibirsk Oblast
Гордеева Елизавета Игоревна, младший научный сотрудник бактериологической лаборатории
ул. Охотская, 81а, г. Новосибирск, 630040
Elizaveta I. Gordeeva, Junior Researcher, Bacteriological Laboratory
ul. Okhotskaya, 81a, Novosibirsk 630040
Введение. В современной микробиологии сбор и поддержание коллекций микроорганизмов в рабочем состоянии являются наиболее важными направлениями практической деятельности микробиологической лаборатории.
Цель исследования. Осуществление процесса реактивации нежизнеспособных культур микобактерий, выделенных из биоматериала животных и образцов внешней среды, на жидких и плотных питательных средах с ростовой добавкой с последующим бактериологическим, молекулярно биологическим и молекулярно-генетическим типированием восстановленных патогенов.
Материалы и методы. Процесс реактивации включал в себя посев культур на жидкую среду Middlebrook 7H9 и плотную среду Левенштейна – Йенсена с использованием ростовой добавки OADC. Последующую идентификацию микобактерий проводили методом времяпролетной масс-спектрометрии и методом гибридизации на микрочипе с помощью тест-системы «МИКО-Биочип» (Россия).
Результаты. Для эксперимента in vitro отобрано 75 образцов культур микобактерий, полученных при обработке биоматериала животных и объектов внешней среды и находящихся в некультивируемом состоянии. Реактивировано 46 (61,3%) культур, среди которых идентифицированы Mycobacterium tuberculosis (4,3%) и нетуберкулезные микобактерии следующих видов: медленнорастущие патогенные Mycobacterium avium (65,2%) и Mycobacterium intracellulare (2,2%); медленнорастущие непатогенные Mycobacterium nonchromogenicum (15,2%) и Mycobacterium monacense (2,2%); быстрорастущие патогенные Mycobacterium fortuitum (4,3%) и Mycobacterium abscessus (2,2%), быстрорастущие условно-патогенные Mycobacterium neoaurum (2,2%), а также Mycobacterium kyogaense (2,2%). Ведущая роль среди реактивированных культур принадлежала микобактериям III группы нетуберкулезных микобактерий согласно классификации Раньона: Mycobacterium avium, Mycobacterium nonchromogenicum, Mycobacterium intracellulare.
Заключение. Осуществлена реактивация 46 из 75 патогенов полевых изолятов микобактерий в условиях микробиологической лаборатории, позволяющих получить жизнеспособные популяции, что свидетельствует об эффективности использованного метода реактивации. Сохранены основные характеристики полученных культур и разнообразие видов микобактерий в коллекции. Результаты проведенных исследований можно использовать для оптимизации лабораторной микробиологической диагностики туберкулеза.
Introduction. In modern microbiology, the collection and maintenance of microorganism collections in working order is one of the most important areas of practical activity in a microbiological laboratory.
Objective. To carry out reactivation of non-viable mycobacterial cultures isolated from animal biomaterial and environmental samples in liquid and solid nutrient media with a growth supplement, followed by bacteriological, molecular biological and molecular genetic typing of the recovered pathogens.
Materials and methods. The reactivation process involved inoculating the cultures in Middlebrook 7H9 liquid medium and Löwenstein – Jensen solid medium using OADC growth supplement. Subsequent mycobacteria identification was performed using time-of-flight mass spectrometry and microarray hybridization with the MYCO-BIOCHIP (Russia) test system.
Results. For the in vitro experiment, 75 mycobacterial culture samples in a non-culturable state, obtained from processed animal biomaterial and environmental specimens, were selected. A total of 46 (61.3%) cultures were reactivated, among which Mycobacterium tuberculosis (4.3%) and non-tuberculous mycobacteria of the following species were identified: slow-growing pathogenic Mycobacterium avium (65.2%) and Mycobacterium intracellulare (2.2%); slow-growing non pathogenic Mycobacterium nonchromogenicum (15.2%) and Mycobacterium monacense (2.2%); fast-growing pathogenic Mycobacterium fortuitum (4.3%) and Mycobacterium abscessus (2.2%), fast-growing opportunistic Mycobacterium neoaurum (2.2%) and Mycobacterium kyogaense (2.2%). Among the reactivated cultures, the leading role belonged to group III non-tuberculous mycobacteria according to Runyon’s classification: Mycobacterium avium, Mycobacterium nonchromogenicum, Mycobacterium intracellulare.
Conclusion. Under microbiological laboratory conditions, 46 out of 75 field isolates of mycobacteria were successfully reactivated, yielding viable cultures and demonstrating the effectiveness of the reactivation method used. The key characteristics of the obtained cultures and the species diversity of the mycobacterial collection were preserved. The results of this study can be used to optimize laboratory microbiological diagnostics of tuberculosis.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.